庚型肝炎病毒基因组RNA转录体恒河猴肝内注射感染的初步研究

GBV-C/HGV RNA transcripts were transcribed in vitro from a single GBV-C/HGV full-length cDNA clone pHGVqz, and injected directly into the liver of Macaca mulatta to test their infectivity. Serum samples from the experimental Macaca mulatta were collected weekly after injection to detect ALT, anti-GBV-C/HGV and GBV-C/HGV RNA. At week 6 post injection, the liver tissues of the infected Macaca mulatta were dissected through operation for histological examination. The results showed that ALT level of the Macaca mulatta remained normal and anti-GBV-C/HGV kept negative after infection. GBV-C/HGV RNA was detected positve from week 1 through week 14 post injection. The liver biopsy showed light viral-hepatitis like histological changes. From the preliminary results, we concluded that the in vitro transcripts of GBV-C/HGV may be infectious. Further studies are under way to confirm the conclusion.

我国登革2、3、4型病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性研究

目的 研究我国登革 2、3、4型病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性 ,为构建登革病毒的感染性克隆、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法 以我国登革 2、3、4型病毒基因组全长cDNA为模板 ,用SP6RNA聚合酶系统制备体外RNA转录体 ,经电穿孔转染细胞 ,观察其致细胞病变效应。从病变细胞培养上清中提取总RNA ,用病毒特异引物进行RT PCR扩增 ,以证实细胞病变为转录体RNA的恢复病毒所致。结果 我国登革 2、3、4型病毒全长cDNA的体外RNA转录体均可使细胞产生病变 ,从细胞培养上清中可扩增出登革病毒特异的片段。结论 构建的我国登革 2、3、4型病毒全长cDNA的体外RNA转录体具有感染性 ,可在蚊传代细胞内恢复为登革病毒颗粒。

急性胰腺炎病人血清长链非编码RNA核富集转录体1、Toll样受体2表达变化及临床意义研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)病人血清长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NETA1)、Toll样受体2(TLR2)表达及临床意义。方法选取2017年5月至2020年12月石家庄平安医院收治的AP病人125例为研究对象,根据急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)对AP病人进行评分,并将病人分为轻症组56例,重症组69例;根据住院期间重症组AP病人预后情况,将病人分为预后不良25例,预后良好44例。同期选取该院健康体检者130例为健康组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清LncRNA NETA1水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清TLR2水平;Pearson相关性分析探索AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2水平相关性及二者与病人APACHEⅡ评分的关系;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清LncRNA NEAT1、TLR2对AP病人重症的评估价值。结果与健康组比较,AP组血清LncRNA NEAT1(2.16±0.31比1.00±0.00)、TLR2水平[(6.43±1.05)µg/L比(0.59±0.24)µg/L]升高(P<0.05);与轻症组比较,重症组AP病人血清LncRNA NEAT1(2.31±0.33比1.98±0.27)、TLR2水平[(6.89±1.16)µg/L比(5.86±0.92)µg/L]升高(P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组重症AP病人血清LncRNA NEAT1(2.43±0.36比2.14±0.27)、TLR2水平[(7.12±1.24)µg/L比(6.45±1.02)µg/L]升高(P<0.05);Pearson相关性分析结果表明,AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2呈正相关(r=0.65,P<0.05),二者与病人APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.50、0.52,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清LncRNA NEAT1水平、TLR2单独及联合评估AP病人重症的曲线下面积(AUC)分别为0.73[95%CI:(0.64,0.82)]、0.75[95%CI:(0.67,0.84)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)],血清LncRNA NEAT1联合TLR2水平预测AP病人重症的AUC明显大于二者单独预测(P<0.05)。结论AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2表达水平显著升高,且与病人严重程度和预后有关,临床上检测LncRNA NEAT1、TLR2表达可能有助于AP病人的病情评估。

