为阐明cilp基因在斑马鱼椎骨和肌间骨发育中的作用,利用CRISPR/Cas9建立斑马鱼cilp基因敲除纯合突变系(cilp^(-/-)),对其进行骨骼表型的观察,并进一步采用qRT-PCR分析14个骨骼发育相关基因在突变体胚胎发育阶段和成鱼骨骼中的表达水平...为阐明cilp基因在斑马鱼椎骨和肌间骨发育中的作用,利用CRISPR/Cas9建立斑马鱼cilp基因敲除纯合突变系(cilp^(-/-)),对其进行骨骼表型的观察,并进一步采用qRT-PCR分析14个骨骼发育相关基因在突变体胚胎发育阶段和成鱼骨骼中的表达水平变化。结果显示:与野生型斑马鱼相比,90 dph(Days post hatching)cilp^(-/-)斑马鱼的肌间骨数量显著减少了10.27%,而肌间骨的长度无明显变化;同时突变体斑马鱼中椎骨发生异常融合及髓棘缺失。qRT-PCR结果显示:与野生型相比,col1a1a、sp7、smad4a和smad5基因在胚胎发育的整个时期都存在显著的差异,在突变体成鱼尾部骨骼组织中bmp2a、bmp2b、smad5、sp7、runx2a、runx2b和bglap基因的表达量均显著低于野生型,表明cilp基因敲除导致了BMPs和SMADs家族基因的表达水平下降,并下调了下游的成骨细胞发育相关基因的表达量,推测cilp功能缺失可能通过抑制BMPs信号通路影响成骨细胞分化和骨形成,从而导致了肌间骨数量的减少和脊椎骨异常融合。展开更多
文摘为阐明cilp基因在斑马鱼椎骨和肌间骨发育中的作用,利用CRISPR/Cas9建立斑马鱼cilp基因敲除纯合突变系(cilp^(-/-)),对其进行骨骼表型的观察,并进一步采用qRT-PCR分析14个骨骼发育相关基因在突变体胚胎发育阶段和成鱼骨骼中的表达水平变化。结果显示:与野生型斑马鱼相比,90 dph(Days post hatching)cilp^(-/-)斑马鱼的肌间骨数量显著减少了10.27%,而肌间骨的长度无明显变化;同时突变体斑马鱼中椎骨发生异常融合及髓棘缺失。qRT-PCR结果显示:与野生型相比,col1a1a、sp7、smad4a和smad5基因在胚胎发育的整个时期都存在显著的差异,在突变体成鱼尾部骨骼组织中bmp2a、bmp2b、smad5、sp7、runx2a、runx2b和bglap基因的表达量均显著低于野生型,表明cilp基因敲除导致了BMPs和SMADs家族基因的表达水平下降,并下调了下游的成骨细胞发育相关基因的表达量,推测cilp功能缺失可能通过抑制BMPs信号通路影响成骨细胞分化和骨形成,从而导致了肌间骨数量的减少和脊椎骨异常融合。
