不同温度和不同放置时间对总RNA提取浓度和纯度的影响

目的:探索一种提高总RNA提取浓度的方法。方法 :用Trizol方法分别提取乳腺癌细胞和心肌组织中的总RNA。在提取过程中,分别把加入异丙醇后的混合液8等份,其中4个样品管分别在室温、4℃、-20℃、-80℃下放置10min,另外4个样品管在-80℃冰箱中分别放置0.5、1、2、4h;然后检测提取到的总RNA质量浓度、纯度及完整性。结果:均放置10min时,提取的总RNA质量浓度随放置温度的降低而增加(P≤0.01);放置于-80℃时,随放置时间的增加,提取的总RNA浓度增加(P≤0.01)。两种条件下提取的总RNA的纯度均无显著性差异(P>0.05),其完整性也无明显影响。结论:不同的放置时间和温度会影响RNA提取的质量浓度,但对RNA纯度和完整性无明显影响。

从动物组织提取高纯度总RNA方法的改进及应用

从动物组织中提取总RNA是现代分子生物学研究中经常使用的重要实验技术,按常规方法获得的总RNA产品中常伴有大分子量染色体DNA污染。为此,我们摸索出了保证RNA制品纯度、质量和产量的DNA酶消化最佳反应条件。利用改良后的方法提取了小鼠脏器组织总RNA,进行了新基因mPC-1在小鼠脏器中表达的组织分布研究。

一种高质量麦冬总RNA的提取方法

本方法采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿/异戊醇反复抽提、LiCl沉淀,以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,用DNase处理去除DNA污染,最后用无水乙醇沉淀获得总RNA。该方法不仅能获得完整性好、纯度高的总RNA,而且操作简单、成本低廉、RNA产率高,对富含次生物质的中草药材植物组织总RNA的提取具有借鉴意义。

水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA提取方法的探讨

为建立水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA最佳的提取方法,以5叶期水稻品种合江19为提取总RNA的材料,对Trizol法和两种改良Trizol法提取的水稻叶片总RNA纯度和完整性进行了比较研究。基因定量仪检测结果表明,Trizol法、改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ提取的RNAOD(260/280)分别为1.529、1.755和1.991;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,改良Trizol法Ⅱ提取的RNA具有28 s、18 s和5 s 3条清晰的条带,且无降解,而其他两种方法提取的RNA质量较差,均有降解。该研究结果说明改良Trizol法Ⅱ提取的RNA完整性好和纯度较高,该方法优于Trizol法。

RNA质量对内参基因选择和qRT-PCR结果评价的影响

目的:研究RNA质量对内参基因选择和实时定量PCR(qRT-PCR)分析肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导基因表达结果评价的影响。方法:用TNFα刺激体外培养的小鼠血管内皮细胞,采用qRT-PCR技术,以2种常用的管家基因β-actin和GAPDH为内参,检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因的表达,探讨RNA纯度对TNFα下游基因表达检测结果的影响。结果:当提取的总RNA纯度很高(D260nm/D230nm>2.0)时,以β-actin和GAPDH为内参基因检测ICAM-1基因表达的结果相近;当总RNA可能被盐及小分子污染(D260nm/D230nm<2.0)时,以β-actin为内参基因检测的ICAM-1基因相对表达量显著高于以GAPDH为内参所得结果。结论:RNA质量显著影响荧光定量PCR对基因表达的检测结果,因此在RNA质量较低时应选择2个或以上内参基因进行校正,以减少实验结果误差,得到准确结果。

牦牛乳RNA的完整性及其硬脂酰去饱和酶(SCD1)基因表达分析

对牦牛乳进行不同的处理及加工后,提取牦牛乳中的总RNA进行质量浓度、纯度和完整性的检测,进行逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),为牦牛乳样品的采集与保存RNA提供依据,是一种较好的非侵染方法。结果显示:40,50,60,70,80,90℃加热30 min后牦牛乳中总RNA的质量浓度和纯度较新鲜牦牛乳有显著差异;2016年4~9月采集的牦牛乳-20℃保存至2017年4月时牦牛乳中总RNA的质量浓度和纯度较新鲜牦牛乳有显著差异;牦牛乳冻干粉与牦牛乳酪中总RNA的质量浓度和纯度较新鲜牦牛乳也有显著差异。三种不同的处理及加工下牦牛乳中总RNA在1%的琼脂糖凝胶电泳中均未跑出条带。但40,50,60,70℃加热牦牛乳30 min,以及2016年各月份采集的牦牛乳保存较长和牦牛乳冻干粉中SCD1基因的扩增条带均清晰整齐,适用于进行后续的分子生物学试验。

牦牛乳Halloumi奶酪工艺优化及理化特性研究

以牦牛乳与荷斯坦牛乳为原料,通过牦牛乳与荷斯坦牛乳比例、氯化钙添加量、凝乳酶添加量、凝乳温度、热烫温度做单因素试验,以产率为评价指标进行四因素三水平正交试验,即牦牛乳与荷斯坦牛乳比例、氯化钙添加量、凝乳酶添加量、热烫温度,得到Halloumi奶酪最佳生产工艺为牦牛乳与荷斯坦牛乳比例4∶1、氯化钙添加量0.04 g/100 m L、凝乳酶添加量0.003 g/100 m L、热烫温度65℃。选取圆柱探头TA3/100,夹具TA-RT-KIT,测试速度为0.5 mm/s,返回速度为0.5 mm/s,形变量为50%的参数下测得单因素试验与正交试验产品的质构。制得的Halloumi奶酪水分含量26.04%,脂肪含量38.81%,pH 7.40,蛋白质含量30.16%。

不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响

目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。