细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA在急性髓细胞性白血病中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)在急性髓细胞性白血病(AML)中的表达及与患者临床特征的关系。方法选取82例AML患者,作为观察组,依据患者病情分为初治组(n=53)、缓解组(n=19)和复发组(n=10),另选取31例非血液病健康者,作为对照组。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测各组受试者骨髓ANRIL m RNA的相对表达量,并分析其与AML患者临床特征的关系。结果观察组、初治组、缓解组、复发组患者骨髓ANRIL mRNA的相对表达量均明显高于对照组(P﹤0.01)。复发组患者骨髓ANRIL m RNA相对表达量明显高于缓解组和初治组(P﹤0.01),缓解组患者骨髓ANRIL mRNA的相对表达量明显低于初治组(P﹤0.01)。血小板计数﹤20×10^(9)/L、疾病进展、预后未缓解或缓解后再复发AML患者骨髓ANRIL mRNA相对表达量分别明显高于血小板计数≥20×10^(9)/L、疾病无进展、预后缓解患者(P﹤0.01)。结论ANRIL在AML患者中高表达,其表达水平能反映患者的疾病严重程度,可指导临床诊疗。

CyclinE反义RNA抑制乳腺癌细胞增殖及p21^(waf1)转录水平

利用反义RNA抑制基因表达的技术 ,发现cyclinE基因在表达受到抑制后 ,乳腺癌细胞增殖速率和致瘤性明显下降 ,结果还表明cyclinE基因的抑制 ,可使p2 1waf1的转录水平上升 ,由此说明cyclinE的异常与乳腺癌的发生有着密切的关系 ,在细胞周期调控上 p2 1waf1的转录受到cyclinE表达水平的明显影响 .

沉默lncRNA ST7-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

目的:探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)致癌性抑制基因7反义RNA1(ST7-AS1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:肝癌细胞系HCCLM3分成Control组、Vector组、ST7-AS1组、sh-NC组、sh-ST7-AS1组和sh-ST7-AS1+Wnt/β-catenin通路激动剂(SKL2001)组。结果:与Control组比较,ST7-AS1组HCCLM3细胞的吸光度(A570)值及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vemintin)、Wnt1和β-catenin的表达升高,克隆数量和迁移、侵袭数目增多,上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和GSK-3β的表达降低(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001可部分逆转沉默ST7-AS1对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。结论:沉默ST7-AS1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

结直肠癌组织中lncRNA TUSC7与miR-1270表达的相关性及临床病理意义

目的:探究结直肠癌(CRC)组织中长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤抑制候选基因7(TUSC7)与微小RNA-1270(miR-1270)的相关性及二者与CRC患者预后的关系。方法:lnCAR数据库检索lncRNA TUSC7在CRC和正常结直肠组织中的表达情况。选取2018年6月至2019年1月本院收治的130例CRC患者为研究对象,收集手术切除的CRC和癌旁组织,检测CRC和癌旁组织中lncRNA TUSC7、miR-1270表达水平;分析CRC组织中lncRNA TUSC7表达水平与miR-1270相关性;分析CRC组织lncRNA TUSC7、miR-1270表达水平与CRC临床病理特征和预后关系。生物信息学网站预测lncRNA TUSC7与miR-1270的关系。结果:lnCAR数据库分析显示,lncRNA TUSC7在CRC组织中的表达水平低于正常结直肠组织(P<0.05);qRT-PCR结果显示,CRC组织中lncRNA TUSC7表达水平低于癌旁组织(P<0.05),miR-1270表达水平高于癌旁组织(P<0.05);CRC组织lncRNA TUSC7、miR-1270表达水平与分化程度、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期相关(P<0.05);生物信息学分析显示,lncRNA TUSC7与miR-1270存在靶向结合位点;CRC组织中lncRNA TUSC7表达水平与miR-1270呈负相关(r=-0.578,P<0.05);lncRNA TUSC7低表达组、miR-1270高表达组CRC患者累积生存率低于lncRNA TUSC7高表达组、miR-1270低表达组(P<0.05)。结论:CRC组织中lncRNA TUSC7表达下调,miR-1270表达上调,二者呈负相关,为临床诊治CRC、评估CRC患者预后提供新标志物。

