RNA解螺旋酶DDX5的生物学功能及其在肿瘤中的作用机制研究进展

RNA解螺旋酶DDX5(DEAD-box RNA helicase 5)又称RNA解螺旋酶p68蛋白,是一种广泛存在于真核生物中的重要蛋白质,在调节RNA的生物学过程中发挥着多种重要功能,包括转录、剪接、翻译和RNA稳定性的调节等。随着生命科学的发展和技术的进步,越来越多的研究表明,DDX5在肿瘤中的作用十分重要,不仅可以促进肿瘤的发生和发展,还可以作为潜在的治疗靶点和治疗监测指标。因此,针对DDX5在肿瘤发生发展中的作用机制进行深入研究,对于深入理解肿瘤的发生机制,以及制定有效的抗肿瘤治疗策略具有重要的意义,论文对DDX5的结构特点、生物学功能、在肿瘤中的作用机制及其研究进展进行了综述。

下调RNA解螺旋酶DDX5表达对胶质瘤SHG44细胞周期和凋亡的影响及其机制

目的探讨下调RNA解螺旋酶DDX5表达对胶质瘤SHG44细胞周期和凋亡的影响及其机制。方法2018年3月至2019年4月,将体外培养的SHG44细胞分为小干扰RNA(siRNA)-阴性对照(NC)组(转染NC siRNA)和siRNA-DDX5组(转染靶向DDX5的siRNA),采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中DDX5 mRNA的表达水平,流式细胞仪分别检测各组细胞周期分布和凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞中DDX5、β-连环素、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和存活蛋白的表达水平。结果与siRNA-NC组比较,siRNA-DDX5组细胞中DDX5 mRNA[(0.25±0.02)比(0.98±0.06)]和DDX5[(0.23±0.03)比(0.68±0.05)]、β-连环素[(0.25±0.02)比(0.80±0.06)]、c-Myc[(0.37±0.03)比(0.85±0.06)]、cyclin D1[(0.30±0.02)比(0.89±0.06)]和存活蛋白[(0.42±0.03)比(0.83±0.06)]蛋白的表达水平均明显减弱,细胞在G0/G1期所占百分比明显降低[(56.15±2.28)%比(65.76±3.22)%],而在S期所占百分比[(37.26±2.03)%比(26.95±1.16)%]和细胞凋亡率[(18.95±2.23)%比(7.02±1.26)%]明显升高(P<0.05)。结论下调DDX5表达可诱导胶质瘤SHG44细胞周期阻滞于S期并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-连环素信号通路的活化有关。

大豆解螺旋酶基因GH1的克隆与载体构建

非生物胁迫(高盐、低温、干旱)严重限制植物的生长与发育。研究表明,高等植物中的DEAD-box RNA解螺旋酶广泛参与植物非生物胁迫应答,过表达解螺旋酶基因可明显改良转基因植株的抗逆能力。目前,大豆的RNA解螺旋酶基因序列也已发现,但其具体功能还不明晰,有待进一步研究确定。本实验以大豆为实验材料,根据Genbank发表的RNA解螺旋酶基因GH1的序列设计引物,通过RT-PCR的方法将其体外扩增并构建相应的表达载体,为下一步的研究奠定基础。

DEAD⁃box解螺旋酶46基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的分析短发夹RNA(shRNA)介导DEAD⁃box解螺旋酶46(DDX46)基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量逆转录PCR(RT⁃qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)测定人正常乳腺上皮细胞系和乳腺癌细胞系中DDX46表达差异。以慢病毒介导的shRNA敲低乳腺癌SK⁃BR⁃3细胞中DDX46的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和sh⁃DDX46组。RT⁃qPCR检测各组细胞DDX46 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测DDX46蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平,克隆形成和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果DDX46 mRNA在各乳腺癌细胞系中的表达量均高于正常乳腺上皮细胞(P<0.05)。sh⁃DDX46组细胞DDX46 mRAN和蛋白表达水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。sh⁃DDX46组的细胞生长增殖能力明显低于两对照组(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组和sh⁃DDX46组SK⁃BR⁃3细胞凋亡率分别为(4.21±1.65)%、(5.36±1.23)%和(10.21±2.39)%,与空白对照组和阴性对照组相比,sh⁃DDX46组SK⁃BR⁃3细胞凋亡率明显增加(P=0.007;P=0.016)。沉默DDX46后凋亡通路蛋白B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)的表达量明显降低(P<0.05),Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶⁃3剪切体(cleaved Caspase⁃3)表达明显增高(P<0.05)。结论DDX46在乳腺癌细胞中高表达,沉默DDX46基因能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进凋亡,凋亡信号通路可能是其作用机制之一。

