RNA恒温扩增实时检测技术在肺结核诊断中的价值

目的:探讨RNA恒温扩增实时检测法(SAT)在肺结核临床诊断中的应用价值。方法:对2012年12月至2013年1月沈阳市胸科医院48例肺部疾病患者痰标本采用金胺O痰涂片法将其分为阳性组19例,阴性对照组29例,应用SAT法、BD960快速培养法、TB抗体检测法同时对上述痰标本进行检测。结果:单一法SAT法的灵敏度最高,为68.40%;特异度最高的为BD960法(87.2%)。SAT+BD960联合法的灵敏度为73.70%。结论:SAT法比较灵敏度,联合检测法优于单一的SAT法和BD960法;SAT法的阳性率高于BD960法且检测周期短,所以SAT法及其联合BD960检测法可作为临床诊断结核病的有效途径。

RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定鸟分枝杆菌

目的建立RNA恒温扩增技术快速鉴定鸟分枝杆菌(RIARD-MA)的方法,评估鉴定分枝杆菌临床分离株的应用效果。方法以鸟分枝杆菌(MA)的16S rRNA的特异序列为检测靶标,设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测,对21种分枝杆菌标准株、4株非分枝杆菌和259株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测;同时以PCR测序结果为参考对照。结果 RIARD-MA可以在2 h内完成检测,能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株及4株非分枝杆菌检测中的MA,检测灵敏度达103CFU/mL;检测分枝杆菌临床分离株中MA的敏感性、特异性均可达100%。结论 RIARD-MA鉴定MA具有较高的敏感性、特异性,检测快速,有望作为一种新的MA临床分离株鉴定方法。

结核感染T细胞斑点试验联合结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测技术在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测技术(sAT-TB)检测在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值。方法选取2018年6月至2019年12月平顶山市第一人民医院收治的806例痰涂阴性肺结核患者作为观察组,经实验室细菌学、组织学、影像学、临床表现等检查确诊,选取同期100例疑似肺结核患者作为对照组,两组均接受T-SPOT.TB、sAT-TB检测。比较T-SPOT.TB、sAT-TB单独与联合检测在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值。结果T-SPOT.TB诊断真阳性733例,真阴性57例,漏诊73例,误诊43例;sAT-TB诊断真阳性540例,真阴性88例,漏诊266例,误诊12例;联合诊断真阳性799例,真阴性56例,漏诊7例,误诊44例。联合诊断痰涂阴性肺结核准确度(94.37%)、灵敏度(99.13%)、阴性预测值(88.89%)高于T-SPOT.TB(87.20%、90.94%、43.85%)、sAT-TB(69.32%、67.00%、24.86%)单独诊断,漏诊率(0.87%)低于T-SPOT.TB(9.06%)、sAT-TB(33.00%)单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05);联合诊断特异度(56.00%)、阳性预测值(94.78%)低于sAT-TB单独诊断(88.00%、97.83%),误诊率(44.00%)高于sAT-TB单独诊断(12.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论T-SPOT.TB、sAT-TB联合能有效提高痰涂阴性肺结核诊断的准确度、灵敏度、阴性预测值,降低漏诊率,但特异性较低,必要时需实施细菌培养,以降低误诊风险。

RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定偶发分枝杆菌的研究

目的建立RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定偶发分枝杆菌(RIARD-MF)的方法,评估其在鉴定分枝杆菌临床分离株中的应用效果。方法将偶发分枝杆菌的16SrRNA特异序列作为目的靶标进行检测,设计含T7启动子逆转录扩增引物和RNA探针,分别对5种非分枝杆菌细菌、20种分枝杆菌标准株和259株临床分枝杆菌分离株进行42℃恒温扩增实时检测,参考标准为PCR基因测序结果。结果RIARD-MF方法学检测灵敏度可达60CFU/mL。在25种细菌的RIARD-MF特异性检测中:只有偶发分枝杆菌检测结果为阳性,其余24种细菌均为阴性,与测序检测结果一致。在检测分枝杆菌临床分离菌株时,RIARD-MF鉴定偶发分枝杆菌5株,其余为非偶发分枝杆菌,与测序结果一致,检测灵敏度和特异度均为100%。结论 RIARD-MF鉴定偶发分枝杆菌具有较高的特异度、灵敏度和准确性,且检测快速,有望成为一种新的偶发分枝杆菌临床分离菌株鉴定方法。