lncRNA NEAT1降表达人喉鳞状细胞癌细胞增殖凋亡变化及与miR-214靶向关系

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)降表达的人喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖凋亡变化,探讨其与微小RNA-214(miR-214)的靶向关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人永生化表皮细胞Hacat和人LSCC细胞系(FD-LSC-1、Hep-2、TU177)中lncRNA NEAT1、miR-214,选择TU177细胞为受试细胞。取对数生长期TU177细胞,分为甲、乙组,分别转染si-lncRNA NEAT1(敲低lncRNA NEAT1表达)、si-NC(乱序无意义序列),培养至24 h时采用CCK8法观察两组细胞增殖情况、采用平板克隆形成实验观察两组细胞克隆形成情况、采用流式细胞术观察两组细胞周期和细胞凋亡情况、采用RT-qPCR法检测两组细胞lncRNA NEAT1及miR-214。另取对数生长期TU177细胞,分为一二三四组,一组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimic,二组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-NC,三组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimics,四组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-NC。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1及miR-214的靶向关系。结果与乙组相比,培养24、48、72 h时甲组TU177细胞OD值低,培养14 d时甲组TU177细胞克隆形成数少,甲组TU177细胞G0/G1期细胞比例高、S期细胞比例低,细胞凋亡率高(P均<0.05);与乙组相比,转染24 h时甲组TU177细胞lncRNA NEAT1相对表达量低、miR-214相对表达量高(P均<0.05)。培养48 h时一、二、三、四组TU177细胞细胞荧光素酶活性分别为0.63±0.08、0.99±0.01、1.02±0.02、0.98±0.03,与二组相比,一组细胞荧光素酶活性低(P<0.05)。结论敲低lncRNA NEAT1表达可抑制TU177细胞的增殖和克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进细胞的凋亡。TU177细胞中lncRNA NEAT1与miR-214靶向相关。lncRNA NEAT1可能通过与miR-214靶向结合,抑制TU177细胞的增殖克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进细胞的凋亡。

血清长链非编码RNA核富集转录体1及可溶性细胞间黏附分子1水平与冠状动脉慢血流现象的关系

目的 探讨血清长链非编码RNA核富集转录体1(NEAT1)及可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平与冠状动脉慢血流现象(CSFP)的关系。方法 选择2020年8月至2022年2月在四川省遂宁市中心医院疑诊为冠状动脉粥样硬化性心脏病而行冠状动脉造影检查的患者,以其中造影未见明显病变的110例为研究对象,将心肌梗死溶栓试验(TIMI)血流分级2级及以下且无冠状动脉狭窄、诊断为CSFP的70例患者作为CSFP组,以TIMI血流分级3级且无冠状动脉明显狭窄者40例作为对照组。利用荧光定量聚合酶链反应法检测血清NEAT1表达,酶联免疫吸附试验法检测血清sICAM-1表达。比较2组NEAT1及sICAM-1表达差异。Pearson线性相关分析方法分析血清NEAT1及sICAM-1水平与冠状动脉TIMI平均血流帧数的相关性。采用多因素Logistic回归方法分析CSFP的危险因素。采用受试者工作特征曲线分析血清NEAT1、sICAM-1单独及联合检测对CSFP的诊断效能。结果 CSFP组血清NEAT1、sICAM-1表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清NEAT1、sICAM-1表达与冠状动脉TIMI平均血流帧数呈显著正相关(r=0.456、0.503,均P<0.001)。血清NEAT1与sICAM-1的表达水平呈显著正相关(r=0.541,P<0.001)。有吸烟史、血清NEAT1、sICAM-1水平升高是CSFP的独立危险因素,白蛋白升高是CSFP的保护因素(均P<0.05)。血清NEAT1、sICAM-1单独及联合检测诊断CSFP的曲线下面积分别为0.698(95%置信区间:0.591~0.736)、0.789(95%置信区间:0.734~0.832)、0.836(95%置信区间:0.802~0.885),联合检测诊断CSFP的曲线下面积显著高于血清NEAT1、sICAM-1单独检测(Z=2.061、P=0.039,Z=6.403、P<0.001)。结论 CSFP患者血清NEAT1、sICAM-1水平升高。有吸烟史、血清NEAT1、sICAM-1水平升高是CSFP的独立危险因素,白蛋白升高是CSFP的保护因素。血清NEAT1、sICAM-1联合检测对CSFP具有较高的诊断价值。

心肌肥厚大鼠心肌细胞核体外转录活性和RNA核孔转出的变化

目的研究大鼠心肌细胞核体外转录活性、RNA核孔转出和核外Ca2+浓度([Ca2+])对其的影响,以探讨心肌重塑时核Ca2+在其中的作用和意义。方法制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型、差速离心和密度梯度离心提纯心肌细胞核,同位素掺入法分析心肌细胞核体外转录活性和RNA核孔转出。结果腹主动脉缩窄术后4周大鼠心肌显著肥大,伴有明显的血流动力学异常。与正常对照组比较,腹主动脉缩窄心肌肥厚组细胞核体外转录活性和RNA核孔转出明显增加。在核外[Ca2+]大于10-4mol/L时,转录活性和RNA核孔转出发生显著变化(P<0.05)。结论压力超负荷心肌肥厚发生时,细胞核体外转录活性上调,RNA核转出量增加,可能在介导基因表达异常中起重要作用。

