敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对人宫颈癌细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法利用人蛋白图谱(Human Protein Atlas)数据库分析YTHDF2在宫颈癌中表达及与生存时间的关系。收集宫颈癌和正常宫颈组织各31例,采用免疫组织化学法检测YTHDF2的蛋白表达差异;利用敲低YTHDF2的短发夹RNA(shRNA)及空载质粒包装慢病毒,并感染至宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞,实时荧光定量PCR及Western blot法检测YTHDF2的mRNA及蛋白水平,敲低YTHDF2后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果检测数据库发现YTHDF2在宫颈癌中表达越高生存时间越短,与正常宫颈组织相比,YTHDF2在宫颈癌组织高表达。敲低YTHDF2后,抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞阻滞于S期。结论YTHDF2在宫颈癌组织中高表达,敲低后抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡。

直肠癌组织中YTHDF2、lncRNA TUSC7表达与上皮间质转化的关系及预后意义

目的研究直肠癌组织中YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(YTHDF2)、长链非编码RNA抑癌候选基因7(lncRNA TUSC7)表达与上皮间质转化(EMT)的关系及临床预后意义。方法选取该院自2018年5月至2020年5月诊治的98例直肠癌患者。采用实时荧光定量PCR检测直肠癌组织和癌旁组织中YTHDF2、lncRNA TUSC7表达及EMT相关指标β-连环素(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)mRNA的表达。采用Pearson法分析YTHDF2 mRNA、lncRNA TUSC7与EMT相关指标的相关性。采用Kaplan-Meier曲线分析YTHDF2、lncRNA TUSC7表达对直肠癌无瘤生存预后的影响。采用多因素COX回归分析直肠癌无瘤生存预后的影响因素。结果直肠癌组织中YTHDF2、β-catenin、N-cad mRNA相对表达水平高于癌旁组织,而lncRNA TUSC7、E-cad mRNA相对表达水平低于癌旁组织(均P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA与β-catenin、N-cad mRNA表达呈正相关(均P<0.05),与E-cad mRNA表达呈负相关(均P<0.05);lncRNA TUSC7与β-catenin、N-cad mRNA表达呈负相关(均P<0.05),与E-cad mRNA表达呈正相关(均P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA与lncRNA TUSC7表达呈负相关(P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA、lncRNA TUSC7与TNM分期Ⅲ期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(均P<0.05)。YTHDF2高、低表达组3年无瘤生存率分别为59.57%(28/47)、88.24%(45/51)。lncRNA TUSC7高、低表达组3年无瘤生存率分别为88.00%(44/50)、60.42%(29/48)。YTHDF2高表达组3年累积无瘤生存率低于YTHDF2低表达组(Log Rankχ^(2)=11.370,P=0.001)。lncRNA TUSC7高表达组3年累积无瘤生存率高于lncRNA TUSC7低表达组(Log Rankχ^(2)=11.880,P=0.001)。TNM分期Ⅲ期、低分化程度、合并淋巴结转移、YTHDF2高表达、lncRNA TUSC7低表达是直肠癌患者无瘤生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论直肠癌组织中YTHDF2表达上调,lncRNA TUSC7表达下调,二者与不良临床病理特征及EMT有关,是新的评估直肠癌患者预后的标志物。

RNA甲基化识别蛋白YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2预测O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶甲基化的脑胶质瘤的化学治疗敏感性

