polo样激酶1、RNA聚合酶Ⅱ亚基A在人脑胶质瘤中的表达及与预后的关系

目的 探讨polo样激酶1(PLK1)、RNA聚合酶Ⅱ亚基A(POLR2A)在人脑胶质瘤(BG)中的表达及与预后的关系。方法 选取86例BG患者作为观察组,另选取30例非肿瘤脑疾病患者作为参照组,收集观察组患者的BG组织和参照组患者的非肿瘤脑组织。比较两组患者PLK1、POLR2A表达情况和不同临床特征BG患者的BG组织中PLK1、POLR2A的阳性表达情况;比较不同PLK1、POLR2A表达情况BG患者的生存情况;采用Cox回归模型分析BG患者预后的影响因素。结果 观察组患者PLK1、POLR2A阳性表达率分别高于参照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。低分化BG患者的BG组织中PLK1、POLR2A阳性表达率均高于中高分化患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。PLK1、POLR2A阳性表达患者的中位生存时间均明显短于PLK1、POLR2A阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Cox多因素回归分析结果显示,低分化、PLK1阳性表达、POLR2A阳性表达均为BG患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论 BG患者PLK1、POLR2A呈高表达,PLK1、POLR2A高表达BG患者中位生存时间缩短,低分化、PLK1阳性表达、POLR2A阳性表达均为BG患者预后的独立危险因素。

RNA聚合酶Ⅱ大亚基羧基末端结构域:简单重复不简单

转录作为遗传信息传递的关键步骤,由DNA依赖的RNA聚合酶执行。真核生物中,蛋白编码基因的转录由RNA聚合酶II(polymerase Ⅱ,Pol II)完成,Pol Ⅱ最大亚基RPB1羧基末端结构域(carboxy-terminal domain,CTD)包含特殊的串联七肽重复序列,这些序列对转录过程至关重要。本文系统回顾并总结了真核生物RPB1 CTD的序列特征、演化历程,及其在转录过程中的调控作用,特别是通过翻译后修饰的动态变化来参与调控转录和加工过程,以加深人们对真核生物基因转录的复杂调控机制的理解,并为RPB1 CTD作用机制的进一步研究提供参考和借鉴。

RNA聚合酶Ⅱ启动子调控RNA干扰在肿瘤治疗中的应用前景

RNA干扰是双链RNA介导的特异性转录后基因表达沉默现象.由于双链小干扰RNA介导的RNA干扰技术设计简便、作用迅速、效果明显,目前已被广泛应用于基因功能和重大疾病治疗的研究,尤其为肿瘤治疗提供了一条新途径.利用RNA干扰技术通过调节肿瘤发生发展相关基因的表达可制定出一系列有效的抗癌策略.然而在现行大多数策略中往往采用不可调控的RNA聚合酶Ⅲ启动子(H1,U6)表达经典的发夹结构RNA,经由Dicer酶切割成功能性siRNA,因此缺乏组织细胞靶向性和抗癌效率.最新研究表明,采用RNA聚合酶Ⅱ启动子可弥补由RNA聚合酶Ⅲ启动子调控RNA干扰缺陷和不足.此外,运用病毒载体特别是具有靶向和溶瘤效应的肿瘤特异性复制腺病毒,介导RNA聚合酶Ⅱ启动子调控表达siRNA有望成为更有效的治疗手段.

几种不同鹅膏菌毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ抑制作用的比较研究

用鹅膏菌属（Amanita）含α-毒伞肽的毒素粗提液培养新鲜绿豆，结果在36小时后，各种不同毒苗的毒素粗提液培养的绿豆生长情况有明显不同，用紫外吸收法测定蛋白质含量，发现毒素粗提液培养的绿豆细胞中蛋白质含量比蒸馏水培养的有明显下降，这表明α-毒伞肽的作用机理的确是通过抑制RNA聚合酶Ⅱ而寻致蛋白质合成减少。

日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ-p15亚单位的分离和序列分析

目的 分离和鉴定日本血吸虫 (Schistosomajaponisum ,Sj)新基因。 方法 应用表达序列标签 (Expressedse quencetags ,ESTs)法随机筛选SjcDNA文库 ,通过PCR直接序列测定技术和同源性比较对阳性插入片段进行鉴定。采用亚克隆技术和生物信息学分析对日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录延长因子SⅢ -p15亚单位进行结构和功能的鉴定。结果 我们从SjcDNA文库中随机筛选到一个cDNA克隆 ,它含有一个 371个碱基组成的阅读框 ,编码 118个氨基酸 ,与哺乳动物等的RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位具有较高的同源性 ,且具有该因子所特有的氨基酸序列 ,表明我们已经获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位。 结论 获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位的全长cDNA序列 。

