16S rRNA基因序列法鉴定幽门螺杆菌细菌种属

目的:应用分子生物学方法(16Sr RNA基因核酸碱基序列比较分析法)鉴定感染幽门螺杆菌细菌种属.方法:13C呼气试验阳性志愿者同意情况之下进行采样,分离和培养,通过快速尿素酶试验初步鉴定,利用聚合酶扩增反应获得的plasmid DNA送到Bioneer公司进行分析.反馈结果用Seq MAN(Version5.00;DNASTAR,Inc,Madison,WI,USA)系统分析,利用Gen Bank等数据库比较核酸碱基序列分析.结果:鉴定出12种幽门螺杆菌菌株结论:相同性99%.以上,判定是幽门螺杆菌的同一种属细菌.

马铃薯块茎RNA提取及RT-PCR法克隆酸性转化酶基因

马铃薯块茎由于富含多糖和酚类物质造成RNA提取难度大。通过在SDS-phenol提取缓冲液中加入2%PVP及10mmol/L半胱氨酸以除去大量的酚类物质,利用改进后的SDS-酚法提取的马铃薯块茎总RNA电泳结果表明,总RNA质量高于未经改进的方法。并进行RT-PCR克隆与马铃薯块茎低温糖化反应过程密切相关的块茎酸性转化酶(acidinvertase)基因,经核酸序列对比分析,与公布的已知序列具有98.96%的同源性,为利用反义技术抑制酸性转化酶活性进行马铃薯块茎抗低温糖化研究作好了准备工作。

一株宽宿主谱大肠埃希菌噬菌体的RNA比较分析及其环境微生物杀灭效应观察

目的通过比较研究一株分离自医院污水的宽宿主范围大肠埃希菌(E.coli)噬菌体与野生型单一宿主谱E.coli噬菌体的核酸序列和微生物杀灭效应等生物学特性的改变探讨噬菌体识别特异性机制和将噬菌体作为生物消毒剂应用于环境污水净化的可行性。方法采用抗体沉淀盐酸胍一步法分别提取单一宿主谱E.coli噬菌体f2株及宽宿主谱E.coli噬菌体株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度;采用简并引物逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及随机引物随机扩增多态性DNA(RAPD)PCR比较分析噬菌体宿主谱改变时核酸序列组成的变化;通过以上两噬菌体对环境样本中活菌和E.coli的杀灭效果的观察,比较分析宿主谱改变对噬菌体的微生物杀灭效应这一生物学特性的影响。结果噬菌体核酸分析试验证实,f2噬菌体及宽噬噬菌体均为6000bp左右的单链RNA噬菌体。RAPDPCR结果显示,两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPDDNA片段有明显的差异,其中26条为可区分的DNA带型。利用简并引物进行的RTPCR反应显示,噬菌体f2cDNA在450bp附近出现重复性较好的扩增片段,而宽噬噬菌体cDNA在相同条件下未出现扩增产物。环境水样本微生物杀灭试验结果显示,宽宿主谱株噬菌体对环境水样本中的E.coli杀灭率为36.75%～56.28%,对水样本中活菌杀灭率为30.84%～47.96%;而噬菌体f2对环境水?