赭纤虫RNA聚合酶Ⅰ基因片段的分析

赭纤虫被认为是一类进化过程中较为原始的纤毛虫。本研究以储纤虫基因组DNA为模板，利用锚定PCR技术，扩增出RNA聚合酶I第二大亚基基因片段，并对扩增出的基因片段进行了克隆和序列分析。结果表明：由该基因片段导出的氨基酸序列中共有10个半胱氨酸，均由通用密码子UGU、UGC编码，开放读框中不存在由UGA转译为半眈氨酸这一非通用密码的现象。

RNA聚合酶Ⅰ抑制剂通过NF-κb调控鼻咽癌细胞系CNE-1的增殖、侵袭与凋亡

目的探讨RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭与凋亡的作用机制。方法免疫组织化学染色检测鼻咽癌与癌旁组织NF-κb的表达。Western blot检测相关效应蛋白在蛋白质水平的表达。CCK-8法检测不同浓度药物处理后CNE-1细胞系的增殖情况。Transwell法比较药物处理后CNE-1细胞系的侵袭能力变化。流式细胞术检测不同浓度药物处理后鼻咽癌细胞系CNE-1细胞周期和凋亡的变化。结果鼻咽癌组织中磷酸化NF-κb表达较癌旁组织明显增高(P<0.01)。NF-κb总蛋白在蛋白水平无明显变化,但磷酸化水平在药物处理后明显降低(P<0.01)。Bax较对照组明显增高(P<0.01),Bcl-2较对照组明显降低(P<0.01)。药物处理后,发现CNE-1细胞系的增殖、侵袭能力较对照组明显降低且差异具有统计学意义(均P<0.01);细胞凋亡较对照组明显增多(P<0.01),药物处理组较对照组细胞周期明显阻滞在G_2期(P<0.01)。结论 RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461能够通过调控NF-κb磷酸化促进鼻咽癌CNE-1细胞系凋亡及周期阻滞,抑制其增殖与侵袭能力。

应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术构建肾综合征出血热汉坦病毒微复制子

目的 构建肾综合征出血热病原汉坦病毒的微复制子,初步研究汉坦病毒基因组非编码区的调控功能.方法 利用RNA聚合酶Ⅰ体系,将报告基因绿色荧光蛋白（GFP）分别插入汉坦病毒76118毒株三个片段5＇和3＇非编码区之间,所形成的嵌合cDNA反向插入含RNA聚合酶Ⅰ的表达载体PHH21中,获得汉坦病毒三个片段的微复制子L-GFP-PHH21、M-GFP-PHH21、S-GFP-PHH21,将微复制子转染汉坦病毒76118株预先感染的vero细胞,48h后观察GFP表达情况.结果 汉坦病毒L、M、S三个片段微复制子均能观察到绿色荧光的表达,其中M片段最强,L片段最微弱.结论 以RNA聚合酶Ⅰ体系为基础构建的汉坦病毒L、M、S三个片段的微复制子是有功能的；汉坦病毒非编码区含有对汉坦病毒转录复制的重要调控原件.此微复制子系统可用于进一步研究汉坦病毒基因结构和功能的关系、基因转录和复制的调控机制,为实现汉坦病毒的病毒拯救奠定基础.

真核生物RNA聚合酶的结构和功能概述

真核生物中存在三种RNA聚合酶,它们对基因的表达起着十分重要的作用。本文概述三种RNA聚合酶的结构和功能。

人肠道病毒D68型微复制子的建立

建立人肠道病毒D68型（EV-D68）微复制子体系。利用增强绿色荧光蛋白（EGFP）或萤火虫荧光素酶（FLuc）报告基因替换病毒编码区,通过酶切连接,构建EV-D68 T7和PolⅠ系统微复制子体系,获得重组质粒pT7-miniEGFP、pT7-miniFLuc、pHH21-miniEGFP、pHH21-miniFLuc和pHH21-miniFLucΔpolyC。微复制子转染RD细胞,48h后荧光显微镜观察EGFP表达情况或用双报告系统检测荧光素酶表达水平。T7和PolⅠ系统微复制子均可表达报告基因,但PolⅠ系统荧光素酶表达水平是T7系统的5倍。并且病毒非编码区的PolyC区域对于病毒蛋白的表达起着重要的作用。本研究成功构建了EV-D68微复制子体系,为EV-D68非编码区功能研究提供工具。