冷诱导RNA结合蛋白在亚低温下的神经保护作用研究

目的研究亚低温下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对受损海马神经元的保护作用机制。方法将原代培养的海马神经元分为3组:对照组、损伤组和治疗组。氧糖剥夺55min制作海马神经元损伤模型,损伤组和治疗组在氧糖剥夺55min后分别置于37℃和32℃培养24h。收集各组细胞,MTT检测各组细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blot检测CIRP的mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,损伤组细胞生存率明显下降[(43.3±8.1)%vs(100.0±12.7)%,P<0.05],治疗组细胞生存率明显升高[(71.8±13.6)%vs(43.3±8.1)%,P<0.05],与损伤组比较,治疗组细胞凋亡率下降[(19.5±0.6)%vs(30.7±2.5)%],CIRP的mRNA蛋白表达明显升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚低温下CIRP表达水平升高,通过抑制细胞凋亡发挥神经元保护作用,是亚低温脑保护作用途径之一。

RNA结合蛋白Musashi2与宫颈鳞状细胞癌关系的研究

目的探讨宫颈鳞状细胞癌组织中RNA结合蛋白Musashi2(MSI2)的表达与临床病理因素的关系及其临床意义。方法采用免疫组化(SP)法检测40例正常宫颈组织、60例高级别鳞状上皮内病变组织和126例宫颈鳞状细胞癌组织中MSI2的蛋白表达水平,分析其表达与临床病理因素及患者预后的关系。Western blot法检测30例宫颈鳞状细胞癌和30例癌旁正常宫颈组织中MSI2的相对表达量。结合患者随访资料,分析影响宫颈鳞状细胞癌患者预后的危险因素。结果免疫组化结果表明,正常宫颈组织(7.50%)、高级别鳞状上皮内病变组织(28.33%)和宫颈鳞状细胞癌组织(61.90%)中MSI2的阳性表达率逐渐升高(P<0.05),FIGOⅢ+Ⅳ期、有淋巴结转移、HPV16感染及Ki67高表达者MSI2阳性率更高(均P<0.05)。Western blot结果显示,宫颈鳞状细胞癌组织中MSI2的相对表达量高于癌旁正常宫颈组织(0.80±0.09 vs.0.24±0.06,P<0.05)。生存分析显示,MSI2阳性表达的宫颈鳞状细胞癌患者的生存时间明显短于阴性表达者(Log-rankχ^(2)=6.413,P<0.05),FIGOⅠ+Ⅱ分期、无淋巴结转移者生存时间较长(均P<0.05)。Cox多因素回归分析显示,MSI2阳性表达、FIGOⅢ+Ⅳ期和淋巴结转移均是宫颈鳞状细胞癌患者生存的危险因素(均P<0.05)。结论MSI2在宫颈鳞状细胞癌中高表达,并且与肿瘤进展转移及患者预后关系密切。

锌指蛋白A20 RNAi腺病毒的制备及其对人脑胶质瘤细胞系U87细胞功能的影响

目的:进一步探讨A20与促进脑胶质瘤恶性增殖和抗细胞凋亡之间的关系,尝试今后在动物体内进行脑胶质瘤基因治疗的研究,通过构建针对A20基因的重组腺病毒干涉载体感染U87细胞系,观察其对细胞生存状态的影响。方法:在前期预实验的基础上构建对A20干涉效果最好的腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1,通过HEK-293细胞的包装后收获腺病毒并进行纯化,最后用此腺病毒再次感染人脑胶质母细胞瘤细胞U87,经RT-PCR、Western blot确认干涉效果;通过流式细胞术(FCM)观察A20表达抑制对U87细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:完成了重组腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1在HEK-293细胞内的包装;对病毒进行纯化后获得了高滴度(1.1×1011pfu/mL)的感染病毒,将其感染U87细胞系后,RT-PCR和Westernblot结果证实U87细胞中A20mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制;FCM结果也证实U87-A20R1细胞内凋亡细胞明显增多。结论:重组A20腺病毒干涉载体可很好地抑制U87细胞内A20的表达且能导致细胞凋亡,该研究结果为临床上用新思路治疗脑胶质瘤提供了实验依据。

