糖尿病肾病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p与白蛋白尿短期进展及预后的关系

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA KCNQ1反向链/反义转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-192-5p(miR-192-5p)与白蛋白尿短期进展及预后的关系。方法选取2021年4月—2022年12月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院内分泌风湿免疫科收治的DN患者102例为观察组,根据2次检测(间隔6个月)24 h尿白蛋白及SCr水平分为未进展亚组(n=78)和进展亚组(n=24),根据随访1年预后情况分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=18),选择同期医院健康体检者58例为健康对照组。采用qRT-PCR检测血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p相对表达量;Pearson法分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p的相关性;多因素Logistic回归分析患者白蛋白尿短期进展的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA KCNQ1OT1,miR-192-5p对患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=17.619/<0.001、16.120/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.698/<0.001、9.485/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组患高血压比例降低及FPG、HbA_(1c)、BUN、SCr升高,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=9.835/0.002,t/P=2.593/0.011、2.356/0.020、4.582/<0.001、3.139/0.002);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.602/<0.001,9.380/<0.001);LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p呈负相关(r/P=-0.452/<0.001);高血压、血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高为患者白蛋白尿短期进展的危险因素[OR(95%CI)=1.532(1.058~2.219)、1.638(1.100~2.438)],miR-192-5p水平升高为患者白蛋白尿短期进展的保护因素[OR(95%CI)=0.671(0.517~0.871)];LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p以及二者联合预测患者预后的AUC分别为0.808、0.822、0.896,联合预测显著优于各自单独预测(Z/P=2.030/0.042、2.116/0.034)。结论DN患者血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低,两者均为DN患者发生白蛋白尿短期进展的影响因素,且对患者预后具有一定辅助预测价值。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

lncRNA RBM5-AS1在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA结合基序蛋白5-反义链1(lncRNA RBM5-AS1)在急性髓系白血病(AML)中的表达及其临床意义。方法选取2017年1月—2019年1月南阳市中心医院AML患者72例(AML组),其中经化疗得到完全缓解(CR)43例(AML-CR组);另选取缺铁性贫血患者45例(贫血组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组骨髓lncRNA RBM5-AS1水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA RBM5-AS1对AML的诊断价值;采用Kaplan-Meier曲线分析lncRNA RBM5-AS1水平与AML患者预后的关系;采用Cox回归分析评估AML患者预后的影响因素。体外培养人AML细胞系HL-60,并将其随机分为对照组、sh-NC组、sh-lncRNA RBM5-AS1组,采用RT-qPCR检测各组HL-60细胞中lncRNA RBM5-AS1水平;采用CCK-8和Transwell试验检测各组HL-60细胞的增殖、侵袭、迁移情况;采用免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白(Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1)表达。结果AML组lncRNA RBM5-AS1表达高于AML-CR组和贫血组(P<0.05),AML-CR组与贫血组lncRAN RBM5-AS1表达差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,lncRNA RBM5-AS1诊断AML的曲线下面积为0.853,敏感性为87.50%,特异性为84.40%。根据AML患者lncRNA RBM5-AS1水平的平均值分为高表达组(37例)和低表达组(35例),2个组法美英合作组(FAB)分型、骨髓原始细胞比例、白细胞计数差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNARBM5-AS1高表达组3年累计生存率显著低于低表达组(P<0.05)。多因素分析结果显示,FAB分型M4和M5型、lncRNA RBM5-AS高表达是影响AML患者预后的危险因素(P<0.05)。干扰lncRNA RBM5-AS1表达后,HL-60细胞的增殖、侵袭、迁移能力和Wnt5a、β-catenin、c-Myc、CyclinD1蛋白表达均被抑制(P<0.05)。结论AML患者骨髓中lncRNA RBM5-AS1水平呈高表达,可能通过调控Wnt/β-catenin通路影响细胞的增殖、迁移和侵袭,在AML诊断和预后评估中有一定的作用。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