RNA恒温扩增实时检测技术联合荧光定量PCR技术对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值分析

目的研究核糖核酸(RNA)恒温扩增实时检测技术和荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术联合应用于痰涂片阴性肺结核患者诊断中的临床价值。方法80例痰涂片阴性肺结核患者,在治疗前分别采用RNA恒温扩增实时检测技术、荧光定量PCR技术、两项技术联合方式对肺泡灌洗液标本进行检测。比较三种检测方法的阳性率、操作时间、确诊时间、住院时间、满意度。结果联合检测阳性率96.25%高于RNA恒温扩增实时检测技术的75.00%、荧光定量PCR技术的78.75%,差异有统计学意义(P<0.05)。RNA恒温扩增实时检测技术与荧光定量PCR技术检测的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合检测操作时间(42.19±8.10)min长于RNA恒温扩增实时检测技术的(28.16±5.08)min、荧光定量PCR技术的(26.73±6.95)min,确诊时间(1.68±0.35)h、住院时间(10.27±2.55)d短于RNA恒温扩增实时检测技术的(4.24±0.46)h、(19.76±2.51)d及荧光定量PCR技术的(4.69±0.72)h、(18.20±2.68)d,差异有统计学意义(P<0.05)。RNA恒温扩增实时检测技术与荧光定量PCR技术的操作时间、确诊时间、住院时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合检测的总满意度为96.25%,高于RNA恒温扩增实时检测技术的78.75%与荧光定量PCR技术的82.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。RNA恒温扩增实时检测技术与荧光定量PCR技术的总满意度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论RNA恒温扩增实时检测技术和荧光定量PCR技术联合应用于痰涂片阴性肺结核诊断,可缩短确诊时间,提高患者满意度,值得临床应用。

RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在儿童支原体肺炎早期诊断及疗效判断中的价值

目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝集试验检测肺炎支原体(MP)特异性抗体[MP抗体检测(MP-Ab)],并采集咽拭子标本提取MP-RNA(MP-SAT法)。对MPP患儿在完成大环内酯类药物治疗第1疗程、完成大环内酯类药物治疗第3疗程时复查MP-Ab和MP-RNA。根据MPP诊断标准将其分为MPP组(n=183)和非MPP组(n=268)。比较MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。对病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物的MPP患儿进行动态观察,考察在大环内酯类药物(阿奇霉素)治疗MP不同时间点(入院时、完成第1疗程和完成第3疗程时)MP-SAT和MP-Ab的阳性率以及患儿临床和影像学表现(咳嗽、发热、肺部体征和CT表现)变化情况。结果 MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性比较差异无统计学意义(P>0.05);病程<7 d患儿组中MP-SAT诊断MPP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均优于MP-Ab(P<0.001或P<0.05或P<0.01)。病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物治疗的MPP患儿共42例,该组患儿在入院时、完成阿奇霉素治疗第1疗程和完成阿奇霉素治疗第3疗程时,MP-SAT检测阳性率分别为88.09%(37/42)、88.09%(37/42)和9.52%(4/42);MP-Ab检测阳性率分别为26.19%(11/42)、100.00%(42/42)和100.00%(42/42),在不同时间点MP-SAT和MP-Ab阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001)。该组患儿完成第3疗程时MP-SAT阳性率较入院时明显下降(P<0.001),临床症状(咳嗽、发热)、肺部体征及肺部CT表现较入院时明显好转(均P<0.001),MP-SAT结果与临床症状、肺部体征及肺部影像学表现变化趋势相一致。结论 SAT检测MP-RNA可作为儿童MPP的早期诊断依据,同时也可作为评价MPP转归及判断临床治疗效果的指标。