目的研究RNA N6-腺苷酸甲基化(N6-methyladenosine,m6A)识别蛋白YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2(YTHDF2)与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)甲基化胶质瘤化学治疗(简称化疗)抵抗的关联,并探索其潜在机制。方法共纳入中国脑胶质瘤基因图谱计划(CGGA)数据库中的325例胶质瘤患者,收集其一般及临床信息(包括患者的组织学病理和分子病理信息、总生存期、术后辅助性治疗信息和包含YTHDF2在内的基因表达谱信息)。利用Kaplan-Meier生存曲线和Logrank检验评价YTHDF2表达水平与替莫唑胺(TMZ)治疗敏感性及生存预后的关系。通过慢病毒感染体外构建YTHDF2稳定敲低的胶质瘤细胞模型,利用细胞活性检测试剂盒8(CCK-8试剂盒)检测不同YTHDF2表达水平细胞在TMZ处理后的存活率。通过基因集合富集分析(GSEA)和基因本体(GO)功能注释,分析YTHDF2表达升高参与TMZ治疗抵抗的潜在机制。结果临床数据库队列分析发现,m6A识别蛋白YTHDF2表达水平高的胶质母细胞瘤化疗治疗后总生存期显著短于YTHDF2表达水平低者(P<0.01)。经800、1500、2000μmol/L的TMZ处理48 h后,与对照shRNA比较,YTHDF2 shRNA1(800μmol/L的TMZ除外)和YTHDF2 shRNA2的细胞相对存活比例均明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。生存分析结果表明,在MGMT甲基化组中,YTHDF2低表达水平患者的总体生存率明显高于YTHDF2高表达水平患者(P<0.05);在MGMT非甲基化组中,YTHDF2低高表达水平患者的总体生存率差异无统计学意义(P>0.05)。京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路注释结果显示,表达升高的基因主要富集在与细胞因子介导的细胞间相互作用、细胞周期以及Janus激酶-信号转导和转录激活因子信号通路,而表达降低的基因主要富集在正常神经活动相关的信号通路。GSEA分析结果显示,YTHDF2高表达的胶质母细胞瘤基因富集与上皮间质转化、细胞分裂活动和核因子κB介导的肿瘤坏死因子α等特征密切相关。GO功能注释结果显示,在YTHDF2高表达组中,高表达的基因功能主要聚集在细胞周期和细胞因子相关的生物学过程中。结论RNA甲基化识别蛋白YTHDF2表达可用作预测和评估MGMT甲基化的胶质瘤化疗敏感性的分子指标。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

RNA结合蛋白Musashi2与宫颈鳞状细胞癌关系的研究

目的探讨宫颈鳞状细胞癌组织中RNA结合蛋白Musashi2(MSI2)的表达与临床病理因素的关系及其临床意义。方法采用免疫组化(SP)法检测40例正常宫颈组织、60例高级别鳞状上皮内病变组织和126例宫颈鳞状细胞癌组织中MSI2的蛋白表达水平,分析其表达与临床病理因素及患者预后的关系。Western blot法检测30例宫颈鳞状细胞癌和30例癌旁正常宫颈组织中MSI2的相对表达量。结合患者随访资料,分析影响宫颈鳞状细胞癌患者预后的危险因素。结果免疫组化结果表明,正常宫颈组织(7.50%)、高级别鳞状上皮内病变组织(28.33%)和宫颈鳞状细胞癌组织(61.90%)中MSI2的阳性表达率逐渐升高(P<0.05),FIGOⅢ+Ⅳ期、有淋巴结转移、HPV16感染及Ki67高表达者MSI2阳性率更高(均P<0.05)。Western blot结果显示,宫颈鳞状细胞癌组织中MSI2的相对表达量高于癌旁正常宫颈组织(0.80±0.09 vs.0.24±0.06,P<0.05)。生存分析显示,MSI2阳性表达的宫颈鳞状细胞癌患者的生存时间明显短于阴性表达者(Log-rankχ^(2)=6.413,P<0.05),FIGOⅠ+Ⅱ分期、无淋巴结转移者生存时间较长(均P<0.05)。Cox多因素回归分析显示,MSI2阳性表达、FIGOⅢ+Ⅳ期和淋巴结转移均是宫颈鳞状细胞癌患者生存的危险因素(均P<0.05)。结论MSI2在宫颈鳞状细胞癌中高表达,并且与肿瘤进展转移及患者预后关系密切。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