STAR蛋白及其成员QKI的结构及功能

STAR即信号转导与RNA活化蛋白 ,这是一类集信号转导特性与RNA激活功能于一身的蛋白质。STAR蛋白家族都含有一个标志性的STAR功能区。STAR蛋白在胚胎发生、组织器官的发育 ,以及调节蛋白质的合成和表达等方面都发挥着重要作用。目前已鉴定出 30多种STAR蛋白 ,根据氨基酸序列的差异分为三个亚家族 ,其中QKI蛋白对神经髓鞘形成和胚胎发育有至关重要的作用。尽管越来越多的STAR蛋白被发现 ,但是至今仍然存在许多难点和疑点 。

冷诱导RNA结合蛋白在心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤中的作用:与NF-κB信号通路的关系

目的评价冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)在心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤中的作用及其与NF-κB信号通路的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只,6~8周龄,体质量24~28 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和心肌缺血再灌注+CIRP衍生肽C23组(I/R+C23组)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤模型,I/R+C23组分别于心肌缺血前和再灌注前腹腔注射CIRP衍生肽C238 mg/kg,Sham组小鼠只穿线不结扎。于再灌注120 min时分离右侧颈内动脉取血样,采用ELISA法检测血清CK-MB、LDH、Cr和BUN水平;取部分肾组织,观察病理学结果,进行肾小管损伤评分;采用Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、IL-1β和IL-18的表达;RT-PCR法检测Toll样受体4(TLR4)、NLRP3、IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达。结果与Sham组比较,I/R组血清CK-MB、LDH、Cr、BUN水平和肾小管损伤评分升高,p-NF-κB、NLRP3、IL-1β和IL-18表达上调,TLR4、NLRP3、IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达上调(P<0.05),肾脏组织病理学损伤加重;与I/R组比较,I/R+C23组血清CK-MB、LDH、Cr、BUN水平和肾小管损伤评分降低,p-NF-κB、NLRP3、IL-1β和IL-18表达下调,TLR4、NLRP3、IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达下调(P<0.05),肾脏组织病理学损伤减轻。结论CIRP参与了心肌缺血再灌注小鼠急性肾损伤的过程,与激活NF-κB信号通路,促进炎症反应有关。

siRNA沉默p62基因对人肝癌细胞Hep3B的生物学影响

目的:探讨siRNA沉默人肝癌细胞Hep3B中p62基因对人肝癌细胞的生物学影响。方法:人肝癌细胞Hep3B为靶细胞,siRNA通过Lipofectamine 2000转染Hep3B。首先从3条siRNA序列中筛选出1条沉默p62的最佳序列,然后将细胞分为空白对照组、siRNA组、Ncontro(lNC)组及脂质体(Lip)组。分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中p62、XPD、p53以及cyclinD1的mRNA和蛋白质的表达量,并用MTT法检测各组细胞的增殖能力。结果:siRNA组中p62、XPD、p53的mRNA表达较其他3组显著下调(P<0.01),而siRNA组中cyclinD1的mRNA表达较其他3组明显上调(P<0.01)。Westernblot检测结果显示各组细胞中p62、XPD、p53及cyclinD1的蛋白表达变化趋势与其mRNA变化趋势相一致。MTT检测显示siRNA沉默p62后,细胞增殖能力增强。结论:p62基因可能通过影响XPD、p53及cyclinD1从而抑制癌细胞生长,并且可能通过DNA损伤检控点来调控细胞增殖。

