RNA结合蛋白HuR调控lncRNA DLEU2促进食管鳞癌细胞增殖、侵袭的机制

目的探讨RNA结合蛋白人抗原(Hu)R对食管鳞癌细胞增殖、侵袭的影响及其与长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因(DLEU)2的调控关系。方法收集食管鳞癌组织样本并在体外培养正常人食管鳞状上皮细胞Het-1A及食管鳞癌细胞系KYSE30、KYSE70、KYSE270,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测HuR mRNA与DLEU2表达水平。利用Lipofectamime2000试剂对KYSE30细胞进行转染,并随机分组为对照组、pcDNA组、pc-HuR组、sh-NC组、sh-HuR组、sh-HuR+si-NC组和sh-HuR+si-DLEU2组。CCK-8法检测各组KYSE30细胞活性;平板克隆形成实验检测各组KYSE30细胞增殖能力;荷瘤裸鼠实验观察体内肿瘤生长情况;Transwell小室检测各组KYSE30细胞侵袭能力;Western印迹检测各组KYSE30细胞中HuR蛋白表达水平;RNA免疫沉淀(RIP)实验分析HuR与DLEU2的结合关系。结果在食管鳞癌组织和细胞系中,HuR mRNA和蛋白表达及DLEU2水平均显著升高(P<0.05),其中KYSE30细胞系中HuR基因与DLEU2表达水平最高,故选择KYSE30细胞进行转染实验。转染pc-HuR的细胞中HuR蛋白表达明显上调,细胞活性、克隆形成率及细胞侵袭数均显著增加(P<0.05);转染sh-HuR的细胞中HuR蛋白表达明显下调,细胞活性、克隆形成率及细胞侵袭数均显著降低(P<0.05)。RIP实验和qRT-PCR检测发现HuR与DLEU2有相互作用关系。同时转染sh-HuR和si-DLEU2的细胞中DLEU2水平明显降低,细胞活性、克隆形成率及细胞侵袭数均比转染sh-HuR明显更低(P<0.05)。过表达HuR显著增加移植瘤体积和重量,抑制HuR明显减小移植瘤的体积和重量,而同时抑制HuR和DLEU2时移植瘤的体积和重量比单独抑制HuR时明显更小(P<0.05)。结论HuR通过与DLEU2结合,促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭和移植瘤的体内生长。

RNA结合蛋白人类抗原R在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(HCC)具有发病率高、早期症状不明显、治疗手段局限、患者预后差等特点,因此寻找有效的早期诊断、监测、治疗HCC的方法迫在眉睫。RNA结合蛋白人类抗原R(HuR)作为一种重要的转录后调节因子,可通过调节相关靶信使RNA的稳定性、翻译、亚细胞定位和降解等生物过程参与肿瘤的发生发展。与邻近正常肝组织相比,HuR蛋白在HCC中持续高表达,并参与肝脏恶性转化相关基因的转录后调控。因此,HuR蛋白可作为HCC患者生存率较差的预测指标,深入研究HuR在HCC中的作用机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

TNF-α刺激下RNA结合蛋白HuR在大鼠心脏成纤维细胞中的表达变化

在心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）中,炎症信号通路的持续活化,尤其是肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）依赖的分子信号通路的激活介导了细胞一系列的病理变化[1～3],但其详细的机制尚不完全清楚,

RNA结合蛋白人类抗原R与冠心病关系的研究进展

人类抗原R(HuR)是一种广泛存在于哺乳动物体内的RNA结合蛋白,通过转录后修饰过程靶向结合信使RNA(mRNA)的非翻译区调节其翻译,从而影响蛋白质功能和细胞命运。HuR与冠心病的发生发展密切相关。冠心病是由动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤等病理生理过程逐步演变而来的一组综合征。而HuR在冠心病的发生机制中扮演“分子开关”的角色,精细调控着mRNA的翻译与衰减。因此,深入了解HuR与冠心病的内在关系,有助于未来冠心病患者的治疗及新药物的筛选和开发。

RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达和临床意义

目的:检测RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达,分析两者在结直肠癌发生、发展中的作用、关系。方法:免疫组化法检测83例患者肿瘤组织以及26例癌旁正常组织中HuR及TTP的表达。结果:蛋白HuR在肿瘤细胞质中的表达明显高于癌旁正常组织细胞质中的表达,而蛋白TTP在肿瘤组织中的表达则明显低于癌旁正常组织中的表达。经Spearman等级相关分析HuR和TTP表达呈负相关性(P<0.05)。结论:在结直肠癌的发生发展过程中,信使RNA的稳定因子HuR表达上调,而信使RNA的降解因子TTP下调或缺失。在结直肠癌的发生过程中可能起拮抗作用。胞质HuR蛋白的表达可促进肿瘤发生发展。