体外转录信使RNA免疫疗法的研究进展

体外转录信使RNA(IVT mRNA)是在体外条件下以DNA为模板转录得到的一种mRNA,这种mRNA可以指导特定蛋白质的合成,阻止或改变某种特定的疾病。因此,IVT mRNA可以作为一种传递遗传信息的潜在新药。与其他核酸药物相比,基于IVT mRNA的药物具有很多优势。随着mRNA技术发展,基于IVT mRNA的恶性肿瘤免疫疗法和治疗传染性疾病疫苗的研制等已步入临床应用阶段。本文系统地介绍了IVT mRNA的结构、合成方式、投递途径和免疫机制,着重分析了IVT mRNA免疫疗法在不同疾病临床治疗中的应用现状,如恶性肿瘤、传染性疾病和过敏反应等,并探讨了将其开发为新药所遇到的关键性机遇与挑战。

mRNA的体外转录和加帽工艺研究

利用体外转录信使RNA(IVT mRNA)进行疫苗接种、基因治疗已经成为医学领域的热点。在全球SARS-CoV-2大流行期间,信使RNA(mRNA)药物研发备受关注。成熟的mRNA需要5’帽来保证mRNA的稳定和基因表达。在这项研究中,我们研究了mRNA的体外转录,探讨了不同mRNA加帽方法,包括酶法加帽、抗反向帽类似物(ARCA)加帽以及三核苷酸帽类似物Clean Cap加帽,并尝试了使用多个新型ARCA结构对m RNA进行加帽修饰,为mRNA药物制剂的研发打下了一定的基础。

lncRNA NEAT1沉默通过IL-10/STAT3信号通路调节小胶质细胞极化对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)沉默通过白细胞介素(IL)-10/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路调节小胶质细胞极化对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、CIRI组、CIRI+si-NC组、CIRI+si-NEAT1组,每组24只。除Sham组外,其余各组大鼠采用线栓法构建CIRI模型。建模结束后,各组大鼠给予对应处理7 d。对大鼠神经功能缺损进行评分;观察脑组织病理学变化;检测脑梗死体积百分比,脑组织中离子钙接头蛋白分子1阳性(Iba1+)细胞中M1型、M2型极化标志物阳性(Iba1+CD86+、Iba1+CD206+)细胞的数量,IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10,lncRNA NEAT1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)、IL-10 mRNA,IL-10、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果与Sham组相比,CIRI组大鼠脑组织病理损伤严重,神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、脑组织中Iba1+CD86+、Iba1+CD206+阳性细胞数量、CD86/CD206比值、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10水平、lncRNA NEAT1、iNOS、Arg-1、IL-10 mRNA水平、IL-10、p-STAT3/STAT3蛋白水平显著升高(P<0.05);与CIRI组和CIRI+si-NC组相比,CIRI+si-NEAT1组大鼠脑组织病理损伤减轻,神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、脑组织中Iba1+CD86+阳性细胞数量、CD86/CD206比值、IL-1β、TNF-α水平、lncRNA NEAT1、iNOS mRNA水平显著降低(P<0.05),Iba1+CD206+阳性细胞数量、IL-4、IL-10水平、Arg-1、IL-10 mRNA、IL-10、p-STAT3/STAT3蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论沉默lncRNA NEAT1可能通过激活IL-10/STAT3信号通路,调控小胶质细胞极化,从而改善CIRI大鼠脑组织损伤。

右美托咪定超前镇痛对腹腔镜子宫全切术后疼痛及血清外泌体lncRNA CCAT1表达的影响

目的:探讨右美托咪定超前镇痛对行腹腔镜子宫全切患者术后疼痛及血清外泌体长链非编码RNA结肠癌相关转录物1(LncRNA CCAT1)表达影响。方法:选取2018年6月-2020年3月在本院行腹腔镜子宫全切术患者80例,随机数字表法分为超前镇痛组和对照组各40例。对照组常规方法镇痛,超前镇痛组在对照组基础上采用右美托咪定术前镇痛。观察各组视觉模拟量表(VAS)评分、Ramsay评分、血清外泌体LncRNA CCAT1表达情况及不良反应。结果:术后不同时间点VAS评分及Ramsay评分组内相比无差异(P>0.05)但超前镇痛组在术后4h、8h、12h、24h均低于或高于对照组(P<0.05)。超前镇痛组术后血清外泌体lncRNA CCAT1表达水平(0.54±0.22)低于对照组(0.96±0.31)(P<0.05)。术后心动过缓发生率两组无差异(0、5.0%),超前镇痛组恶心(7.5%)、呕吐(5.0%)发生率低于对照组(27.5%、20.0%)(P<0.05)。结论:右美托咪定超前镇痛可有效缓解患者术后疼痛情况,增强镇静效果,降低术后血清外泌体lncRNA CCAT1水平,减少不良反应发生。