长链非编码RNA LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法收集2018年2月—2019年6月在解放军总医院第六医学中心手术治疗的12例肝细胞癌(以下简称肝癌)患者标本及对应的癌旁组织,采用荧光定量PCR方法检测LNC01309的相对表达量。利用荧光定量PCR法检测LNC01309在人肝癌细胞系(Hep G2、SNU-398和Hep 3B)和人永生化正常肝细胞系(THLE-2)中的表达水平。在肝癌细胞Hep G2中过表达LNC01309,分为质粒对照组(pEXP-control)和过表达组(pEXP-LNC01309)。采用CCK-8检测各组细胞增殖变化,采用划痕愈合试验和Transwell试验检测各组细胞迁移能力。利用RNA免疫共沉淀试验检测LNC01309与RBM38的相互作用(分组为IgG组和RBM38抗体组)。利用放线菌酮追踪分析检测LNC01309对于RBM38蛋白稳定性的影响。在肝癌细胞Hep G2中过表达RBM38进行回复试验,采用CCK-8试验、划痕愈合试验和Transwell试验,分别检测细胞增殖和迁移能力的变化。计量资料两组间比较采用t检验。结果LNC01309在肝癌组织中的平均表达水平高于癌旁组织(4.225±2.285 vs 1.541±0.530,t=3.618,P=0.004)。LNC01309在肝癌细胞(Hep G2、SNU-398和Hep 3B)中的相对表达水平亦均高于正常肝细胞(THLE-2)(t值分别为4.231、6.489、14.480,P值均<0.05)。过表达LNC01309的Hep G2细胞(t=9.172,P<0.001)相对于对照组,细胞的生长速度明显上升(第96小时OD_(450)值:1.885±0.107 vs 2.527±0.234,t=4.330,P=0.012),迁移能力上调(划痕愈合试验:11.65%±2.40%vs 35.66%±4.90%,t=9.837,P<0.001;Transwell试验:100.00%±3.11%vs 161.00%±35.93%,t=4.399,P=0.005);然而过表达LNC01309诱导的肝癌细胞增殖和迁移能力的上调效应,都能够被RBM38部分抑制(第96小时OD_(450)值:2.500±0.227 vs 1.913±0.282,t=2.812,P=0.048;168.00%±9.43%vs 117.20%±18.03%,t=6.622,P<0.001)。相对于IgG对照组,RBM38抗体能够显著富集沉淀LNC01309(t=3.846,P=0.031)。放线菌酮试验结果显示,过表达LNC01309组细胞中RBM38蛋白稳定性显著下调(t=8.038,P=0.001)。结论新发现的LNC01309通过与RBM38的相互作用降低了RBM38蛋白稳定性,促进肝癌细胞的增殖与迁移。

从脆性X染色体痴呆症的分子机制展望蛋白合成在学习记忆过程中的功能(英文)

外界环境所激发的学习与记忆是由繁复的分子机制所调控的。关于脆性X染色体综合征蛋白 (FMRP)的研究表明 ,蛋白合成的调节在学习记忆过程中起着重要的作用。脆性X染色体综合征是世界上最常见的遗传性痴呆病。这种疾病起源于FMRP缺失所导致的大脑神经元突触发育障碍 ,从而造成学习记忆能力低下。体外实验结果表明 ,FMRP是蛋白翻译的抑制因子。在大脑神经元中 ,FMRP高度表达 ,并选择性作用于其靶基因的信使核糖核酸 (mRNA) ,从而进一步与执行翻译功能的核糖体结合 ,对其靶基因的蛋白合成起调控作用。近期研究使用基因芯片技术鉴定了小鼠脑中FMRP的靶基因mRNA ,并进一步证实这些mRNA在患者细胞中呈现翻译功能失调。以上研究提示FMRP是影响学习记忆过程中调控蛋白合成的关键因子 。

心搏骤停／心肺复苏大鼠脑损伤时海马冷诱导RNA结合蛋白表达的变化

目的评价心搏骤停／心肺复苏大鼠脑损伤海马冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）表达的变化。方法清洁级健康雄性sD大鼠72只，体重280—350g，8．10周龄，采用随机数字表法分为2组：假手术组（S组，n=18）和缺血再灌注组（I／R组，n=54）。S组只进行气管插管及动静脉穿刺；I／R组经食管电刺激诱发室颤建立心搏骤停模型。于复苏后12、24和48h时处死大鼠取海马组织。采用Westernblot法和qPCR法分别检测CIRP、TNF．仪和IL-1B及其mRNA的表达；光镜下观察海马病理学结果。结果与s组比较，I／R组复苏后24和48h时海马CIRPmRNA表达上调，复苏后12、24和48h时TNF-amRNA表达上调，复苏后12和24h时IL-1BmRNA表达上调，复苏后12、24和48h时CIRP、TNF-α和IL-1D表达均上调（P〈0．05）。I／R组海马CAl区出现病理学损伤。结论心搏骤停／心肺复苏大鼠脑损伤时海马CIRP表达上调，促进中枢炎症反应。