长链非编码RNA SBF2-AS1通过miR-372-3p/CDK6轴调控肝癌细胞侵袭及增殖

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA1(lnc RNA SBF2-AS1)调控mi R-372-3p/细胞分裂蛋白激酶6(CDK6)轴对肝癌细胞侵袭及增殖的影响。方法以Bel7402和SK-hep1细胞为研究对象,上调或下调SBF2-AS1、miR-372-3p及CDK6表达水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞中miR-372-3p及CDK6表达水平。双荧光素酶报告基因实验分别验证SBF2-AS1和miR-372-3p、miR-372-3p和CDK6靶向关系。CCK-8、集落形成实验、Transwell、细胞周期实验及流式细胞术分析细胞增殖、集落形成、迁移/侵袭能力、细胞周期活动及凋亡。结果SBF2-AS1在肝癌细胞中高表达(P<0.05)。敲降SBF2-AS1后,Bel7402和SK-hep1细胞侵袭、增殖能力降低(P<0.05)。敲降miR-372-3p后,Bel7402细胞侵袭、增殖能力升高,同时敲降SBF2-AS1后,可反转上述效应(P<0.05)。miR-372-3p靶向CDK6并抑制后者的表达,过表达SFB2-AS1,可反转上述效应(P<0.05)。过表达CDK6,可以逆转过表达miR-372-3p对Bel7402细胞侵袭及增殖的抑制。结论lncRNA SBF2-AS1通过miR-372-3p正向调控CDK6的表达,改变肝癌细胞的周期活动,影响肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

LncRNA NEAT1通过调节miR-125b-5p/IGFBP5轴对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、迁移的实验研究

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)通过调节微小核糖核酸(micro RNAs,miR)-125b-5p/胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulinlike growth factor binding protein 5,IGFBP5)轴对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测血管瘤组织(2016年3月~2019年3月收集,n=18)、瘤旁组织样本(2016年3月~2019年3月收集,n=18)以及人脐静脉内皮细胞HUVES,人血管瘤内皮细胞HemECs,HDEC中NEAT1,miR-125b-5p及IGFBP5蛋白表达。构建沉默NEAT1,同时沉默NEAT1和miR-125b-5p的HemECs细胞系,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、台盼蓝染色、流式细胞术、划痕愈合实验、Western blot分别观察NEAT1和miR-125b-5p对HemECs细胞增殖、凋亡、迁移及IGFBP5,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达的影响;双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1与miR-125b-5p,mi R-125b-5p与IGFBP5的关系。结果 与瘤旁组织比较,血管瘤组织中NEAT1(2.87±0.22 vs 1.00±0.00),IGFBP5蛋白(1.45±0.14 vs 0.27±0.02)表达水平升高,miR-125b-5p(0.24±0.02 vs 1.00±0.00)表达水平降低,差异具有统计学意义(t=35.400~161.220,均P <0.05);与HUVES细胞比较,HemECs,HDEC细胞中NEAT1(2.76±0.24,1.78±0.13 vs 1.00±0.00),IGFBP5蛋白(1.31±0.15,0.78±0.06 vs 0.24±0.02)表达升高,miR-125b-5p表达(0.19±0.02,0.45±0.04 vs 1.00±0.00)降低,差异具有统计学意义(t=17.320~99.204,14.697~33.680,均P<0.05),且HemECs细胞中NEAT1和IGFBP5蛋白表达量最高,miR-125b-5p表达量最低,因此,选取HemECs细胞为研究对象;与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1(0.32±0.02 vs 1.01±0.12)表达、A值(0.45±0.04 vs 1.13±0.11)、细胞生长率(32.28%±2.79%vs 99.41%±0.22%)、划痕愈合率(20.33%±1.23%vs 49.24%±2.43%)及IGFBP5(0.41±0.04 vs 1.31±0.20),PCNA(0.36±0.04 vs 1.27±0.14),Bcl-2(0.48±0.04 vs 1.39±0.16)和MMP-9(0.21±0.02 vs 1.09±0.10)蛋白表达降低,mi R-125b-5p(1.87±0.15 vs 1.02±0.10)表达、细胞凋亡率(45.58%±3.34%vs 12.36%±1.07%)升高,差异具有统计学意义(t=10.809~58.755,均P <0.05);下调miR-125b-5p减弱了沉默NEAT1对HemECs细胞增殖、迁移的抑制及对细胞凋亡的促进作用(t=9.218~15.010,均P <0.05);NEAT1与miR-125b-5p,miR-125b-5p与IGFBP5存在靶向调控关系。结论 沉默NEAT1通过上调miR-125b-5p来抑制IGFBP5表达,从而抑制HemECs细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡。