lncRNA ANRIL和VEGF在原因不明复发性流产绒毛中表达

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)和血管内皮生长因子(VEGF)在原因不明复发性流产(URSA)患者绒毛中的表达。方法:选取2017年8月-2019年6月在本院就诊的URSA患者62例(观察组),同期行人工流产术的正常早孕者62例(对照组)。观察组行清宫手术、对照组行人工流产术时采集新鲜胎盘绒毛组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测绒毛组织中lncRNA ANRIL、VEGF mRNA表达水平;Pearson法分析URSA患者绒毛组织中lncRNA ANRIL和VEGF mRNA表达水平的相关性;采用多因素logistic回归分析影响URSA发生的因素。结果:观察组绒毛组织中lncRNA ANRIL(0.74±0.20)、VEGF mRNA(0.30±0.09)表达水平均低于对照组(1.00±0.25、1.00±0.18)(P<0.05),lncRNA ANRIL与VEGF mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.484,P<0.05),lncRNA ANRIL、VEGF mRNA表达水平均为影响URSA发生的保护因素(P<0.05)。结论:URSA患者绒毛组织中lncRNA ANRIL和VEGF表达水平均显著下调且密切相关,可能共同影响疾病发生。

CDKN2B-AS1基因多态性与子宫内膜异位症的相关性研究

目的:研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B-反义RNA(CDKN2B-AS1)基因多态性与子宫内膜异位症(EM)的相关性。方法:选择2017年12月至2019年7月邯郸市中心医院和河北医科大学第四医院收治的子宫内膜异位症的患者112例为病例组,另取同期因宫外孕、输卵管黏连等手术患者112例为对照组,采用DNA PCR测序法检测所有受试者血液CDKN2B-AS1基因多态性,分析CDKN2B-AS1基因rs10965235位点多态性与EM临床分期的关系,采用Logistic回归分析CDKN2B-AS1基因多态性对EM易感性的影响。结果:病例组与对照组年龄、BMI、月经周期、CDKN2B-AS1 rs4977574位点等位基因A与G、AA与AG+GG基因型频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。CDKN2B-AS1基因rs4977574位点与AA基因型比较,AG+GG基因型与EM易感性无关(OR=1.105,95%CI:0.819-1.491;P=0.124)。与对照组比较,病例组CDKN2B-AS1基因rs10965235位点等位基因C、CC基因型频率高,等位基因A、CA+AA基因型频率低(χ2=4.397、4.075,P=0.036、0.044),差异有统计学意义。与Ⅰ~Ⅱ期比较,III^IV期EM患者CDKN2B-AS1基因rs10965235位点CC基因型频率高、CA+AA基因型频率低,差异有统计学意义(χ2=5.168,P=0.023)。CDKN2B-AS1基因rs10965235位点,与CC基因型比较,携带CA+AA基因型可降低EM易感性(OR=0.564,95%CI:0.347-0.917,P=0.000)。结论:CDKN2B-AS1基因rs4977574位点与EM易感性无关,rs10965235位点基因多态性与中国北方女性EM易感性有关。

ANRIL表达水平与妊娠期糖尿病的相关性分析

目的:分析细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)表达水平与妊娠期糖尿病(GDM)的相关性。方法:选择2019年7月-2020年6月于本院产科进行产检并分娩的妊娠期妇女122例,根据孕24~28周口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结果是否异常将其分为OGTT异常组(n=61)和OGTT正常组(n=61)。比较两组血清激素[雌二醇(E2)、孕酮(P)]水平以及lncRNA ANRIL表达水平,分析lncRNA ANRIL表达水平与GDM患者激素水平的相关性。结果:两组孕期体重增加、FPG、餐后1 h血糖、餐后2 h血糖比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。OGTT异常组血清E2、P水平均显著高于OGTT正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。OGTT异常组血清lncRNA ANRIL mRNA表达水平显著高于OGTT正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,血清lncRNA ANRIL mRNA表达与GDM患者E2、P水平均呈明显正相关(P<0.05)。logistic回归模型分析结果显示,lncRNA ANRIL是影响GDM发生的危险因素(P<0.001)。结论:GDM患者lncRNA ANRIL表达水平显著升高,并与激素水平呈显著正相关,lncRNA ANRIL表达升高可能是机体抵抗胰岛功能的影响因素。

