蚕豆萎蔫病毒纯化和病毒蛋白质及RNA组份分析

属蚕豆萎蔫病毒（ＥＢＷＶ）血清Ⅱ型的分离物Ｂ－９３４接种昆诺黎，采收的病叶先用含蔗糖的高浓度磷酸钾盐缓冲液，后用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理，成功地提取到了大量病毒粒子，提纯病毒得率为１３４ｍｇ／ｋｇ病叶。提纯病毒在电镜下可观察到大量球状病毒粒子，直径约２５ｎｍ。提纯的ＢＢＷＶ经甘油梯度超离心后可观察到３个组份，分别称Ｔ、Ｂ和Ｍ组份，其中Ｔ为空壳蛋白，Ｂ和Ｍ为核蛋白。各组份经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，证明其外壳蛋白均由两条多肽链组成，分子量分别为４２．５ｋＤ和２１．２ｋＤ。病毒颗粒中ＲＮＡ组份分析及病叶组织中ｄｓＲＮＡ分析均表明，ＢＢＷＶ病毒基因组由两条单链ＲＮＡ分子组成，分子量约为２．２×１０￣６和１．５×１０￣６。电泳分析表明，ＢＢＷＶ病毒粒子电泳后产生类似于豇豆花叶病毒组（Ｃｏｍｏｖｉｒｕｓｅｓ）的两个电泳型。

自然人群子宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组份基因的表达及临床意义

目的调查深圳市人群宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组份（hTERC）基因的表达，探讨其与人乳头瘤病毒（HPV）感染、宫颈脱落细胞学异常及宫颈上皮内瘤变（fiN）之间的关系。方法以深圳市某社区30—59岁智力正常的妇女388人为研究对象，同步进行宫颈脱落细胞的液基细胞学检查、HC-Ⅱ法高危型HPV（HR-HPV）检测和荧光原位杂交（FISH）法hTERC基因检测。对于细胞学为ASCUS及以上病变，及／或HR—HPV阳性者，及／或hTERC有扩增者均行阴道镜下宫颈四象限多点活检并病理诊断。结果经病理确定CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及宫颈癌例数分别为55（14．18％）、4（1．03％）、9（2．32％）和1（0．26％），宫颈脱落细胞的hTERC扩增率为8．76％。hTERC扩增在有／无HPV感染及不同细胞、组织学类型者存在差别：（1）HPV阳性率为17．01％；hTERC扩增在HPV阳性与阴性组分别为19．70％与6．52％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）hTERC扩增在细胞学无宫颈上皮内瘤变（NILM）组为5．97％、ASCUS18．75％、LSIL10．00％、ASC—H66．67％、HSIL100．00％；在HSIL及以上病变组扩增率明显升高（P〈0．01）。（3）在宫颈活检组织学正常／炎症的妇女中无一例出现hTERC扩增（0／11），组织学为不同程度宫颈病变妇女的扩增率分别为CINⅠ5．45％、CINⅡ50．00％，CINⅢ77．78％、浸润癌100．00％；CINⅡ及以上病变妇女的扩增率明显升高（P〈0．01）。结论hTERC的扩增与宫颈细胞学和组织学异常密切相关，其扩增率随宫颈病变程度的加重而增加，hTERC扩增与否有可能作为判断有无高度宫颈上皮内瘤变及估计预后的指标之一。