RNA结合蛋白Lsm4对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响

目的 :探讨干扰Lsm4基因对人食管癌EC109细胞增殖和迁移能力的影响及其可能的机制。方法 :实时荧光定量-PCR法检测26例食管癌及其相应癌旁组织中Lsm4 mRNA的表达。将靶向Lsm4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)(Lsm4-siRNA)或阴性对照(negative control,NC)(NC-siRNA)转染入食管癌EC109细胞,实时荧光定量-PCR法检测细胞中Lsm4 mRNA的表达,MTT法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖和克隆形成能力,Transwell法检测细胞的迁移能力,蛋白质印迹法检测Lsm4、细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和波形蛋白的表达水平。结果 :食管癌组织中Lsm4 mRNA的表达水平明显高于相应的癌旁组织(P<0.05)。Lsm4-siRNA转染后,EC109细胞中Lsm4 mRNA及其蛋白的表达水平低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Lsm4-siRNA转染后,EC109细胞的增殖和克隆形成能力受到抑制(P<0.05),而EC109细胞的迁移能力增强(P<0.01)。与阴性对照组比较,Lsm4-siRNA转染组细胞PCNA的表达水平下调(P<0.05),而波形蛋白的表达水平上调(P<0.01)。结论 :食管癌组织中Lsm4 mRNA高表达,Lsm4可能参与调控食管癌EC109细胞的增殖和迁移。

RNA结合蛋白Musashi1在结直肠癌中的表达及临床意义

Musashi1（Msi1）是一种进化保守的RNA结合蛋白,同时它是肠道、神经等多种组织中的干细胞标志物,对于维持自我更新与分化之间的平衡具有重要作用.近年来研究发现Msi1在多种肿瘤组织尤其是结直肠癌中高表达,参与调控细胞周期、增殖、凋亡等过程,逐渐成为多种癌变的关键调节剂,有望成为肿瘤治疗的新靶点.

心跳骤停复苏大鼠海马冷诱导RNA结合蛋白表达的变化

目的 评价心跳骤停复苏大鼠海马冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠85只,体重280～ 320 g,3月龄,采用随机数字表法,将其分为3组：正常对照组（C组,n=15）、假手术组（S组,n=15）和心跳骤停复苏组（CPR组,n=55）.CPR组采用经食管心脏起搏诱发室颤的方法制备心跳骤停模型,随后进行复苏,分别于复苏后6h、12h、1d、3d和7d时取海马组织,采用RT-PCR法检测CIRP mRNA表达,采用Western blot法检测CIRP表达.复苏后3d取脑组织,采用组织化学染色法检测海马CA1区CIRP表达.结果 与C组比较,CPR组复苏后1、3、7d时海马CIRP mRNA表达上调,复苏后1、3d时海马CIRP表达上调（P＜0.05）,S组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与复苏后3d时比较,CPR组其它时点海马CIRP mRNA表达下调,复苏后6h、12h、7d时海马CIRP表达下调（P＜0.05）.CIRP主要表达于海马CA1区锥体细胞的细胞核.结论 心跳骤停复苏大鼠海马CIRP表达上调是抑制脑组织细胞凋亡的内源性机制之一.

姜黄素对肠缺血再灌注小鼠脑损伤时冷诱导RNA结合蛋白表达的影响

目的评价姜黄素对肠缺血再灌注小鼠脑损伤时冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)表达的影响。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠144只,8周龄,体重20~24 g。采用随机数字表法分为3组(n=48):假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)和姜黄素组(CUR组)。采用夹闭肠系膜上动脉75 min,恢复灌注的方法制备肠缺血再灌注诱发小鼠脑损伤模型,CUR组缺血前30 min腹腔注射姜黄素200 mg/kg。于再灌注24 h时处死小鼠取海马,确定湿重/干重(W/D)比值,采用EB法检测血脑屏障通透性,HE染色法评估海马CA1区损伤程度;电镜下观察细胞超微结构,采用Western blot和RT-PCR法分别检测海马CIRP、TNF-α和IL-1β及其mRNA的表达。结果与Sham组比较,I/R组和CUR组海马W/D比值及EB含量均升高,CIRP、TNF-α和IL-1β及其mRNA表达上调(P<0.05);与I/R组比较,CUR组海马W/D比值和EB含量降低,CIRP、TNF-α和IL-1β及其mRNA表达下调(P<0.05)。CUR组海马组织病理学及超微结构损伤较I/R组明显减轻。结论姜黄素可能通过抑制CIRP表达上调,降低炎症反应减轻肠缺血再灌注小鼠脑损伤。