RNA恒温扩增实时检测痰标本结核分枝杆菌对肺结核的诊断价值

目的:探讨RNA恒温扩增实时检测(SAT)技术检测痰标本结核分枝杆菌(MTB)对肺结核的诊断价值.方法:选择2020年8月至2022年8月本院收治的1190例可疑活动性肺结核患者为研究对象.对患者痰标本行罗氏培养、抗酸染色、SAT检测,以痰培养结果为"金标准",分析SAT检测方法的诊断价值.结果:痰培养结果明确肺结核患者990例,非肺结核患者200例;SAT检测明确肺结核患者570例,非肺结核患者620例;罗氏培养法明确肺结核患者445例,非肺结核患者745例;抗酸染色法明确肺结核患者300例,非肺结核患者890例.与罗氏培养法及抗酸染色法比较,SAT检测对于肺结核诊断灵敏度、准确度、阳性预测值及阴性预测值分别为56.97%(564/990)、63.95%(761/1190)、98.95%(564/570)、31.29%(194/620),均高于罗氏培养法及抗酸染色法,差异均有统计学意义(P<0.05);特异度各检查方法比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:SAT检测痰标本MTB对肺结核诊断具有较高的应用价值,能在较短时间内提供诊断结果,且具有较高的诊断准确度,为临床进一步诊疗提供了可靠的参考依据.

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测法诊断活动性肺结核分析

目的分析结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测法诊断活动性肺结核。方法随机选取2016年8月至2018年8月在河北省胸科医院就诊的活动性肺结核患者642例作为研究组,另随机选取同期在河北省胸科医院就诊的肺部其他疾病患者98例为对照组,运用涂片镜检法、SAT-TB法、BACTEC 960培养法检测两组患者的痰液样本。结果研究组642例患者中,180例涂片镜检法阳性,546例BACTEC 960培养法检测结核分枝杆菌阳性,480例SAT-TB法检测阳性,敏感度分别为28.04%、85.05%、74.77%。BACTEC 960培养法、SAT-TB法敏感度均高于涂片镜检法(P<0.05),而BACTEC 960培养法敏感度又高于SAT-TB法(P<0.05)。对照组98例患者中,4例BACTEC 960培养法检出阳性,特异度为95.90%,最终鉴定为非结核分枝杆菌。BACTEC 960培养法阳性患者546例中,涂片镜检法、SAT-TB法的敏感度分别为32.23%、84.25%。SAT-TB法检测550例确诊肺结核患者的敏感度、阳性预测值、阴性预测值分别为84.36%、100.00%、53.26%。结论结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测法诊断活动性肺结核价值高,值得在临床推广应用。

RNA实时荧光恒温扩增技术在检测儿童肺炎支原体肺炎中的应用

目的探索RNA实时荧光恒温扩增技术在儿童肺炎支原体肺炎中的应用意义,建立早期诊断儿童肺炎支原体肺炎的有效方法提供基础资料。方法收集284例诊断为儿童肺炎的患者,均给予相同的治疗方法,使用RNA实时荧光恒温扩增技术(SAT)检测治疗前后肺炎支原体抗体(MP-Ig G),并比较治疗前后发热时间、白细胞构成比差异。结果 MP肺炎患儿的SAT阳性率明显升高(P<0.01);随着治疗时间的延长,MP-Ig G阳性率呈增高趋势(P<0.01)。随着SAT转阴时间延长,MP肺炎患儿发热持续时间越长、中性粒细胞百分比升高,淋巴细胞百分比降低(P<0.01)。结论 SAT法是评价MP肺炎发展和愈合的有效指标。

实时荧光RNA恒温扩增技术在活动性肺结核诊断方面的效能

目的探讨实时荧光RNA恒温扩增检测技术(SAT)在活动性肺结核诊断方面的效能。方法选取2021年8月1日至2022年8月1日该院收治入院的活动性肺结核患者114例,比较荧光染色法、固体培养、GeneXpert MTB/RIF,SAT在活动性肺结核诊断方面的效能。结果以固体培养为标准,SAT的Kappa值为0.846,受试者工作特征曲线下面积为0.706。结论SAT的灵敏度最高,与固体培养法一致性极好,预测活动性肺结核诊断价值高,可用作筛查传染源的快速手段。