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者(低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例)和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照(NC)组、siRNA阴性对照(si-NC)组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、siOIP5-AS1+inhibitor阴性对照(si-OIP5-AS1+anti-NC)组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂(si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p)组,采用Lipofectamine 3000试剂进行转染。转染后,qPCR和Western blot检测细胞中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA和蛋白表达水平;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。最后通过双荧光素酶和RNA免疫沉淀(RIP)实验验证OIP5-AS1和miR-942-5p以及CHEK1和miR-942-5p的相互作用。结果 OIP5-AS1和CHEK1在脑胶质瘤组织和细胞中过表达,miR-942-5p呈低表达(均P<0.05);相关分析显示,脑胶质瘤组织中OIP5-AS1与miR-942-5p的表达水平呈负相关,miR-942-5p与CHEK1mRNA的表达水平呈负相关,CHEK1与OIP5-AS1 mRNA的表达水平呈正相关;且OIP5-AS1、CHEK1 mRNA在高级别胶质瘤组织中的表达明显高于低级别组织,而高级别胶质瘤中的miR-942-5p水平明显低于低级别组织(P<0.01)。沉默OIP5-AS1可显著上调miR-942-5p,抑制CHEK1的mRNA和蛋白表达(均P<0.05);沉默OIP5-AS1可显著抑制U87细胞增殖、迁移和侵袭,促进U87细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-942-5p可上调CHEK1表达,阻断OIP5-AS1沉默对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响(均P<0.05)。双荧光素酶和RIP实验证实miR-942-5p是OIP5-AS1的靶基因,CHEK1是miR-942-5p的下游靶基因。结论 沉默OIP5-AS1可能通过上调miR-942-5p抑制CHEK1表达,抑制脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。

AFAP1-AS1靶向调控微小RNA-139-5p及对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法使用GEPIA分析来自TCGA数据库和GTEx项目中胰腺癌和正常组织的AFAP1-AS1水平,Kaplan-Meier Plotter数据库分析AFAP1-AS1与胰腺癌患者临床预后的关系。采用实时定量PCR(qPCR)检测人胰腺导管细胞(hTERT-HPNE)和胰腺癌细胞(AsPC-1、PANC-1、CFPAC-1、BxPC-3和SW1990)的AFAP1-AS1水平,脂质体介导AFAP1-AS1特异性小干扰RNA(si-AFAP1-AS1)转染SW1990细胞(si-AFAP1-AS1组)并设转染阴性对照无关序列的si-NC组和仅经脂质体处理而未行转染的对照组;MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测SW1990细胞增殖、迁移和侵袭情况,双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与微小RNA-139-5p(miR-139-5p)的靶向关系。结果胰腺癌组织的AFAP1-AS1水平高于正常组织(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示,AFAP1-AS1水平与胰腺癌的总生存期无关(HR=1.53,95%CI:0.98~2.39,P=0.057),而与无复发生存期有关(HR=10.08,95%CI:1.35~75.19,P=0.006),其中AFAP1-AS1高水平者的复发风险升高。胰腺癌细胞的AFAP1-AS1水平均高于hTERT-HPNE细胞(P<0.05),选取AFAP1-AS1水平最高的SW1990细胞进行后续的干扰实验。与对照组和si-NC组相比,si-AFAP1-AS1组SW1990细胞的增殖活性在处理72 h后降低而miR-139-5p水平升高(P<0.05);si-AFAP1-AS1组的穿膜细胞数和划痕愈合率分别为(61.818±5.036)个和(21.542±2.310)%,低于对照组的(182.851±11.027)个和(81.849±4.473)%及si-NC组的(190.352±11.228)个和(78.764±3.291)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。野生型AFAP1-AS1序列和miR-139-5p模拟物共转染细胞较突变型AFAP1-AS1和miR-139-5p模拟物共转染的荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论胰腺癌组织和细胞中AFAP1-AS1高表达且可能通过靶向miR-139-5p来促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,进而加速癌症进程,AFAP1-AS1/miR-139-5p轴有望成为胰腺癌诊治的潜在靶点。