RNA聚合酶Ⅱ同BAF复合物和转录因子NF1/CTF之间的联系

通过免疫荧光共定位实验,研究了RNA聚合酶Ⅱ的亚基Rpb1,Rpb6,Rpb8与BAF复合物和转录因子NF1/CTF在基因转录活动中的联系.实验证实,RNA聚合酶Ⅱ的亚基Rpb1与BAF复合物有联系,Rpb6与BAF复合物联系不紧密,Rpb6与NF1/CTF联系密切,Rpb8与BAF复合物和NF1/CTF有部分联系.免疫沉淀实验也证实RNA聚合酶Ⅱ与BAF复合物和NF1/CTF一同参加了转录起始复合物的形成.

鹅膏毒肽与RNA聚合酶Ⅱ相互作用的研究进展

RNA聚合酶Ⅱ是真核生物中最活跃最复杂的RNA聚合酶之一,具有非常重要的生物学功能,而鹅膏(Amanita)毒肽对其活性具有专一的高抑制性,这使鹅膏毒肽与RNA聚合酶Ⅱ相互作用的研究尤为重要。鉴于国内对鹅膏毒肽与RNA聚合酶Ⅱ相互作用的研究薄弱,笔者从鹅膏毒肽活性位点的确定、两者相互作用方式、抑制机理及抑制能力等方面进行总结,以期为两者的深入研究提供参考。

亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因的生物信息学分析

目的分析和预测亚洲带绦虫成虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因及其编码的蛋白的结构和功能。方法利用一系列的生物信息学软件分析了亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、二级结构等蛋白质性质,并同日本血吸虫、秀丽隐杆线虫、果蝇、人等的蛋白作了对比。结果Blastx分析该基因为全长基因,该基因全长645bp,编码区为45～517,编码157个氨基酸;无跨膜区;具有较稳定的理化性质。结论应用生物信息学方法从亚洲带绦虫成虫cD-NA文库中筛选出聚合酶亚单位Ⅱ基因。

吗啡对胶质瘤C6细胞RNA聚合酶Ⅱ通用转录因子F基因表达的影响

目的 :检测吗啡对 C6胶质瘤细胞 RNA合成的影响。方法 :通过 RT- PCR方法检测吗啡影响 C6胶质瘤细胞 RNA聚合酶 通用转录因子 F (TF F)基因表达的变化。结果 :吗啡作用于 C6胶质瘤细胞与相应对照组相比 ,TF F转录产物均明显减少 ;纳络酮能阻断吗啡对 TF F基因表达抑制的作用。结论 :吗啡通过μ受体途径介导 C6胶质瘤 TF

BAF复合物和转录因子NF1/CTF与RNA聚合酶Ⅱ的联系

通过ELISA实验观察小鼠脾T淋巴细胞和Jurkat细胞经ConA处理后,BAF(hSWI/SNF)复合物、转录因子NF1/CTF、RNA聚合酶Ⅱ蛋白表达量的变化情况.实验证实,细胞活化后,复合物BAF(hSWI/SNF)、转录因子NF1/CTF、RNA聚合酶Ⅱ的表达发生了变化,表明它们和细胞的转录活动有关.

基于RNA聚合酶Ⅱ的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立

应用重叠PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5'末端和3'末端分别引入具有自我剪切功能的核酶HamRz和HDV序列,然后分别将含有核酶序列的A、B节段构建到pCI真核载体当中,构建真核载体pCI-ma核pCI-mb。在脂质体介导下,将pCI-ma和pCI-mb共转染Vero细胞。细胞病变观测、间接免疫荧光试验和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救。

赭纤虫RNA聚合酶Ⅱ锌指基因片段的表达、纯化及多克隆抗体的制备

以一种进化较为原始的单细胞真核生物日本赭纤虫(Blepharisma japonicum)大核基因组DNA为模板,PCR扩增 得到了RNA聚合酶锌指基因片段,并构建重组表达质粒pGEX-6p1-ZFbl,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,SDS- PAGE和Western blot分析证明目的蛋白得到了可溶性融合表达。用纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。 Western印迹和ELISA鉴定结果表明抗体特异性较高,效价高达1:15000。