实时荧光多酶恒温扩增技术检测小鼠细小病毒核酸的方法建立

目的旨在建立基于实时荧光多酶恒温扩增(exo-MIRA)技术的小鼠细小病毒(MVM)核酸检测新方法。方法收集2021年1月至2022年1月南京大学医学院附属金陵医院实验动物室共75份小鼠肠道内容物标本。针对MVM VP2基因的保守区域设计4对引物,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物以筛选最优引物对,并设计特异性荧光探针,构建exo-MIRA检测法。通过检测梯度稀释模拟样本,进行检出限评价。检测其他小鼠病毒,包括仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠鼠痘病毒(Ect)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒(Reo),分析exo-MIRA法的交叉反应性。采用qPCR法和exo-MIRA法同时检测收集的75份标本,统计分析两种方法的一致性。以qPCR法为参比方法,评估该法的敏感度和特异度,进行诊断效能评价。结果采用exo-MIRA技术建立MVM核酸检测方法,该方法检测MVM的检出限为10 copies/μL,且与其他五种小鼠病毒无交叉反应,可特异性检出MVM。75份标本检出结果显示,exo-MIRA法和qPCR法高度一致,Kappa值为0.921(P<0.05),exo-MIRA法的敏感度为100.0%,特异度为96.7%。结论建立了一种基于实时荧光MIRA恒温扩增技术的MVM核酸检测方法,具有简单快速、实验要求低、敏感特异等优点。该方法可应用于现场复杂环境的即时检测,在实验动物质量检测应用上有一定前景。

微流控芯片环介导等温扩增技术检测3种猪圆环病毒

为建立快速区分3种猪圆环病毒(PCV2、PCV3和PCV4)的现场检测方法,采用微流控芯片环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取,与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测试剂盒进行灵敏度、特异性和重复性同步比对。结果显示:微流控芯片LAMP法在3种猪圆环病毒联检测试中具有非常高的灵敏度,可以在30 min内,实现不低于荧光定量PCR法的敏感性;与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒临床阳性样本均无交叉反应,特异性好;测试3种猪圆环病毒重复性Ct值变异系数(CV)均在2%以下,稳定性好。结果表明:3种猪圆环病毒微流控芯片快速联检技术特异性好、灵敏度高、重复性强,检测速度快,环境要求低,可以满足现场检测的要求,适用于养猪场等场所的猪圆环病毒现场快速检测。本方法的建立为猪相关病原体的现场快速核酸检测提供了有力工具。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值研究

探讨实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值。方法 此次研究期间,对于所有的泌尿生殖道生殖支原体感染检测患者500例均以随机原则抽选自我院;选择时间下限为2021年4月,选择时间上限为2022年5月;其中230例为女性标本;270例为男性标本;对于所有患者有无呈现出支原体感染情况合理开展实时荧光核酸恒温扩增技术检测工作。之后就淋病奈瑟菌检测结果、沙眼衣原体检测结果以及解脲脲原体结果合理实施分析。结果 对于所有的泌尿生殖道生殖支原体感染检测患者500例均以随机原则抽选自我院;其中230例为女性标本;270例为男性标本。500例样本中,最终显示为阳性结果共计35例;其中男性标本共计23例,女性标本共计12例;同女性标本阳性率展开比较,男性标本阳性率存在有意义的差异(P<0.05)。对于本次研究的500例患者,进行尿液标本采集患者305例,对具体情况展开分析,25例所得结果为阳性;对于190例患者临床合理采集其分泌物标本,对结果展开分析,9例为阳性;5例患者同时对其展开尿液标本采集以及分泌物采集工作;1例获得阳性结果;阳性支原体感染患者共计35例,分别为23例男性以及12例男性。对应的单纯支原体感染例数分别为15例以及3例。男性单纯支原体感染患者比例较于女性单纯支原体感染患者比例更高(P<0.05);而对于阳性支原体感染患者共计35例,对于年龄≤20岁患者呈现出最高的感染率。以>20~30岁年龄段次之。在年龄逐渐增长后,对应的支原体感染率呈现出明显降低,存在有意义的差异(P<0.05)。结论 临床对于泌尿生殖道生殖支原体感染在实施诊断期间,实时荧光核酸恒温扩增技术呈现出较高的一致性,获得的临床效果较好。