脑胶质瘤组织中YTHDF2,UBXN1的表达及其对预后的评估价值

目的研究脑胶质瘤组织中YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(YTH domain N6-methyladenine RNA binding protein 2,YTHDF2),UBX结构域蛋白1(UBX domain protein 1,UBXN1)的表达及预后评估价值。方法选取2017年2月~2018年2月青岛市胶州中心医院诊治的92例脑胶质瘤患者。免疫组织化学检测组织YTHDF2,UBXN1表达。相关性采用Spearman秩相关分析。Kaplan-Meier曲线分析YTHDF2,UBXN1表达与脑胶质瘤患者预后的影响。COX分析脑胶质瘤患者预后影响因素。结果相比于癌旁组织,脑胶质瘤中YTHDF2(65.22%vs 15.22%)阳性率较高,UBXN1(26.09%vs 73.91%)的阳性率较低,差异具有统计学意义(χ^(2)=47.831,42.087,均P<0.05)。Spearman秩相关分析,脑胶质瘤中YTHDF2与UBXN1表达呈负相关(r=-0.712,P<0.05)。相比于肿瘤直径<3cm,WHO分级Ⅰ~Ⅱ级,肿瘤直径≥3cm和WHO分级Ⅲ级脑胶质瘤组织中YTHDF2(75.47%vs 51.28%,65.22%vs 50.00%)阳性率较高,而UBXN1(15.09%vs 41.03%,11.11%vs 47.37%)阳性率较低,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.795,6.609;7.835,15.207,均P<0.05)。YTHDF2阳性组五年总生存率低于阴性组[28.33%(17/60)vs 62.50%(20/32)],UBXN1阳性组五年总生存率高于阴性组[66.67%(16/24)vs 30.88%(21/68)],差异具有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=12.870,7.665,均P<0.05)。YTHDF2阳性(HR=2.427,95%CI:1.426~4.569)、UBXN1阴性(HR=1.740,95%CI:1.121~2.568)、WHO分级Ⅲ级(HR=2.671,95%CI:1.160~6.012)及肿瘤直径≥3cm(HR=1.628,95%CI:1.017~2.592)是胶质瘤患者不良预后的危险因素。结论脑胶质瘤组织中YTHDF2升高,UBXN1降低,两者与WHO分级及肿瘤直径有关。YTHDF2和UBXN1是评估脑胶质瘤患者预后的独立因素。