LncRNAMNX1-AS1调节miR-744-5p/SH3BGRL3对喉癌细胞生长、迁移的影响

目的分析长链非编码RNA MNX1反义RNA 1(MNX1-AS1)调节miR-744-5p/SH3域结合谷氨酸丰富蛋白样蛋白3(SH3BGRL3)对喉癌细胞生长、迁移的影响。方法构建敲低MNX1-AS1稳定转染Hep-2细胞(sh NC组和sh MNX1-AS1组),构建miR-744-5p瞬时转染细胞系(NC mimics组、miR-744-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-744-5p inhibitor组、sh SH3BGRL3组、miR-744-5p inhibitor+sh SH3BGRL3组)。实时荧光定量检测MNX1-AS1、miR-744-5-p和SH3BGRL3表达,CCK8检测细胞生长,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,蛋白免疫印迹实验检测细胞SH3BGRL3蛋白表达,荧光素酶报告基因测定MNX1-AS1和miR-774-5p的靶标关系。结果与sh NC组相比,MNX1-AS1组MNX1-AS1 mRNA水平降低(<0.05);与NC mimics组相比,miR-744-5p mimics组miR-744-5p mRNA水平升高(<0.05);与NC inhibitor组相比,miR-744-5p inhibitor组miR-744-5p mRNA水平降低(<0.05);与sh NC组相比,sh SH3BGRL3组SH3BGRL3 mRNA水平降低(<0.05)。敲低MNX1-AS1表达抑制细胞增殖和迁移能力,过表达mi R-744-5p抑制细胞增殖和迁移能力。与NC mimic和MNX1-AS1 WT共转染组相比,miR-744-5p mimic和MNX1-AS1 WT共转染组细胞的荧光素酶活性明显降低(<0.05)。与NC mimics组相比,miR-744-5p mimics组中SH3BGRL3蛋白表达降低(<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-744-5p inhibitor组细胞吸光值、迁移细胞数量均高于miR-744-5p inhibitor组(均<0.05);miR-744-5p inhibitor+sh SH3BGRL3组吸光值、迁移细胞数量低于miR-744-5p inhibitor组,但高于NC inhibitor组(均<0.05)。结论MNX1-AS1可能通过miR-744-5p/SH3BGRL3轴促进喉癌发展进程,其可能为临床诊断和治疗喉癌提供潜在靶点。

RBM5-AS1在甲状腺癌细胞中表达变化及其对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的观察RNA结合基序蛋白5-反义链1(RBM5-AS1)在甲状腺癌(TC)细胞中的表达变化,及其对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法采用qRT-PCR法检测TC细胞C643、B-CPAP、TPC-1、BHT101、KMH-2、8305C和正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的RBM5-AS1,选择表达水平最高的细胞进行后续实验。将TC细胞分别转染NC siRNA(对照组)和RBM5-AS1 siRNA(实验组),通过CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞术测算细胞凋亡率,Transwell实验分别检测细胞侵袭、迁移能力,Western blotting法检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)信号通路蛋白表达水平。结果C643、B-CPAP、TPC-1、BHT101、KMH-2、8305C细胞中RBM5-AS1相对表达量均高于Nthy-ori 3-1细胞,其中8305C细胞RBM5-AS1表达量最高(P均<0.05)。与对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱,细胞凋亡率升高,侵袭及迁移穿膜细胞数减少,p-mTOR、p70S6K、4E-BP1蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。结论TC细胞中RBM5-AS1表达上调;干扰RBM5-AS1表达抑制了TC细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并促进其凋亡,其机制可能与调控mTOR/p70S6K/4E-BP1信号通路有关。

ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1在肿瘤免疫微环境中的作用研究进展

锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1 (ZEB1-AS1)属于长链非编码RNA (Lnc RNA)家族,是E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)的反义蛋白产物,可通过上调ZEB1的活性促进肿瘤浸润、转移,其表达的失调与多种肿瘤的发生、发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的重要分子靶点。近年来,大量研究表明ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1可通过调节肿瘤免疫微环境影响肿瘤恶性进展及治疗效果。本文主要阐述ZEB1-AS1及ZEB1与肿瘤相关免疫细胞、炎症相关细胞因子、炎性信号通路之间的相互作用,为肿瘤的靶向及免疫治疗提供新思路。

LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p表达对骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链(Zeb1-AS1)和微小RNA(miR)-335-5p在骨关节炎(OA)中的表达及其对软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p在OA膝关节软骨组织和正常软骨组织中的表达,并进行Spearman相关分析,双荧光素酶检测LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p的关系。分别以阴性对照scramble、过表达pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1(pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1-miR-335-5p-agomir(pcDNA3.1+agomir)转染OA细胞,同时设立空白OA细胞(Control)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western印迹检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。采用右膝接受内侧半月板不稳定(DMM)术制作OA大鼠模型,并将scramble、过表达pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1(pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1-miR-335-5p-agomir(pcDNA3.1+agomir)注射至大鼠的膝关节腔内,苏木素-伊红(HE)染色检测各组膝关节的病理损伤。结果与正常组相比,LncRNA Zeb1-AS1在骨性关节炎中表达明显升高,miR-335-5p表达明显下降(均P<0.05);Spearman相关分析结果显示,在OA软骨细胞中LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p表达呈明显负相关(r=-0.819,P=0.000);双荧光素酶实验结果显示,LncRNA Zeb1-AS1能靶向调控miR-335-5p表达;与Control组细胞相比,pcDNA3.1组、pcDNA3.1+agomir组细胞的增殖活性和PCNA蛋白表达明显升高,细胞凋亡率和caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与pcDNA3.1组细胞相比,pcDNA3.1+agomir组细胞增殖活性和PCNA表达明显下降,细胞的凋亡率和caspase-3表达明显升高(P<0.05);动物实验结果显示,与Model组和scramble组相比,pcDNA3.1组膝关节软骨损伤最为严重,pcDNA3.1+agomir组较pcDNA3.1组损伤明显缓解。结论LncRNA Zeb1-AS1靶向调控miR-335-5p的表达影响骨关节炎的进展,过表达LncRNA Zeb1-AS1后,OA细胞增殖活性升高,凋亡率下降,而miR-335-5p激动剂agomir可部分逆转这一作用。

lncRNA SLC16A1-AS1调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA溶质载体家族16成员1反义RNA 1(lncRNA SLC16A1-AS1)调节微小RNA-532-3p(miR-532-3p)/肌动蛋白结合蛋白2(TAGLN2)信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞中lncRNA SLC16A1-AS1表达水平,筛选最佳干预细胞系;通过荧光原位杂交实验、下拉实验、双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SLC16A1-AS1、TAGLN2与miR-532-3p的靶向调控关系。①将U251细胞分为小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、si-SLC16A1-AS1组、si-SLC16A1-AS1+NC inhibitor组、si-SLC16A1-AS1+miR-532-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-532-3p mimics组、miR-532-3p mimics+pcDNA组、miR-532-3p mimics+TAGLN2组:检测U251细胞的增殖、迁移和侵袭变化;Western blot检测TAGLN2、E-钙黏附蛋白、波形蛋白表达水平。②小鼠体内肿瘤形成实验:验证lncRNA SLC16A1-AS1对胶质瘤生长的影响。结果lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平升高(P<0.05);U251细胞FISH实验、下拉实验、双荧光素酶基因实验证实lncRNA SLC16A1-AS1,TAGLN2与miR-532-3p存在靶向调控关系;抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p可显著抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(P<0.05);抑制miR-532-3p表达或过表达TAGLN2可逆转抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p对U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用(P<0.05)。小鼠体内实验显示,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可显著抑制移植瘤的生长(P<0.05)。结论lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平上调,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可通过调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路,进而抑制胶质瘤的恶性进展。

