亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因的生物信息学分析

目的分析和预测亚洲带绦虫成虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因及其编码的蛋白的结构和功能。方法利用一系列的生物信息学软件分析了亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、二级结构等蛋白质性质,并同日本血吸虫、秀丽隐杆线虫、果蝇、人等的蛋白作了对比。结果Blastx分析该基因为全长基因,该基因全长645bp,编码区为45～517,编码157个氨基酸;无跨膜区;具有较稳定的理化性质。结论应用生物信息学方法从亚洲带绦虫成虫cD-NA文库中筛选出聚合酶亚单位Ⅱ基因。

高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NADH脱氢酶亚单位4、5表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位4、5表达的影响.方法 原代培养Sprague-Dawley（SD）胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至接近汇合状态时随机分为高氧组和正常对照组,高氧组持续暴露于常压高浓度氧中（氧浓度〉90%.CO2浓度5%）,正常对照组仍置于5%CO2培养箱中,两组均继续分别培养6、12、24h;采用免疫细胞化学染色SP法检测NADH脱氢酶亚单位4（DN4）蛋白的表达.采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ND4、NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达.结果 （1）SP法结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达增强,12h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达减弱,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）,24hAEC Ⅱ ND4蛋白的表达显著减弱（P〈0.05）;（2）RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA表达增强,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.12、24h AECⅡ ND4、ND5 mRNA表达显著减弱（P〈0.05）.结论 持续高氧下调胎鼠AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA和AEC Ⅱ ND4蛋白的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程.

真核生物RNA聚合酶Ⅱ启动子的计算机预测

启动子是基因组序列中靠近基因转录起始位点的区域,是影响基因表达的重要功能单位之 一。除实验方法发现或验证序列的启动子外,现已经有多种启动子序列的计算机预测方法,如位点比重 阵列(PWM)、隐马尔柯夫模型(HMM)、神经网络、低聚复合物和CpG岛等。本文综述了现有真核生物基 因启动子序列的生物信息研究技术。

流感病毒聚合酶PA亚单位抗血清的制备

本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒（AⅣ）A／Duck／Zhejiang/11／00中分段及全长扩增PA基因片段，将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a，经测序验证正确后，获得重组阳性质粒，将重组质粒转化BL21细菌后诱导，实现质粒在大肠杆菌中的表达，重组表达蛋白经Ni＋柱纯化后分别与弗氏免疫佐剂乳化成油乳剂苗免疫新西兰大耳白兔，获得抗PA的免疫抗血清。

PAQosome各亚基的基本功能研究概况

PAQosome可协助热激蛋白90组装大量的大型多亚基蛋白复合物,并参与蛋白质合成、核糖体生物发生、转录、剪接等基本细胞功能。目前,PAQosome各亚基作用的相关研究主要集中在肿瘤方面,其在多数肿瘤中上调,且与肿瘤的发生、发展、预后密切相关。此外,其还与阿尔茨海默病的发生、淋巴细胞和生殖细胞的发育、纤维化的形成有关,而上述功能的实现依赖于PAQosome各亚基的功能差异。因此,深入认识PAQosome各亚基的基本功能有助于进一步指导后续PAQosome在非肿瘤疾病中功能的研究。

套式聚合酶链式反应诊断三日疟原虫感染的临床应用

目的应用套式聚合酶链式反应(PCR)扩增小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因诊断三日疟原虫感染,以减少三日疟的漏诊和误诊。方法分别提取可疑三日疟患者抗凝血DNA和对照间日疟、恶性疟患者抗凝血DNA,以此为模板,用疟原虫属特异性引物进行第一轮扩增;然后以第一轮扩增产物为模板,用4种疟疾的种特异性引物进行第二轮扩增,比较扩增出的18 SSU rRNA基因片段的大小,并对目的片段进行测序鉴定。结果经属特异性引物PCR扩增后,3个样本均出现大小约为1 200bp的条带。经种特异性引物PCR扩增后,间日疟及恶性疟确诊样本均扩增出相应的120bp和205bp特异性条带;可疑患者样本仅在用三日疟原虫种特异性作引物时扩增出144bp特异条带,与理论值相符,与Genbank标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确。证实患者感染三日疟原虫。结论利用小亚单位核糖体核糖核酸基因片段三日疟种特异引物进行扩增可以用于诊断三日疟原虫感染。

URI的病理生理学作用研究进展

非传统型前折叠素RPB5交互因子(URI)作为前折叠蛋白家族的成员,广泛参与生物体内转录调节、凋亡调控及保护DNA完整性等多种生理病理学过程。它的基因表达、调控因素、功能以及与疾病的关系,尤其是它在肿瘤发生发展过程中的重要作用广受关注。而URI抗辐射作用的发现,也为研究辐射相关疾病提供了新的思路和设想。作者主要对URI的病理生理学作用研究进展作一综述。

免疫荧光技术在鱼类生殖细胞发育研究中的应用

在生殖细胞发育的相关研究中,功能分子标记在人类及其他模式生物中已经得到了广泛应用,但在鱼类中应用较少。本文采用RNA PolⅡCTD(S5)作为功能分子标记对鲤雄性生殖细胞的细胞核进行了免疫荧光研究,并对相关技术参数进行了深入的探索。研究结果表明,该方法可以在鲤雄性生殖细胞的多个发育阶段检测到与转录活性位点相关的染色体免疫荧光信号及细胞相特征,并发现荧光信号的质量会受到染色体制片及洗片等关键步骤的影响。本研究提供了一个重要的功能分子标记,并将之作为免疫探针在经济鱼类生殖细胞发育研究中进行尝试性应用,这为鱼类遗传育种中发育功能的检测提供了一个新的策略。

Tn5转座酶融合蛋白在CUT&Tag实验中的优化及评价

Tn5是一种细菌转座子。经改造的Tn5能够高效地切割DNA,同时连接上特定的接头序列,因而广泛应用于高通量二代测序文库构建中。CUT&Tag(Cleavage Under Target&Tagmentation)是一种改进的研究蛋白质与DNA互作的技术,具有重复性好、信噪比高及操作简便等优点。该技术采用pA(Protein A)或pG(Protein G)与Tn5形成融合蛋白,定位于特定抗体(用于识别目标蛋白),利用Tn5的特性,在目标位点附近打断DNA的同时引入测序接头,随后提取DNA,再进行PCR扩增即可获得测序文库。但不同类型的抗体与pA或pG的亲和力不同,因此限制了部分抗体在CUT&Tag技术中的应用。为克服这一局限,该文构建了pG与Tn5的融合蛋白表达载体,通过原核表达及亲和纯化的方式获得pG-Tn5重组蛋白;并以RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)特异性抗体PolⅡSer5P(小鼠IgG1型抗体和兔IgG型抗体)为例,在模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)中评估pA-Tn5与pG-Tn5在不同类型抗体的CUT&Tag测序文库构建中的效果。结果表明,IgG1型抗体与p G-Tn5的亲和力更高,构建的文库质量更好,而IgG型抗体与2种酶的亲和力相当;同时,较低起始量的植物材料也能获得较好的效果,证明了CUT&Tag的应用优势。该研究优化了CUT&Tag技术,可为后续CUT&Tag实验中针对不同抗体时Tn5融合蛋白的选择提供参考。