实时荧光环介导等温扩增快速分型致泻大肠埃希氏菌方法的建立

致泻大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)是一种重要的食源性致病菌,该研究立足DEC目前流行率高、基层分型困难的现状,建立了快速分型5种DEC的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。针对DEC的8段特征性毒力基因pic、aggR、lt、st、stx 1、stx2、escV、invE及大肠埃希氏菌属特异性基因uidA设计LAMP引物,优化反应体系,并对方法的分析性能及临床菌株分型效果进行了评价。结果显示,所建立的方法对pic和escV的检出限是1 ng/μL,对aggR、stx 1、invE和uidA的检出限是100 pg/μL,对lt、st和stx 2的检出限是10 pg/μL,该方法灵敏度与特异度均为100%,DEC型别间无交叉反应,对临床菌株的分型与实际结果完全一致。方法快速简便、设备要求低,借助恒温荧光读取设备可在40 min内迅速判定待检菌株是否为DEC及其致病类型,可满足各机构现场快速检测的需求。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术检出肺炎支原体RNA阳性儿童流行病学及实验室检查特点分析

目的了解山东地区儿童肺炎支原体(MP)感染的病原体检出率及流行特征,并分析实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检出MP-RNA阳性患儿的实验室检查特点,为临床诊断及预防提供参考。方法选取2017年1-12月山东大学附属省立医院因急性呼吸道感染诊断收入院的患儿604例,利用SAT行MP-RNA检测并对其流行病学特点及实验室指标进行分析。结果 604例患儿中MP核酸检测阳性109例,阳性率为18.0%。女性患儿MP核酸检测阳性率与男性患儿比较[22.0%(40/182)比16.4%(69/422)],差异无统计学意义(P>0.05)。0~3岁、4~7岁、8~14岁患儿MP核酸阳性率分别为10.6%(46/436)、41.2%(49/119)、28.6%(14/49),不同年龄患儿间MP核酸阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。春季(3~5月)、夏季(6~8月)、秋季(9~11月)、冬季(12~2月)收治患儿MP核酸阳性率分别为9.0%(13/144)、17.1%(19/111)、29.6%(60/203)、11.6%(17/146),不同季节患儿MP核酸阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。109例MP核酸阳性患儿中C反应蛋白升高44例(40.4%),正常65例(59.6%)。109例MP核酸阳性患儿血常规异常主要表现为白细胞计数升高(53例,占48.6%)、红细胞计数降低(30例,占27.5%)、血红蛋白降低(47例,占43.1%)、血小板计数升高(59例,占54.1%),其中有7例MP核酸阳性患儿血常规正常。109例核酸阳性患儿中36例送检细胞免疫功能,其中17例细胞免疫功能正常;3例CD16+CD56+升高,7例降低;15例CD19+升高,1例降低;5例CD3+降低;11例CD3+CD4+降低;2例CD3+CD8+升高。结论 MP感染与年龄和季节有很大关系,与性别的关系不大,根据本地区的发病特点,制定必要的预防措施对疾病的防治有很大帮助;MP-RNA检测能够及时准确地判断MP的感染情况,其他实验室检查能为MP的诊断提供参考,对更加深入地了解MP有一定帮助。

多任务实时声音事件检测卷积模型与复合数据扩增

现有的声音事件检测研究多为对离线音频进行分析,且模型参数量较多、计算效率低,不适用于实时检测。提出一种面向多任务实时声音事件检测的轻量化卷积神经网络模型,它将唤醒与检测任务整合成多任务学习框架,此外模型的卷积结构联合了稠密连接、Ghost模组与SE注意力机制;另外还提出了一种复合数据扩增方法,将音频变换、随机裁剪与频谱掩蔽相结合。实验结果显示,该模型在ESC-10和Urbansound8K数据集上的平均预测准确率高于当前新型的基线模型2%以上,同时模型的参数和内存更少。研究表明,多任务学习的方式节省了计算量,又因为卷积结构复用了中间层特征,模型可以快速地反馈检测结果。另外,复合数据方法相比传统方法使模型获得了更好的性能和鲁棒性。

