RNA干扰疗法降低脂蛋白a的临床研究进展

由载脂蛋白(a)[apo(a)]和载脂蛋白B100(ApoB100)组成的脂蛋白a[Lp(a)]与心血管疾病残余风险相关,但目前临床上尚缺乏降低Lp(a)的有效药物。RNA干扰(RNAi)疗法可通过小干扰RNA或反义寡核苷酸干扰apo(a)或ApoB100 mRNA的翻译,减少Lp(a)合成。现就RNAi降低Lp(a)水平的临床研究进展进行综述。

miR-15b基因干扰在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸-15b(miR-15b)基因干扰对脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法 取新生24 h内Wistar乳鼠的大脑皮层星形胶质细胞传代培养并鉴定,氧糖剥夺/再恢复法处理模拟体内脑缺血再灌注损伤(模型组);无特殊处理的大脑皮层星形胶质细胞为对照组。构建miR-15b干扰腺病毒载体及阴性对照载体,分别转染上述模型组细胞,记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组,另设置空白组。24 h后,倒置相差显微镜观察各组细胞形态学改变;氮兰四唑盐(MTS)法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率实验检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞miR-15b以及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9 mRNA表达;Western blot检测各组细胞Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达;荧光素酶报告基因实验验证miR-15b是否靶向调控Bcl-2。结果 与对照组比,空白组、过表达对照组和沉默对照组贴壁细胞减少,细胞缩小变圆,分布松散,细胞存活率和Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低,细胞活力、凋亡率、miR-15b表达、Caspase-3和Caspase-9 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与空白组和过表达对照组比,过表达组贴壁细胞减少,分布更加稀疏,可见细胞漂浮于培养液中,细胞存活率及Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,细胞活力、凋亡率、miR-15b表达、Caspase-3和Caspase-9 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与空白组和沉默对照组比,沉默组贴壁细胞增加,但仍低于对照组,细胞有轻微缩小,细胞存活率和Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高,细胞活力、凋亡率、miR-15b表达、Caspase-3和Caspase-9 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果证实miR-15b可靶向调控Bcl-2。结论 miR-15b过表达可通过线粒体途径诱导受损的神经细胞形变、凋亡,加重脑缺血再灌注损伤。

RNAi候选药物的鉴定

伴随着人们对于RNA在细胞生命活动中发挥的广泛作用的突破性发现，一系列基于RNAi(RNA interference，RNA干扰)原理的新型药物的潜能被发掘出来。介导RNAi的双链RNA分子被称之为短片段干扰RNA(short interfering RNA，siRNA)，它能够序列特异性地阻断基因的表达。由于RNAi药物在选择靶位点上具有潜在的更高的特异性，与传统药物相比，它的效率更高而毒副作用更小。