血清ANRIL和miR-122在隐匿性乙型肝炎病毒感染中的表达关系研究

目的探讨细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)、微小RNA-122(miR-122)在隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染鉴别诊断中的应用价值。方法选取2019年2月至2021年1月宁夏医科大学总医院感染科收治的20例隐匿性乙型肝炎患者为隐匿性乙型肝炎组;选取同期住院治疗的80例慢性乙型肝炎患者作为慢性乙型肝炎组;另同期选取80例健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清ANRIL、miR-122水平,PCR结合荧光探针的体外DNA扩增技术检测血清HBV DNA载量,全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;分析隐匿性乙型肝炎患者血清ANRIL、miR-122与TBil、ALT、AST、HBV DNA载量的相关性;分析血清ANRIL、miR-122鉴别诊断隐匿性乙型肝炎的价值;分析影响隐匿性乙型肝炎发生的因素。结果慢性乙型肝炎组ANRIL、TBil[(42.94±7.85)mol/L]、ALT[(236.48±40.76)U/L]、AST[(193.26±45.78)U/L]水平高于隐匿性乙型肝炎组[(25.64±6.35)mol/L、(32.74±7.15)U/L、(29.36±7.24)U/L]和健康对照组[(22.46±4.68)mol/L、(26.95±7.03)U/L、(19.46±6.13)U/L],HBV DNA载量高于隐匿性乙型肝炎组[(6243.58±1006.74)VS(3.95±1.09)],miR-122(0.43±0.12)低于隐匿性乙型肝炎组(0.69±0.21)和健康对照组(1.02±0.23)(P<0.05);隐匿性乙型肝炎组(1.53±0.37)血清ANRIL高于健康对照组(1.01±0.21),miR-122低于健康对照组(P<0.05)。隐匿性乙型肝炎患者血清ANRIL与miR-122呈负相关(r=-0.597,P<0.05),且ANRIL(miR-122)与TBil、ALT、AST、HBV DNA载量均呈正(负)相关(P<0.05)。血清ANRIL、miR-122及二者联合鉴别诊断隐匿性乙型肝炎的曲线下面积(AUC)分别为0.901、0.887、0.941,特异度分别为91.2%、73.8%、96.3%,敏感度分别为85.0%、95.0%、90.0%。ANRIL是影响隐匿性乙型肝炎发生的独立危险因素(P<0.05),miR-122是影响隐匿性乙型肝炎发生的保护因素(P<0.05)。结论隐匿性乙型肝炎患者血清ANRIL表达水平升高,miR-122表达水平降低,二者对鉴别诊断隐匿性乙型肝炎有良好的特异度和敏感度。

肝癌组织LncRNA TINCR和ANRIL表达水平及其与患者预后的关系

目的探讨肝癌组织长链非编码RNA(LncRNA)组织分化诱导非蛋白质编码RNA(TINCR)和细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2010年7月至2012年11月本院进行手术切除的68例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用RT-PCR方法检测肝癌组织和癌旁组组中LncRNA TINCR和ANRIL相对表达量,分析LncRNA TINCR和ANRIL表达与患者临床病理特征及生存率的关系。结果肝癌组织中TINCR和ANRIL相对表达量均显著高于癌旁组织(P<0.05);TINCR表达量与患者肿瘤大小、肿瘤分化程度及TNM分期有关,ANRIL表达量与患者肿瘤大小和TNM分期有关;TINCR高表达患者无瘤生存率及5年总生存率均显著低于TINCR低表达患者(P<0.05);ANRIL高表达患者无瘤生存率及5年总生存率均显著低于ANRIL低表达患者(P<0.05);肿瘤大小、TINCR高表达和ANRIL高表达是影响肝癌患者预后的危险因素。结论肝癌组织中TINCR和ANRIL表达显著上调,可能参与肿瘤进展过程,与患者预后密切相关。

葡萄卷叶伴随3型病毒和葡萄A病毒的多重检测及其系统进化分析

葡萄卷叶伴随3型病毒(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)和葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Himrod’)中不同组织内病毒的相对积累量,结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的cDNA为模板,优化了RT-PCR多重扩增体系,可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染GLRaV-3与GVA的‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Fujiminori’)中,分别克隆了GLRaV-3外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长序列和GVA部分基因组区域序列,后者包括CP基因的部分序列与病毒RNA沉默抑制子(viral suppressor of RNA silencing,VSR)基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进化研究表明,不同GLRaV-3分离物的CP高度保守;而‘藤稔’葡萄的GVA分离物包含多种变异株,具有准种病毒的特点。