利用RIP-Seq技术鉴定HepG2细胞中与HuR蛋白结合的lncRNAs

长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)可在表观遗传水平、转录水平和转录后水平调节基因的表达,对细胞功能起着重要的调节作用。RNA结合蛋白可与很多的RNA结合,并在转录后水平发挥重要的调节作用。然而,RNA结合蛋白是否可以在细胞内广泛结合lncRNAs对其发挥调节作用,仍需进一步证实。本研究通过RNA结合蛋白免疫沉淀技术联合高通量测序(RNA binding protein immunoprecipitation-high throughput sequencing,RIP-Seq)的方法在人肝癌细胞株HepG2中,鉴定与人抗原R(human antigen R,HuR)蛋白相结合的lncRNA分子,并进行了初步的验证。首先,通过HuR-RIP实验分离与HuR蛋白结合的RNA分子,然后高通量测序及生物信息学分析。根据分析结果,鉴定出HepG2细胞中361条与HuR蛋白结合的lncRNAs分子,包括基因间lncRNA(large intergenic noncoding RNA,LincRNA)、内含子lncRNA、与编码基因正义链有重叠的lncRNA和与编码基因反义链有重叠lncRNA(antisense lncRNA)等。并进一步通过RIP-qPCR技术,对其中20条LincRNA分子进行了定量检测,验证测序结果。在HepG2细胞中敲低HuR基因表达,发现这些LincRNA分子中,11条LincRNA分子表达水平显著降低(P<0.05),2条LincRNA显著升高(P<0.05),剩余7条LincRNA表达量未发生变化(P>0.05)。本研究结果说明,HuR在细胞内可以广泛结合lncRNA分子,并且可能对结合的lncRNA分子的表达量产生影响,这也为进一步研究这些lncRNA的功能和HuR调控网络的研究提供了基础。

RNA结合蛋白HuR在B细胞体液免疫应答中发挥关键作用

B淋巴细胞简称B细胞,是来源于骨髓的多能干细胞,其受抗原刺激后会增殖分化出大量浆细胞。在血液中循环浆细胞可合成和分泌抗体。成熟的B细胞经外周血迁出,进入脾脏、淋巴结,主要分布于脾小结、脾索及淋巴小结、淋巴索及消化道黏膜下的淋巴小结中,受抗原刺激后,分化增殖为浆细胞,合成抗体,发挥体液免疫的功能。B细胞的细胞膜上有许多不同的标志,主要是表面抗原及表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子,B1细胞为T细胞非依赖性细胞、

RNA结合蛋白HuR对外泌体生成机制的调控

外泌体是一类直径为30~150 nm的膜囊泡,几乎所有的细胞都能够分泌外泌体,它含有许多来源于细胞的成分。近年来,越来越多的证据表明外泌体介导的信号蛋白、RNA、核酸等多种分子的传递有助于肿瘤的发生发展,包括重塑细胞外基质、促进血管生成、干扰免疫反应、促进肿瘤细胞的增殖迁移以及塑造肿瘤转移前微环境等[1]。

RNA结合蛋白质HuR通过增加YAP1 mRNA稳定性促进白血病细胞增殖

RNA结合蛋白质人类抗原R(Hu R)与多种实体肿瘤的发生发展密切相关,但其在人急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)中的功能和分子机制仍未阐明。本研究收集了30例临床初诊的AML病人和30例正常对照的外周血,分离单个核细胞,进行RT-qPCR法检测。结果显示,与正常对照相比,HuR在AML病人中呈显著表达上调趋势(3.17±1.12,P<0.05)。在AML细胞系HL-60中的功能检测发现,敲低内源性HuR后,对HL-60细胞培养12 h(0.17±0.07),24 h(0.38±0.05),36 h(0.51±0.03),48 h(0.69±0.05),60 h(0.92±0.08)和72 h(1.04±0.10)的增殖产生抑制作用(P<0.05)。同时,阻滞在G1期(47.3%±5.4)的HL-60细胞比例显著升高(P<0.05),而S期(37.5%±6.9)细胞比例显著降低(P<0.05)。相反,HuR的表达抑制对HL-60细胞向单核系分化产生促进作用。RNA免疫共沉淀法检测发现,HuR可与Hippo通路的Yes相关蛋白1关键效应基因(YAP1)的mRNA结合。后续的RNA稳定性检测发现,HuR的结合可以增强YAP1 mRNA的稳定性,进而促进YAP1的表达,并进一步影响YAP1下游基因的转录。综上所述,RNA结合蛋白质HuR可通过促进Hippo通路YAP1的表达参与AML发生发展的调节。