LncRNA MCM3AP-AS1在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的 分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者组织中长链非编码RNA微小染色体维系蛋白3结合蛋白反义1 (lncRNA MCM3AP-AS1)的表达情况及其临床意义。方法 收集2017年1月至2018年7月在咸阳市中心医院血液内科接受手术治疗的80例DLBCL患者术中切除的组织(癌组织及其对应的癌旁组织),使用q RT-PCR法检测组织中MCM3AP-AS1、微小RNA (miR)-195-5p表达水平;收集DLBCL患者临床病理资料,术后随访3年,分析MCM3AP-AS1、miR-195-5p不同表达水平与患者病理特征的关系;Pearson法分析MCM3AP-AS1与miR-195-5p的相关性;Logistics回归分析影响DLBCL患者预后不良的主要因素;构建Kaplan-Meier生存曲线,分析MCM3AP-AS1、miR-195-5p表达水平与DLBCL患者3年累积生存率的关系。结果 DLBCL组织中MCM3AP-AS1表达水平为1.64±0.48,明显高于癌旁组织的1.26±0.35;miR-195-5p表达水平为0.69±0.22,明显低于癌旁组织的1.08±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);DLBCL组织中MCM3AP-AS1与miR-195-5p呈负相关(r=-0.560,P=0.000);MCM3AP-AS1、miR-195-5p表达水平与患者临床分期、B症状、国际预后指数(IPI)评分、肿瘤直径有关(P<0.05);生存分析表明,MCM3AP-AS1低表达、miR-195-5p高表达患者的3年累积生存率较高;此外,MCM3AP-AS1、miR-195-5p水平、IPI评分、临床分期、B症状是影响患者预后的主要因素(P<0.05)。结论 DLBCL中MCM3AP-AS1高表达,miR-195-5p低表达,MCM3AP-AS1与miR-195-5p呈负相关,两者表达水平均与DLBCL病理特征有关,可影响预后。

长链非编码RNA GNAQ-ASI在高雄激素多囊卵巢综合征中的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制。方法 在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测LncRNA GNAQ-AS1和miRNA-20b-5p的最佳抑制浓度,以Transwell小室检测细胞的迁移情况,并通过流式细胞术检测细胞周期。在动物水平上,将大鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组、miRNA-20b-5p mimics组,每组10只。模型组连续灌服溶于1%羧甲基纤维素的来曲唑1 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3周,每周3次;lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组在模型建立的基础上,用siRNA沉默lncRNA GNAQ-AS1表达,每周注射1次,共3周;miRNA-20b-5p mimics组在模型建立的基础上,用miRNA-20b-5p mimics过表达miRNA-20b-5p,尾静脉注射给药,给药量为1 mg·kg^(-1),每周注射1次,共3周。对照组注射等体积的0.9%NaCl。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、血清抗缪勒管激素(AMH)、促卵泡生长激素(FSH)表达水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测卵巢组织中lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2的表达情况,用蛋白质印迹法检测CDCD2蛋白表达水平。结果 CCK-8检测结果表明,当给予5μmol·L^(-1)lncRNA GNAQ-AS1 siRNA时,对照组和lncRNA GNAQ-AS1组的细胞存活率分别为(38.25±0.62)%和(86.14±3.13)%,当给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时,对照组和miRNA-20b-5p mimics组的细胞增殖抑制率分别为(40.70±0.32)%和(85.35±2.13)%,表明KGN细胞给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时细胞活力明显降低。在动物水平上,RT-qPCR结果显示:模型组的lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2 mRNA的表达分别为1.72±0.37、0.59±0.10和2.47±0.13,表明lncRNA GNAQ-AS1、CDCD2的表达水平在模型组中明显上调,miRNA-20b-5p表达水平较于对照组下调(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠血清LH、T和AMH水平明显升高,FSH和E2水平明显降低(均P<0.05)。与模型组相比,lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组LH、T和AMH水平显著降低,FSH和E2水平显著升高。与模型组相比,CDCD2蛋白表达水平在lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组均显著升高。结论 LncRNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控CDCD2在PCOS中发挥重要作用。