子宫内膜癌中肿瘤干细胞的研究进展

子宫内膜癌是妇科常见的三大恶性肿瘤之一,严重影响女性的生活和健康。现行的治疗手段主要包括手术、放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗),但对放疗或化疗后复发病例的治疗,仍是极大的挑战。肿瘤干细胞是一类存在于肿瘤组织中具有自我更新能力和多向分化潜能的肿瘤细胞亚群,目前肿瘤干细胞的研究方兴未艾。在子宫内膜癌发病机制的研究中,大量研究证实具有干细胞潜能的稀有的子宫内膜癌肿瘤细胞在疾病发生、发展、转移和复发中起关键作用。就肿瘤干细胞的性质、来源做一总结,并对子宫内膜癌中肿瘤干细胞存在的证据及其标记物的研究进展作一综述。

亚低温对脑复苏大鼠神经细胞凋亡和线粒体损伤的影响

目的探究亚低温通过冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)介导的抗凋亡信号转导通路对心肺复苏(CPR)大鼠脑神经细胞凋亡和线粒体的影响。方法将45只大鼠分为假手术组、常温组和亚低温组(每组15只)。通过模拟窒息后心脏骤停,模拟CPR模型。亚低温组大鼠在建模后使食管内温度维持在(33.0±1.0)℃。6 h后收集尾静脉血样本和脑组织。检测和比较各组炎性因子水平、脑组织损伤、神经元凋亡、线粒体形态、线粒体损伤标志蛋白和CIRP的表达量。结果3组大鼠炎性因子水平、脑组织中线粒体损伤和凋亡标志蛋白表达量以及CIRP mRNA和蛋白表达量比较有显著差异(P<0.05)。常温组脑组织损伤程度、凋亡指数、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、线粒体损伤程度、细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-9、Caspase-3蛋白表达量显著高于假手术组(P<0.05)。与常温组比较,亚低温组大鼠凋亡指数(16.17±1.82 vs 38.29±3.79)、IL-1β[(39.71±5.09)pg/ml vs(74.24±8.25)pg/ml]、IL-6[(52.47±7.30)pg/ml vs(88.36±10.12)pg/ml]、Cyt C(0.32±0.03 vs 0.87±0.08)、Caspase-9(0.51±0.05 vs 0.92±0.09)、Caspase-3(0.46±0.05 vs 1.05±0.10)显著降低(P<0.05),CIRP mRNA(1.58±0.14 vs 0.30±0.04)和CIRP蛋白(0.87±0.08 vs 0.12±0.01)表达量显著增高(P<0.05)。结论亚低温可能通过调控CIRP的表达缓解线粒体损伤,抑制脑神经元凋亡,保护CPR后脑组织损伤。

piR-3127964经PIWIL-3/载唾液酸蛋白途径调控滋养细胞侵袭力的机制

目的研究子痫前期与非病理妊娠胎盘组织之间差异表达的piR-3127964调控滋养细胞侵袭力的分子机制。方法收集2020年11月至2021年8月于重庆医科大学附属第一医院产科就诊的非病理性早产(对照组,n=12)与子痫前期孕妇(子痫前期组,n=10)经剖宫产分娩的胎盘以及早孕期人工流产者的绒毛组织(早孕期人工流产组,n=10)。提取对照组和子痫前期组胎盘组织的总RNA进行测序,利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测piR-3127964在各类组织中的相对表达量。利用蛋白质印迹法检测3组中PIWIL-1、PIWIL-2和PIWIL-3的表达量。外源性调节HTR-8/SVneo细胞内piR-3127964的水平,通过qRT-PCR检测下游候选靶分子,即鸟嘌呤核苷酸结合蛋白样3-样蛋白(guanine nucleotide-binding protein-like 3-like,GNL3L)和载唾液酸蛋白(sialophorin,SPN)mRNA的相对表达量,利用qRT-PCR检测GNL3L和SPN mRNA在对照组和子痫前期组胎盘组织中的相对表达量。进一步通过双荧光素酶报告基因试验验证上述两者与piR-3127964的相互作用。通过荧光原位杂交和免疫荧光结合的方式明确piR-3127964和SPN在早孕期人工流产组绒毛组织中的定位。通过Transwell细胞侵袭实验探究piR-3127964对HTR-8/SVneo细胞侵袭能力的影响和潜在机制。采用独立样本t检验及单因素方差分析及LSD事后检验对数据进行统计学分析。结果(1)差异表达的piR-3127964预测的下游靶基因的富集通路与细胞运动相关;piR-3127964在早孕期人工流产组绒毛、对照组和子痫前期组胎盘组织中差异有统计学意义(分别为2.950±0.853、1.036±0.303与0.254±0.155,F=27.35,P<0.05);且piR-3127964定位于早孕期人工流产组绒毛的绒毛外滋养细胞(extravillous cytotrophoblasts,EVTs)中。(2)子痫前期组胎盘组织中PIWIL-3蛋白表达量明显低于对照组胎盘组织和早孕期人工流产组绒毛组织(0.810±0.400与3.175±0.429和6.843±1.379,LSD检验,P值均<0.05)。(3)与阴性对照相比,piR-3127964外源性模拟物(piR-mimics)和外源性抑制剂(piR-inhibitor)可显著改变SPN mRNA水平(分别为0.971±0.045与0.732±0.010、1.076±0.073与1.293±0.092,LSD检验,P值均<0.05);而GNL3L mRNA水平与piR-3127964水平无明显相关性。(4)野生型SPN(wild type SPN,SPN-WT)双荧光素酶报告基因质粒的荧光素酶活性在经piR-mimics(1.010±0.049与0.645±0.047,t=9.34)和piR-inhibitor(1.035±0.058与1.397±0.015,t=-10.60)的处理后出现显著变化(P值均<0.05)。(5)与对照组胎盘组织相比,SPN mRNA在子痫前期胎盘组织中显著上调(1.305±0.290与2.097±0.239,t=-4.22,P=0.006),而GNL3L mRNA在这两类组织中差异无统计学意义;免疫荧光实验提示SPN定位于早孕绒毛的EVTs中。(6)piR-inhibitor可显著抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力,敲低SPN后能逆转piR-inhibitor引起的侵袭能力下降效应(160.714±53.860与371.667±103.061和344.333±120.268,LSD检验,P值均<0.05)。结论piR-3127964在子痫前期胎盘中异常下调,通过上调SPN抑制滋养细胞侵袭力,可能是子痫前期的病理基础。