RNA结合蛋白Musashi-2调控肝细胞癌进展的分子机制研究

目的研究RNA结合蛋白Musashi-2(MSI2)在肝细胞癌(HCC)中的作用及相关机制。方法获取来自癌症基因组图谱数据库(TCGA)和基因型-组织表达数据库(GTEX)的HCC患者mRNA表达数据及相应的临床信息,在50对匹配的肿瘤/正常HCC样本中,评估MSI2的表达水平。进一步通过蛋白质相互作用网络(PPI)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)和RNA互作组百科全书(ENCORI)数据库,探究MSI2如何影响HCC进展。设计3对针对MSI2和β-catenin的短发夹RNA(shRNA)序列,将他们分别克隆到慢病毒载体中,作为敲减质粒分别转染HepG2、MHCC97H和MHCC97L细胞,用于构建MSI2敲减组细胞(HepG2^(sh-MSI2)组、MHCC97H^(sh-MSI2)组)、β-catenin敲减组细胞(MHCC97L^(sh-β-catenin)组)和各自的阴性对照组细胞(HepG2^(sh-Ctrl)组、MHCC97H^(sh-Ctrl)组以及MHCC97L^(sh-Ctrl)组)。通过蛋白质印迹法检测MSI2的过表达水平。CCK-8和集落形成实验检测肝癌细胞增殖情况。将HepG2^(sh-Ctrl)组、HepG2^(sh-MSI2)组、MHCC97L^(sh-Ctrl)组和MHCC97L^(sh-β-catenin)组细胞悬液分别注射于各组裸鼠的前大腿处皮下,4周后处死裸鼠,取出肿瘤测量体积。结果基于TCGA和GTEX数据库的分析显示,MSI2在50对匹配的肿瘤中的表达高于正常样本(2.073±0.767比1.256±0.260),差异具有统计学差异(P<0.001)。利用PPI、KEGG通路富集以及ENCORI数据库分析MSI2在HCC进展中的潜在机制,结果显示,在HCC中,MSI2与β-catenin(r=0.455,P<0.001)、转录因子7(TCF7)(r=0.142,P=0.006)、淋巴增强因子1(LEF1)(r=0.246,P<0.001)均呈正相关。与HepG2^(sh-Ctrl)组相比,HepG2^(sh-MSI2)组中MSI2、β-catenin、TCF7、LEF1的表达均下调,与MHCC97H^(sh-Ctrl)组相比,MHCC97H^(sh-MSI2)组中MSI2、β-catenin、TCF7、LEF1的表达均下调,差异均具有统计学意义(均P<0.001)。与MHCC97L^(sh-Ctrl)组相比,MHCC97L^(sh-β-catenin)组中β-catenin的表达下降,差异具有统计学意义(P<0.001)。CCK-8增殖实验结果显示,与HepG2^(sh-Ctrl)组相比,HepG2^(sh-MSI2)组肝癌细胞活性降低,与MHCC97H^(sh-Ctrl)组相比,MHCC97H^(sh-MSI2)组肝癌细胞活性降低,与MHCC97L^(sh-Ctrl)组相比,MHCC97L^(sh-β-catenin)组肝癌细胞活性降低,差异均具有统计学意义(均P<0.001)。集落形成实验结果显示,与HepG2^(sh-Ctrl)组相比,HepG2^(sh-MSI2)组肝癌细胞形成集落的能力降低,与MHCC97H^(sh-Ctrl)组相比,MHCC97H^(sh-MSI2)组肝癌细胞形成集落的能力降低,与MHCC97L^(sh-Ctrl)组相比,与MHCC97L^(sh-β-catenin)组肝癌细胞形成集落的能力降低,差异均具有统计学意义(均P<0.001)。与HepG2^(sh-Ctrl)组相比,HepG2^(sh-MSI2)组裸鼠的肿瘤体积减小[(160.19±60.22)mm^(3)比(480.46±65.28)mm^(3)],与MHCC97L^(sh-Ctrl)组相比,MHCC97L^(sh-β-catenin)组裸鼠的肿瘤体积减小[(456.48±38.23)mm^(3)比(845.67±33.19)mm^(3)],差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论MSI2表达上调通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖。

TARBP2降解AKAP12转录本促进人乳腺癌细胞转移

目的研究乳腺癌细胞中反式激活反应RNA结合蛋白2(TARBP2)转录后调控转移抑制基因A激酶锚定蛋白12(AKAP12)表达的作用及机制。方法生物信息学方法分析TARBP2在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移间的关联和乳腺癌中TARBP2与AKAP12表达之间的关联。利用脂质体转染后药物筛选的方法在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231中稳定过表达TARBP2。裸鼠成瘤实验检测肿瘤肺转移;RT-qPCR检测靶基因AKAP12表达及半衰期。荧光素酶报告基因实验检测调节基因3′非编码区(3′UTR)的能力。EMSA实验检测TARBP2结合3′UTR中的茎环结构。结果人乳腺癌组织中TARBP2高水平表达且与患者淋巴结转移密切相关;TARBP2显著促进MDA-MB-231细胞肺转移(P<0.05);TARBP2显著抑制AKAP12表达(P<0.01)及其mRNA半衰期(P<0.05);TARBP2显著降低含AKAP123′UTR的报告基因荧光素酶活性(P<0.05)并结合其茎环结构;人乳腺癌组织中TARBP2表达与AKAP12表达呈显著负性关联(P<0.001)。结论TARBP2抑制AKAP12表达可能是其促进乳腺癌转移的机制之一。

基于CRISPR-Cas9系统敲除YTHDF2对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为影响的研究

