冰冻组织特定区域的RNA快速提取及其RT-PCR分析

目的 为减少RNA提取过程中不同细胞和组织间的交叉污染,提高逆转录PCR(reversetranscriptionPCR,RTPCR)结果的特异性和可靠性。 方法 建立冰冻组织特定区域的RNA快速提取及RTPCR检测技术。首先,制备5μm和20μm的连续冰冻切片,前者用于常规组织学染色和针对靶基因产物的免疫组织化学染色。依观察结果,在20μm的切片上,分离某一特定区域做快速RNA提取和RTPCR分析。结果 该方法能在1小时内完成微量组织的RNA提取,并在6小时内获得RTPCR结果。与常规RNA提取法比较,可有效排除因细胞间污染所致的假阴性或假阳性结果。结论 该方法适用于在多种类型组织混杂的标本内检测某一特定细胞群体和各群体间的基因表达以及表达差异,是对现有RNA提取和RTPCR检测技术的重要补充。

苹果锈果类病毒的几种提取方法及RT-PCR检测灵敏度的比较

以感染苹果锈果类病毒的苹果枝条为材料,利用不同的方法抽提,进行RT-PCR检测。比较了6种RNA的提取方法,结果发现:LiCl法、RNeasy plant mini kit和NA-PEX法检测效果较佳。RNeasy plant mini kit可检测到10-2,NA-PEX可检测到10-1;RNeasy plant mini kit检测效果好于NA-PEX,但价格比较贵,需要研磨;NA-PEX法组织无需液氮研磨,试剂便宜,耗时短,适合检测大批量的样品。