脊髓神经元SAM68-TRPV1信号通路在小鼠糖尿病神经病理性痛中的作用

目的评价脊髓神经元有丝分裂相关蛋白-68 kDa(SAM68)-瞬时受体电位香草素亚族1(TRPV1)信号通路在小鼠糖尿病神经病理性痛(DNP)中的作用。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠40只,8周龄,体质量18~22 g,采用腹腔注射链脲佐菌素0.12 mg/g制备糖尿病模型,以后足机械痛阈(MWT)较造模前下降≥50%为DNP造模成功。糖尿病造模后4周时取DNP小鼠24只,采用单纯随机抽样方法分为3组(n=8):DNP组、SAM68抑制组(KD组)和病毒空载对照组(VC组);随机取MWT下降<50%的糖尿病小鼠8只作为非DNP组(ND组),随机取正常小鼠8只作为对照组(NC组)。糖尿病造模后4周时,KD组和VC组分别于脊髓腰膨大处注射SAM68基因沉默病毒和空载病毒。于糖尿病造模前和造模后4、6周测定MWT。在造模后6周MWT测定结束后处死小鼠,取脊髓组织,采用Western blot法检测SAM68和TRPV1的表达,免疫荧光观察其在脊髓的表达定位。结果与NC组和ND组相比,DNP组造模后4和6周时MWT下降,脊髓组织SAM68和TRPV1表达上调(P<0.05);与DNP组相比,KD组造模后6周时MWT升高,脊髓组织SAM68和TRPV1表达下调(P<0.05),VC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。SAM68与TRPV1表达于脊髓同一区域神经元。结论脊髓神经元SAM68-TRPV1信号通路的激活参与小鼠DNP的病理生理机制。