实时荧光核酸恒温扩增试验和定量反转录-聚合酶链反应对血清乙型肝炎病毒RNA定量检测的一致性评价

为评价实时荧光核酸恒温扩增试验(simultaneous amplification testing,SAT)与定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清样本中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)RNA的相关性与一致性,本研究收集了在复旦大学附属公共卫生临床中心就诊的212例患者的血清样本,其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者HBV DNA≥100 IU/mL 81例、HBV DNA<100 IU/mL 76例,以及作为对照的非HBV感染患者55例。采用SAT和qRT-PCR方法分别检测所有血清样本中的HBV RNA,对检测结果进行统计学分析。在HBV DNA≥100 IU/mL的CHB患者中,SAT和qRT-PCR的HBV RNA阳性检出率均为95.06%(77/81)。2种方法具有较好的相关性与一致性(R 2=0.803和CCC=0.882)。Bland Altman分析显示绝对偏倚为0.1 log copies/mL,相对偏倚为0.97%。配对t检验显示,结果无统计学差异(t=1.617,P=0.110)。在HBV DNA<100 IU/mL的CHB患者血清样本中,HBV RNA阳性检出率不同,SAT为98.68%(75/76),qRT-PCR为88.16%(67/76),2种方法相关性与一致性较差(R 2=0.326和CCC=0.438)。Bland Altman分析显示绝对偏倚为0.5 log copies/mL,相对偏倚为0.86%。配对t检验显示,结果有统计学差异(t=3.654,P<0.001)。在非HBV感染对照患者中,SAT和qRT-PCR均未检出HBV RNA阳性。结果提示,在HBV DNA≥100 IU/mL的CHB患者中应用SAT与qRT-PCR检测血清HBV RNA,其相关性与一致性较好,在HBV DNA<100 IU/mL的CHB患者中相关性与一致性存在一定差异。

基于变性泡介导的加速链交换扩增技术在新型冠状病毒核酸检测中的性能分析

运用变性泡介导的加速链交换扩增技术,建立一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测的新方法。收集潍坊市第二人民医院检验科1492例疑似SARS-CoV-2样本,以荧光定量PCR结果为参考,计算ASEA-SARS-CoV-2核酸检测试剂盒检测新型冠状病毒样本结果的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果表明:ASEA可在30min内完成核酸扩增,检测限为1000拷贝·mL^(-1)。敏感性为96.7%,特异性为99.9%。该方法可在30min内检测SARS-CoV-2,而之前报道的传统qPCR方法需要数小时。建立了一种基于变性泡介导的加速链交换扩增技术检测新型冠状病毒的新方法。

RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的价值分析

目的分析RNA实时荧光核酸恒温扩增(SAT)检测技术在结核病诊断中的价值。方法 400例疑似肺结核病患者,采取RNA实时扩增检测试剂盒进行检测,并选择痰菌培养及痰涂片进行比较,鉴定阳性菌株。结果以临床诊断结果为金标准,RNA实时荧光核酸恒温扩增检测出结核病患者阳性133例,涂阳患者61例,涂阴72例,敏感度为72.68%,特异度为98.62%。实时荧光核酸恒温扩增检测的符合率为86.75%,显著高于痰分枝杆菌的培养(69.75%)和痰抗酸杆菌涂片(67.50%),对比差异具有统计学的意义(P<0.05)。其中实时荧光核酸恒温扩增检测的3例非阴性阳性,涂片均为阳性。183例诊断结果为肺结核的患者中,涂阳培阳患者实时荧光核酸恒温扩增检测检出率为100.00%,涂阴培阳患者检出率为78.95%,涂阴培阴患者检出率为56.00%,涂阳培阴患者检出率为40.00%。结论 RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在检测肺结核病具快速、便捷、经济和高敏感度等特点,该方法值得在临床的结核筛查中进行应用。