目的:探讨使用CRISPR-Cas9系统敲除YTH结构域m6A RNA结合蛋白2(YTHDF2)后对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响。方法:培养子宫颈癌HeLa细胞,使用CRISPR-Cas9系统构建YTHDF2敲除细胞系;分为对照组、敲除1组和敲除2组,行克隆形成实验、CCK8实验、裸鼠移植瘤模型分析YTHDF2在体内、体外增殖中的作用,RNA测序探讨作用机制。结果:双sgRNA片段敲除策略成功敲除YTHDF2,敲除1组、敲除2组增殖曲线明显低于对照组,表现为时间依赖性,与对照组相比,敲除1组、敲除2组的HeLa细胞增殖能力显著下降,细胞克隆形成数明显降低,皮下移植瘤质量明显减小,差异均有统计学意义(P<0.001);RNA水平负调控细胞周期G2/M期转换的基因集上调,细胞黏附分子基因集下调,Ras和Wnt信号通路下调,差异均有统计学意义(FDR<0.05)。结论:敲除YTHDF2通过上调负调控细胞周期G2/M期转换的基因,抑制子宫颈癌细胞增殖、克隆形成及皮下成瘤能力。

敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对MGC-803人胃癌细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用UCSC Cancer Browser下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛查YTHDF2 mRNA在胃癌中的表达情况。设计并构建能够靶向敲低YTHDF2的短发夹RNA(shRNA)病毒载体;病毒感染MGC-803细胞,敲低YTHDF2水平后,实时荧光定量PCR检测YTHDF2 mRNA水平,Western blot法检测YTHDF2蛋白水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果通过TCGA数据库查询发现YTHDF2在胃癌组织中高表达。成功构建YTHDF2敲低的稳定转染MGC-803细胞。与对照组相比,YTHDF2敲低后,明显抑制细胞增殖;G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少;细胞凋亡率升高。结论敲低MGC-803胃癌细胞YTHDF2水平,抑制胃癌细胞增殖并促进其凋亡。

诱骗RNA靶向阻断RNA结合蛋白E2诱导K562细胞向粒系分化

目的应用诱骗RNA（decoy RNA）靶向阻断RNA结合蛋白E2（hnRNP E2）调节CCAAT增强子结合蛋白（C／EBPα）基因异常翻译的作用，诱导白血病细胞株K562细胞向粒系分化，并初步探讨其分子机制。方法将已构建的hnRNP E2 decoy RNA表达质粒经阳离子脂质体的介导转染K562细胞，用G418筛选出稳定表达细胞株，用RT—PCR和Western blot方法检测该细胞株C／EBPα和粒细胞集落刺激因子受体（G—CSFR）的表达，通过瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态，免疫细胞化学法分析细胞粒系分化抗原CD13、CD15的表达。结果筛选到稳定表达细胞株pG细胞，与未转染的K562细胞相比，其C／EBPα mRNA水平无改变，但相对分子质量42×10^3的C／EBPα蛋白（42kD—C／EBPα）水平升高了（49．7±5．5）％（P〈0．05）；G—CSFR mRNA水平升高了（42．1±3．6）％（P〈0．05），其蛋白水平也升高了（37．4±6．2）％（P〈0．05）；细胞形态学方面观察到pG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞的特征，且免疫细胞化学法检测显示粒系分化抗原CD13、CD15表达增高[阳性细胞百分比分别为（18、7±2．5）％和（15．2±2．6）％]。结论hnRNP E2 decoy RNA能够诱导K562细胞向粒系分化，G—CSF对其分化过程有促进作用，其作用机制可能与decoy RNA靶向阻断hnRNP E2，调节C／EBPα mRNA翻译，恢复42kD—C／EBPα表达，上调42kD-C／EBPα下游分化基因G-CSFR的表达有关。