无需逆转录的高通量多重呼吸道病毒RNA检测技术的建立

目的建立一种无需逆转录等复杂样品前处理步骤,只需简单样品裂解便可同时检测多种呼吸道病毒RNA的高通量核酸检测系统,为大规模流行病学监测提供新的技术手段。方法直接以裂解液中病毒RNA作为检测靶标,利用夹层杂交信号放大技术,结合以Luminex微球为基础的多指标同步分析(xMAP)多重检测平台,对一个样品同时检测A和B型流感病毒、A和B型呼吸道合胞病毒、1、2和3型副流感病毒,及偏肺病毒等8种病毒的靶标RNA,可一次实验并行检测96个样品。对该高通量检测系统进行了特异性、灵敏度评价。结果该检测方法可以特异性区分8种病毒的RNA靶标分子,检测下限均低于或等于4695个RNA拷贝。结论初步建立了可靠、灵敏、操作简便、高通量的多种呼吸道病毒RNA并行检测方法,为进一步实现在临床呼吸道样品中高通量检测呼吸道病毒提供了技术基础。

糖尿病肾病患者血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1表达水平及其与患者预后的相关性研究

目的研究血清微小RNA(micro RNA,miR)-495-3p,长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NEAT1)水平与糖尿病肾病(DN)患者预后的关系。方法纳入河北以岭医院2019年1月~2021年1月期间116例DN患者作为DN组,收集其临床资料,根据肾脏病理损伤程度分为Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组;根据治疗后6个月随访期间是否发展为终末期肾病分为预后良好组和预后不良组;另收集同期单纯2型糖尿病(T2DM)患者102例作为T2DM组和健康体检者100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1水平对DN患者预后的预测价值。结果对照组、T2DM组和DN组血清miR-495-3p水平(1.02±0.25,0.76±0.22,0.58±0.16)依次降低,LncRNA NEAT1水平(1.01±0.23,1.58±0.29,2.16±0.36)依次升高,差异均有统计学意义(F=117.238,391.506,均P<0.05)。DN中T2DM病程≥10年,eGFR≥60 ml/min/1.73 m^(2),FBG≥8mmol/L,24 h尿蛋白≥3 g/24 h的血清miR-495-3p水平(0.52±0.14,0.52±0.15,0.50±0.16,0.49±0.15)低于T2DM病程<10年,eGFR<60 ml/min/1.73 m^(2),FBG<8mmol/L和24 h尿蛋白<3 g/24 h(0.67±0.18,0.69±0.19,0.70±0.19,0.73±0.18);而LncRNA NEAT1水平(2.33±0.42,2.29±0.38,2.35±0.43,2.31±0.40)高于T2DM病程<10年,eGFR<60 ml/min/1.73 m^(2),FBG<8mmol/L和24 h尿蛋白<3 g/24 h(1.90±0.31,1.92±0.33,1.88±0.31,1.90±0.36),差异均有统计学意义(tmiR-495-3p=5.033,5.300,6.122,7.721,t LncRNA NEAT1=5.956,5.244,6.436,5.529,均P<0.05)。Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组血清miR-495-3p水平(0.74±0.19,0.61±0.16,0.50±0.08,0.39±0.06)依次降低,LncRNA NEAT1水平(1.69±0.30,2.08±0.32,2.34±0.35,2.74±0.39)依次升高,差异有统计学意义(F=32.060,46.730,均P<0.05)。预后不良组血清miR-495-3p水平(0.45±0.10)低于预后良好组(0.65±0.17),LncRNA NEAT1(2.53±0.47)水平高于预后良好组(1.97±0.36),差异有统计学意义(t=6.836,7.148,均P<0.05)。血清miR-495-3p,LncRNA NEAT1水平单独及联合预测DN患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.784(95%CⅠ:0.702~0.867),0.753(95%CⅠ:0.658~0.848)和0.834(95%CⅠ:0.755~0.912),特异度分别为71.1%,86.8%和77.6%,敏感度分别为62.5%,57.5%和77.5%。结论DN患者血清miR-495-3p低表达,LncRNA NEAT1高表达,二者水平与DN患者肾损伤及预后有关。