重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12-Fc融合蛋白载体的构建和表达

目的用p IRES2-EGFP-Fc载体构建重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)-Fc真核表达质粒,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达MED12-Fc融合蛋白,纯化和鉴定MED12-Fc。方法根据Gen Bank中的序列信息,从基因组上扩增出人MED12基因第2、3和4外显子,并通过Overlap聚合酶链反应(PCR)拼接获得目的基因片段,以p IRES2-EGFP-Fc真核表达质粒为载体,构建重组人MED12-Fc真核表达质粒。使用脂质体瞬时转染293T细胞,48 h收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定质粒的表达能力。表达质粒电转CHO细胞,通过G418抗性筛选及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达的稳定细胞株。使用稳定细胞株培养表达人MED12-Fc融合蛋白,收集上清液,用Proein A亲和纯化柱纯化蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)检测蛋白质分子量。结果通过DNA测序和瞬时转染表达鉴定,证实MED12第2、3和4外显子基因序列正确,成功获得重组人MED12-Fc真核表达质粒。通过电转化、G418及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达重组人MED12-Fc的稳定表达细胞株。通过细胞培养,亲和层析纯化,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白。结论成功构建MED12-Fc融合蛋白的表达载体,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白,为进一步研究MED12蛋白功能奠定基础。

RNA聚合酶Ⅱ转录延伸因子

当RNA聚合酶Ⅱ(RNAP Ⅱ)离开启动子开始转录延伸时,会遇到包括紧密包装形成染色质的核小体在内的多种障碍,细胞内存在多种因子可协助RNAP Ⅱ克服这些障碍,保证转录的顺利进行。遗传和生化研究已经分离和鉴定了一些在此过程中起作用的延伸因子(elongationfactor),现依据作用方式和效果对目前发现的主要延伸因子的研究进展进行了分类综述。

RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12基因突变在人类疾病发病中的研究进展

RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)是中介体复合物的一个亚基,在真核细胞中调节转录,并参与受体酪氨酸激酶、核受体和Wnt的信号通路。MED12分子的进化保守区域具有重要的转录调控功能,但是MED12基因序列上也存在突变热点,这些位点的突变将会对MED12蛋白的功能产生影响,最终导致不同疾病的发生,如Opitz-Kaveggia综合征、Lujan综合征、子宫肌瘤、前列腺癌等。该文围绕MED12的突变位点及其产生的相关疾病进行综述,旨在为更好地了解MED12基因的功能以及为临床诊断和治疗提供新的理念。

双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒

目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。

RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动的长双链RNA干扰载体的构建与验证

为了探索构建由RNA聚合酶Ⅱ型启动子驱动、能有效避免干扰素反应的表达长双链RNA的RNA干扰载体,试验在转录单元两端各添加了一个自剪切核酶序列,在转录后切成RNA出核所必要的5'帽子和3'polyA尾,以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因插入2个核酶之间作为试验载体,以表达红色荧光蛋白基因的载体作转染效率校准,通过瞬间转染对荧光蛋白的表达情况进行观察和RT-PCR分析。结果表明:在转染效率基本一致的情况下,试验组未观察到绿色荧光;2个核酶能够完全自剪切,试验组细胞质中有EGFP mRNA的存在,但与正常对照组相比下降了46.1%。说明研究设计的载体达到了延迟表达RNA出核的目的,为用该载体表达长双链RNA时在其出核之前被Dicer酶有效切割成小双链RNA从而避免其出核引起干扰素反应提供了时间保障。

真核生物RNA聚合酶Ⅱ启动子的计算机预测

启动子是基因组序列中靠近基因转录起始位点的区域,是影响基因表达的重要功能单位之 一。除实验方法发现或验证序列的启动子外,现已经有多种启动子序列的计算机预测方法,如位点比重 阵列(PWM)、隐马尔柯夫模型(HMM)、神经网络、低聚复合物和CpG岛等。本文综述了现有真核生物基 因启动子序列的生物信息研究技术。

非完全互补shRNA对RNA聚合酶Ⅱ启动子调控的RNAi的影响

RNA干扰(RNAi)是一种转录后基因沉默技术,可有效诱导序列特异性基因沉默.由RNA聚合酶Ⅱ启动子调控表达的小发卡RNA可有效介导RNAi效应,为组织特异性基因沉默提供了一条新的途径.但是,由RNA聚合酶Ⅱ启动子调控表达的小发卡RNA(shRNA)在序列上与靶基因非完全互补对RNAi效应的影响鲜有报道.本文初步探索RNA聚合酶Ⅱ启动子调控表达的shRNA碱基发生突变或缺失对RNAi效应的影响.研究表明,靶向hTERT mRNA的碱基突变shRNA显著降低RNAi效应,而靶向GFP mRNA的碱基缺失shRNA对RNAi效应没有显著影响.本研究为非完全互补shRNA对RNAi效应的进一步深入研究提供了理论与实验依据.