RNA结合蛋白Rbpms 2在小鼠卵母细胞及早期胚胎中的表达及意义

目的:检测分析多重剪接RNA结合蛋白2(RNA binding protein with multiple splicing 2,Rbpms2)在小鼠卵母细胞及早期胚胎中的表达及分布情况。方法:运用生物信息学资源分析Rbpms2基因表达的组织分布情况以及Rbpms2蛋白的功能结构域;通过免疫印迹法、免疫组织化学及免疫荧光检测,分析Rbpms2在小鼠卵母细胞及早期胚胎中的表达和分布。结果:生物信息学检索显示Rbpms2 mRNA在卵细胞及受精卵中高表达,其蛋白具有一个RNA识别结构域。免疫印记法证实Rbpms2蛋白在小鼠卵母细胞中高表达,同时免疫组织化学显示阳性信号主要集中在卵母细胞胞质中,免疫荧光显示在早期胚胎中,Rbpms2的信号集中在细胞核中。结论:Rbpms2在小鼠卵母细胞及早期胚胎中呈高水平表达,提示其可能在卵母细胞和早期胚胎的发育过程中发挥重要作用。

IGF2BP3低甲基化与结肠癌组织分化的关系

目的探讨IGF2BP3低甲基化与结肠癌组织分化之间的关系。方法收集2011年3月—8月在我院就诊的结肠癌组织标本41例,其中高分化腺癌19例,中分化腺癌12例,低分化腺癌10例,同时收集结肠炎标本12例作为对照。免疫组化和Western blot检测标本IGF2BP3表达。改进ELISA法检测标本DNA总甲基化水平,甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测IGF2BP3甲基化水平。结果免疫组化和Western blot结果示结肠癌组织IGF2BP3表达高于结肠炎组织(P<0.05),低分化结肠癌组IGF2BP3表达水平最高,中、高分化程度间表达无明显差异。结肠癌组基因总甲基化水平和IGF2BP3甲基化水低于结肠炎组(均P<0.05),且随着结肠组织分化程度降低,IGF2BP3甲基化水平依次降低(P<0.05)。结论 IGF2BP3甲基化水平与结肠癌分化程度密切相关,在调控结肠癌组织IGF2BP3表达中具有重要价值。

安胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠YTHDF1和YTHDF2表达的影响

目的探讨安胃汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠中m6A甲基化相关识别蛋白[YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白1(YTHDF1)、YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(YTHDF2)]表达的影响。方法采用脱氧胆酸钠和氨水联合饥饱失常饮食控制法建立CAG大鼠模型,造模成功后随机分为阴性对照组,安胃汤高、中、低剂量组和阳性对照组;正常组正常饲养。安胃汤高、中、低剂量组给药剂量分别为20.6 g/kg、10.3 g/kg、5.15 g/kg,阳性对照组给予剂量为4.43 g/kg的胃复春混悬液,正常组与阴性对照组给予等体积的蒸馏水。采用HE染色法观察大鼠胃组织病理变化情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测YTHDF1、YTHDF2 mRNA表达,Western blot检测YTHDF1、YTHDF2蛋白表达。结果与正常组比较,阴性对照组大鼠胃组织YTHDF1、YTHDF2 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),大鼠胃组织发生炎性病变。与阴性对照组比较,高剂量组YTHDF1、YTHDF2 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),大鼠胃组织病理学改善,且各项指标变化与安胃汤剂量呈依赖性。结论安胃汤能够修复CAG大鼠胃黏膜损伤,改善胃功能,抑制病理进展,可能与调节YTHDF1、YTHDF2表达有关。

LncRNA ZEB2-AS1在Ⅲ期大肠癌中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白(ZEB)2-AS1在Ⅲ期大肠癌中的表达及意义。方法诊断为Ⅲ期大肠癌并行手术切除患者87例,采用实时定量PCR法检测其大肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中lncRNA ZEB2-AS1的表达,分析其与临床病理参数及预后的关系。结果大肠癌组织中lncRNA ZEB2-AS1表达较癌旁正常黏膜组织增高18.75倍(P<0.01),其增高与患者死亡相关(P<0.01)。LncRNA ZEB2-AS1高表达(≥381.5)组5年生存率低于低表达(<381.5)组(43.2%vs.76.7%)(P<0.01)。LncRNA ZEB2-AS1表达、淋巴结分期和肿瘤部位是Ⅲ期大肠癌患者预后的独立影响因素(P<0.05或P<0.01)。结论 LncRNA ZEB2-AS1参与大肠癌的发生和发展,是影响预后的独立因素。