CHD5在恶性肿瘤中的研究进展

染色质结构域解螺旋酶DNA结合5(CHD5)位于1p36.3,首次被发现于神经母细胞瘤中一个频繁缺失的区域,是染色质重塑家族CHD家族中的第五个成员,通过核小体重塑以及形成去乙酰化复合体从而调节特定基因的转录。CHD5已被确定在多种恶性肿瘤中发挥抑癌基因的作用。有研究表明,CHD5在神经母细胞瘤及其他恶性肿瘤中常通过启动子区超甲基化而表达下调,其表达降低与不良临床表现及预后密切相关。本文主要围绕CHD5在恶性肿瘤中的作用进行综述,旨在为今后的研究提供理论依据。

miR-24-3p靶向CHD5影响甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性

目的探讨miR-24-3p调控染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)表达对甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性的影响。方法选取2018年9月—2020年9月杭州市萧山区第一人民医院首次确诊为甲状腺癌的患者125例,收集其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>4 cm)和相关临床病理资料。选取人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1。检测癌组织、癌旁组织和4种细胞中miR-24-3p、CHD5蛋白的表达。对SW579细胞分别转染miR-24-3p抑制物anti-miR-24-3p(anti-miR-24-3p组)和阴性对照物anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、miR-24-3p模拟物miR-24-3p mimics(miR-24-3p mimics组)和阴性对照物miR-NC(miR-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-NC(anti-miR-24-3p+si-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-CHD5(anti-miR-24-3p+si-CHD5组)。分析各组细胞的迁移能力、增殖能力和放射敏感性。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与CHD5的靶向关系。结果癌组织和甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1中miR-24-3p相对表达量均显著高于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05),CHD5蛋白相对表达量均显著低于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05)。SW579细胞miR-24-3p相对表达量最高,CHD5蛋白相对表达量最低。有无淋巴转移、不同临床分期的甲状腺癌患者之间miR-24-3p和CHD5蛋白表达差异有统计学意义(P<0.001)。抑制miR-24-3p表达可抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,并提高SW579细胞的放射敏感性(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控CHD5的表达;沉默CHD5可逆转抑制miR-24-3p表达对SW579细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响(P<0.05)。结论抑制miR-24-3p表达可上调CHD5,进而抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,提高其放射敏感性。

抑癌基因CHD5在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(chromodomain helicase DNA-binding protein5,CHD5)mRNA和蛋白的表达与胃癌发生、发展的关系.方法:采用RT-PCR和免疫组织化学方法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法,streptavidin-perosidase法),检测63例胃癌组织及相应癌旁组织(距癌5cm)中CHD5 mRNA和蛋白的表达情况,并分析胃癌组织中CHD5 mRNA和蛋白的表达与临床病理特征之间的关系.结果:CHD5 mRNA在63例胃癌组织中的表达量相对值明显低于在癌旁组织中的表达相对值(0.06±0.04vs0.34±0.06,t=59.204,P<0.01).在胃癌组织中,CHD5 mRNA的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(均P<0.05).CHD5基因的蛋白在胃癌组织和相应癌旁组织中的表达阳性率分别为36.5%和71.4%.在胃癌组织中CHD5蛋白的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(均P<0.05).结论:CHD5基因的低表达与胃癌的恶性程度及侵袭性关系密切,提示其可能是胃癌发生、发展过程中的一个重要的抑癌基因.

解螺旋酶RECQL5的功能及其在肿瘤中作用的研究进展

目前,研究已在小鼠和人类中发现5个Rec Q基因家族成员,分别是Recql1、BLM、WRN、Recql4和RECQL5。其中,RECQL5具有抑制姐妹染色体交换、抑制同源重组修复、阻止双链DNA断裂以及与TOPⅡα的协同作用等功能。最近研究在缺乏RECQL5的Apcmin小鼠小肠和结肠中均发现有肿瘤生长,提示RECQL5蛋白与肿瘤的发生密切相关。此外,RECQL5可能是影响喜树碱(CPT)治疗结直肠癌效果的主要因素,并可能是以伊立替康为基础药物治疗结肠癌效果评估的潜在生物标记物。本文就解螺旋酶RECQL5的功能及其在肿瘤中作用的研究进展进行综述。

miR-93转染对胃癌细胞株SGC-7901侵袭迁移能力的影响及机制探讨

目的观察上调miR-93表达对人胃癌细胞株SGC-7901侵袭迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法将miR-93模拟物及其阴性对照物分别转染胃癌细胞株SGC-7901,qRT-PCR检测转染细胞的miR-93,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测转染细胞的迁移及侵袭能力,qRT-PCR和Western blotting检测转染细胞的染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)mRNA和蛋白。结果与转染阴性对照物的SGC-7901细胞相比,转染miR-93模拟物的SGC-7901细胞miR-93表达明显增加(P<0.01)、迁移和侵袭能力增强(P均<0.05)、CHD5mRNA及蛋白表达下调(P均<0.05)。结论过表达miR-93可促进SGC-7901细胞的迁移和侵袭,其机制可能与CHD5表达下调有关。

散发性肌萎缩侧索硬化患者Senataxin基因的突变检测和分析

目的探讨散发性肌萎缩侧索硬化（SALS）患者Senataxin（SETX）基因突变特点。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增60例SALS患者SETX基因的26个外显子，应用直接基因测序法筛查其突变和多态，同时与200名健康对照进行比较。结果我们检出2个新的同义突变，分别为Asp844Asp（GAC→GAT）和Phe998Phe（TTC→TTT）。尽管在200名健康对照中未检出这2个同义突变，但经过不同物种间的同源序列比对，发现这2个序列不是保守序列，提示它们不是致病性突变。除此之外，我们还检出了19个多态。结论我们发现了SETX基因的2个同义突变和19个多态，进一步扩大了SETX基因的突变谱和多态谱。