lncRNA TTN-AS1通过miR-138-5p/EGFR轴调控胆囊癌细胞增殖、凋亡和迁移

胆囊癌(GBC)是胆道系统常见的肿瘤,严重威胁人类的生命健康。该研究旨在探究长链非编码RNA(lncRNA)肌联蛋白反义RNA1(TTN-AS1)/微小RNA-138-5p(miR-138-5p)/表皮生长因子受体(EGFR)信号轴在GBC中的分子机制。qRT-PCR检测GBC组织和细胞系中TTN-AS1、miR-138-5p和EGFR mRNA相对表达水平,并对它们在GBC组织中的相关性进行分析。培养GBC细胞系GBC-SD,分为对照(Control)组、si-NC组、si-TTN-AS1组、si-TTN-AS1+in-miR-138-5p组和si-TTN-AS1+pc-EGFR组。qRT-PCR和Western blot检测细胞转染效率;CCK-8、EdU染色、流式细胞术以及划痕愈合实验检测细胞增殖、凋亡和迁移情况;Western blot检测细胞增殖(PCNA)、凋亡(Cleaved Caspase-3)和迁移(MMP-2、MMP-9)相关蛋白水平。利用体内异种移植肿瘤模型研究TTN-AS1对GBC肿瘤生长,Ki67、PCNA阳性表达以及miR-138-5p、EGFR mRNA表达的影响。结果显示,GBC组织和细胞系中TTN-AS1和EGFR mRNA表达均上调,miR-138-5p表达下调,且GBC组织中TTN-AS1水平与miR-138-5p水平呈负相关,与EGFR mRNA水平呈正相关;miR-138-5p水平与EGFR mRNA水平呈负相关(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶证实了miR-138-5p与TTN-AS1或EGFR 3′UTR存在相互作用,且RNA下拉实验证实了TTN-AS1与miR-138-5p结合;qRT-PCR和Westernblot证明TTN-AS1可能通过miR-138-5p调控EGFR表达(P<0.05)。敲低TTNAS1可显著抑制GBC-SD细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡(P<0.05);同时下调PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白水平,上调Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05)。抑制miR-138-5p或过表达EGFR可部分逆转TTN-AS1敲低对GBC-SD细胞恶性行为的影响。体内实验证实,敲低TTN-AS1可抑制肿瘤生长,同时上调miR-138-5p水平,下调EGFR mRNA和Ki67、PCNA阳性表达水平(P<0.05)。总之,TTN-AS1可能在GBC的发生和发展中发挥促癌作用,且其可能是通过调节miR-138-5p/EGFR信号轴实现的。

LncRNA PCAT1对结直肠癌Colo320细胞的影响及作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录本1(PCAT1)对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR检测LncRNA PCAT1、miR-145-5p和肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)在结直肠癌组织、Colo320和5-Fu耐药细胞株中的表达;分析LncRNA PCAT1和miR-145-5p、miR-145-5p和FSCN1之间的作用靶点。检测下调PCAT1、miR-145-5p、FSCN1对Colo320细胞增殖和侵袭的影响;检测5-Fu耐药细胞株细胞活力和凋亡率的变化;检测上调LncRNA PCAT1对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果:结直肠癌组织和Colo320细胞中LncRNA PCAT1和FSCN1表达上调,miR-145-5p表达下调;5-Fu耐药细胞株中LncRNA PCAT1和FSCN1表达下调,miR-145-5p表达上调。LncRNA PCAT1靶向miR-145-5p;miR-145-5p靶向FSCN1。上调LncRNA PCAT1通过miR-145-5p促进Colo320细胞增殖和侵袭。结论:LncRNA PCAT1通过miR-145-5p/FSCN1轴调控Colo320细胞增殖、侵袭及其化疗敏感性。