胶质瘤中HuR通过上调PTBP1表达激活Akt通路对胶质瘤细胞的作用研究

目的探讨人类抗原R(HuR)在胶质瘤中的作用及其可能的作用机制。方法收集胶质瘤组织和正常对照组织各21例。体外培养正常胶质细胞株SVGp12和人胶质母细胞瘤来源的细胞株U251,qRT-PCR检测组织和细胞中HuR和多嘧啶结合蛋白1(PTBP1)mRNA表达;Western Blot检测组织和细胞中HuR、PTBP1、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和蛋白激酶B(Akt)蛋白表达;RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测HuR对PTBP1的调控作用;CCK-8检测细胞活力;Ed U实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常对照组相比,胶质瘤组HuR mRNA和蛋白表达、PTBP1的mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与SVGp12组相比,U251组细胞中HuR mRNA和蛋白表达、PTBP1 mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05)。HuR通过结合PTBP1 mRNA调节PTBP1的表达。空白组和si-NC+oe-NC组细胞中各指标差异无统计学意义(均P>0.05)。与si-NC+oe-NC组相比,si-HuR组+oe-NC组细胞中HuR、PTBP1 mRNA和蛋白表达均显著降低(均P<0.05),48 h和72 h的细胞活力以及细胞增殖能力显著降低(均P<0.05),细胞凋亡显著升高(P<0.05),p-Akt/Akt蛋白表达显著降低(P<0.05);与si-HuR+oe-NC组相比,si-HuR+oe-PTBP1组细胞中HuR mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),PTBP1 mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05),48 h和72 h的细胞活力以及细胞增殖能力显著升高(均P<0.05),细胞凋亡显著降低(P<0.05),p-Akt/Akt蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论HuR可能通过上调PTBP1表达激活Akt通路促进胶质瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡。

肝癌组织中HuR和HIF-1α的表达及其相关性

目的观察人抗原R(HuR)和缺氧诱导因子(HIF)-1α在肝癌组织中的表达变化,并探讨其相关性。方法取48例肝癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组化染色法检测肝癌组织及癌旁组织中HuR和HIF-1α蛋白的表达,采用荧光定量PCR法检测肝癌组织中HIF-1αmRNA的表达。结果肝癌组织中HuR和HIF-1α蛋白阳性表达率分别为67%和58%,显著高于癌旁组织的19%和10%(P均<0.01)。肝癌组织中HuR与HIF-1α蛋白的表达呈正相关(r=0.723,P<0.01)。HuR蛋白高表达者中HIF-1αmRNA的表达较HuR蛋白低表达者显著上调(P<0.05)。结论肝癌组织中HuR和HIF-1α蛋白表达上调且呈正相关关系,HuR可能增强HIF-1αmRNA的稳定性,从而促进其表达。

甘草酸通过RNA结合蛋白HuR调控p21表达对IEC-6细胞抗凋亡作用的影响

目的:研究甘草酸(GA)通过RNA结合蛋白人类抗原R(HuR)调控p21转录后表达,探讨GA对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/放线菌酮(CHX)诱导的小肠上皮细胞凋亡的抵抗作用机制。方法:采用大鼠小肠隐窝上皮细胞株(IEC-6),实验分空白组,GA(60μmol·L-1)组,TNF-α+CHX组和GA+TNF-α+CHX组,分别用生物素标记RNA与蛋白结合实验(Biotin pull down)和RNA-免疫共沉淀(RNA IP)分析RNA结合蛋白HuR与p21 mRNA的外源性和内源性结合;构建含p213’-UTR-ARE的荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶报告基因系统检测HuR对p21的转录后调控影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测HuR及p21 mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HuR及p21蛋白表达水平。采用TNF-α+CHX诱导细胞凋亡,实时细胞功能分析仪检测细胞凋亡,免疫共沉淀(CO-IP)检测p21蛋白与半胱氨酸蛋白酶-3前体蛋白(proCaspase-3)结合。结果:与空白组比较,GA处理后,能升高细胞浆内HuR蛋白的表达(P<0.05);GA能促进HuR与p21mRNA 3’-UTR的结合(P<0.05);GA通过HuR升高了p21 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),同时增高对荧光素酶报告基因的表达(P<0.01),沉默HuR后GA对p21 mRNA和蛋白的上调表达作用消失,GA能促进p21与proCaspase-3的结合(P<0.05),部分降低TNF-α+CHX诱导的IEC-6细胞凋亡。结论:GA能促进HuR向细胞浆内转位,促进HuR与p21 mRNA结合并调节其表达,增高荧光素酶表达活性以促进p21的翻译表达,增高p21与proCaspase-3的结合,从而提高IEC-6细胞的抗调亡能力。

RNA结合蛋白人抗原R在人脂肪细胞分化中的作用

目的通过检测RNA结合蛋白人抗原R（HuR）与脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（FABP4）、脂肪酸合成酶（FASN）、脂蛋白脂肪酶（LPL）在人脂肪细胞分化过程中的表达变化，并探讨其作用。方法对人脂肪源性间充质干细胞进行成脂诱导分化，油红O染色观察细胞成脂情况，分别以实时定量PCR和Western印迹检测HuR、FABP4、FASN、LPL mRNA和蛋白表达水平的变化；siRNA干扰HuR后，进一步观察细胞成脂变化和成脂相关基因的表达水平。结果人脂肪源性间充质干细胞在成脂诱导分化过程中HuR、FABP4、FASN和LPL的mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高（均P〈0.01）。干扰HuR表达后，细胞成脂水平干扰组较对照组下降，FABP4、FASN、LPL mRNA表达水平无明显变化，而其蛋白表达水平均显著下调（均P〈0.05）。结论HuR主要通过调节FABP4、FASN和LPL蛋白水平的变化影响成脂，促进人脂肪细胞的分化。