微小RNA-21表达在卵巢癌细胞生长和凋亡过程中的作用

目的探讨微小RNA-21（miR．21）在卵巢癌细胞生长、凋亡中的作用及调节机制。方法构建表达miR-21的重组干扰载体pSIREN—miR-21质粒，采用酶切鉴定和测序法证实。实验分为3组，即转染组：卵巢癌细胞株OVCAR3细胞转染重组干扰载体pSIREN—miR-21质粒；阴性对照组：OVCAR3细胞转染阴性对照pSIREN—miR-21-Neg质粒；空白对照组：OVCAR3细胞不转染质粒。采用茎环实时荧光定量逆转录（RT）-PCR技术检测3组细胞中miR-21的表达，蛋白印迹法检测3组细胞中程序性细胞死亡因子4（PDCD4）蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪检测3组细胞的增殖及凋亡情况。结果成功构建了表达miR-21的重组干扰载体pSIREN—miR-21质粒，并经酶切鉴定和测序法证实。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中miR-21的表达水平分别为0．26±0．08、1．26±0．21和1．00，转染组明显低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．叭）。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中PDCD4蛋白的灰度值分别为1443±33、858±19和846±16，转染组明显高于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞增殖的A值分别为0．661±0．015、0．848±0．150、0．935±0．133，转染组明显低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。转染48h后，转染组细胞的早期凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为（25．821±0．763）％、（0．010±0．003）％、（0．238±0．023）％；P〈0．01]；转染72h后，转染组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于阴性对照组和空白对照组[早期凋亡率分别为（30．480±0．821）％、（7．792±0．312）％、（7．033±0．257）％，P〈0．01；晚期凋亡率分别为（3．558±0．211）％、（1．557±0．067）％、（1．049±0．028）％，P〈0．05]。结论miR-21参与调节卵巢癌细胞的生长和凋亡过程，可能通过调控PDCD4蛋白的表达而发挥作用。

妊娠期糖尿病大鼠的胎鼠肺结构和肺表面活性蛋白B、C及其调控因子表达

目的 通过对GDM大鼠胎鼠的肺组织结构及肺表面活性蛋白（surfactant proteins,SP）-B、SP-C、甲状腺转录因子（thyroid transcription factor,TTF）-1、多形性腺瘤样因子（pleiomorphic adenoma gene like,PLAGL）-2蛋白表达水平进行研究,探讨GDM大鼠胎鼠肺发育障碍的机制. 方法 清洁级健康成年Sprague-Dawley大鼠构建孕鼠GDM模型,共20只造模成功,对照组为20只正常孕鼠.于妊娠第21天检测孕鼠随机血糖,并行剖宫取胎术,胎鼠计数并称重.透射电子显微镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构.每组随机取60只胎鼠,取肺组织制作360张石蜡切片,随机取100张不连续切片,光镜下观察肺组织形态结构;随机取另外100张不连续切片,免疫组织化学法检测SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白定位及表达.每组取9只胎鼠,蛋白质印迹技术检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-l和PLAGL-2蛋白水平.每组取27只胎鼠,荧光实时定量聚合酶链反应检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的mRNA水平.采用独立样本t检验进行统计学分析. 结果 GDM组孕鼠平均随机血糖值高于对照组[（26.8±2.8）与（4.9±0.5）mmol/L,t=-34.05,P=0.00].GDM组胎鼠平均体重高于对照组[（5.6±0.6）与（5.2±0.5）g,t=-1.97,P=o.03].GDM组与对照组肺泡个数分别为（10.1±1.6）与（12.1±1.3）个,肺泡面积分别为（986.9±5.5）与（1 257.3±5.0） μm2,GDM组均低于对照组（t值分别为9.84和27.53）;肺泡间隔分别为（11.5±6.2）与（9.9±4.3）μm,GDM组高于对照组（t=-2.17）,差异均有统计学意义（P值均＜ 0.05）.透射电镜下,可见GDM组肺泡Ⅱ型上皮细胞表面微绒毛粗短、减少,板层小体数量减少.胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2蛋白均沿胞浆呈颗粒状分布,GDM组4种蛋白表达的平均吸光度分别为1.15±0.12、1.23±0.06、0.87±0.21与1.21±0.18,对照组分别为1.22±0.05、1.31±0.14、1.12±0.09与1.33±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义（t值分别为2.40、2.35、4.89和2.77,P值均＜0.01）.GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白水平分别为0.57±0.09、0.45±0.03、1.50±0.04和1.11±0.04,对照组分别为0.81±0.03、0.66±0.04、1.69±0.05和1.46±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义（t值分别为11.77、11.09、8.80和13.37,P值均＜0.01）.GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2mRNA水平分别为0.60±0.04、0.79±0.04、0.81±0.03和0.79±0.05,对照组分别为1.06±0.19、1.03±0.24、1.03±0.18和1.02±0.19,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义（t值分别为6.80、2.98、3.54和3.54,P值均＜0.01）. 结论 GDM大鼠的胎鼠肺组织中SP-B和SP-C蛋白水平均明显下降,可能由于TTF-1和/或PLAGL-2基因表达下调所致;SP-B和SP-C蛋白减少与胎肺结构的病理变化有密切关联.