血清lncRNANEAT1在急性心肌梗死患者中的表达及其临床意义

目的探究血清长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)在急性心肌梗死(AMI)患者中的表达和临床意义。方法选取2018年6月—2020年12月长安医院收治的AMI患者77例(AMI组),另选取同期收治的不稳定型心绞痛(UAP)患者70例(疾病对照组)和体检健康者76名(正常对照组)。检测所有研究对象血清肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和心肌酶谱[肌酸激酶(CK)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清lncRNA NEAT1相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估lncRNA NEAT1诊断AMI的效能。采用Spearman相关分析评估lncRNA NEAT1相对表达量与血清心肌酶谱、cTnI水平的相关性。结果正常对照组、疾病对照组和AMI组lncRNA NEAT1相对表达量依次升高(P<0.001)。与正常对照组、疾病对照组相比,AMI组cTnI、CK、CK-MB、LDH、AST水平升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA NEAT1相对表达量诊断AMI的曲线下面积为0.825,鉴别诊断AMI和UAP的曲线下面积为0.759。Spearman相关分析结果显示,AMI患者血清lncRNA NEAT1相对表达量与CK、CK-MB、LDH、AST和cTnI呈正相关(P<0.05)。结论AMI患者血清lncRNANEAT1呈高表达,可作为AMI潜在的生物标志物。

嗜热毛壳菌端粒酶的表达纯化及酶学特性分析

为进一步探究端粒酶的酶学特性,以嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum, Thermo)端粒酶为研究对象,通过生物化学、生物信息学等方法得到4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白,分别与体外转录得到的Thermo端粒酶RNA进行组装。通过端粒酶体外延伸试验检测组装体的反转录活性,进一步分析影响其反转录活性的各种因素。结果表明,4种不同长度的Thermo端粒酶蛋白重组质粒经大肠杆菌表达系统诱导表达后均可得到相应的Thermo端粒酶蛋白,且纯度均在90%以上;体外孵育试验表明,在10 mmol/L HEPES-KOH(pH 8.0)、1 mmol/L MgCl2、100 mmol/L NaCl、3 mmol/L KCl、体积分数25%Glycerol、10units/μL Rnasin的条件下,端粒酶蛋白与RNA的摩尔浓度比达到1∶1及以上时,两者能有效复合;端粒酶体外延伸试验发现,结构完整的Thermo端粒酶组装体具有很强的反转录活性,可使18nt-DNA引物反复延伸。TEN结构域不完整并未减弱Thermo端粒酶组装体的反转录活性,说明其在反转录过程中未发挥显著作用。T-PK区或TWJ区缺失的组装体均不能使18nt-DNA引物发生延伸,表明RNA结构的完整性是端粒酶发挥反转录功能的必要条件。

反复呼吸道感染患儿外周血lncRNA NEAT1的表达及与Th1Th2平衡的关系

目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NEAT1)在反复呼吸道感染(RRI)患儿血浆中的表达情况,并分析其与Th1/Th2平衡的关系。方法选取2018年6月~2019年3月本院收治的68例RRI患儿为RRI组,并选取同期74例健康幼儿为健康组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血浆lncRNA NEAT1水平;以流式细胞仪检测Th1、Th2细胞占CD4+T细胞的比例,计算Th1/Th2比值;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)水平;观察RRI患儿血浆lncRNA NEAT1、Th1、Th2、Th1/Th2水平与IFN-γ、IL-4,及lncRNA NEAT1表达水平与Th1/Th2平衡的关系。结果与健康组相比,RRI组患儿血浆lncRNA NEAT1表达水平、外周血CD4+Th2细胞比例、IL-4水平明显升高(t=9.198、10.218、27.449,P均<0.05),外周血CD4+Th1细胞比例、Th1/Th2比值、IFN-γ水平明显降低(t=10.689、14.572、23.665,P均<0.05);RRI组患儿血浆lncRNA NEAT1表达水平与IFN-γ呈负相关(r=0.383,P<0.05),Th1/Th2比值与IL-4、lncRNA NEAT1表达水平与Th1/Th2比值均呈负相关(r=0.428,P<0.05),Th1细胞比例、Th1/Th2比值与IFN-γ呈正相关(r=0.458、0.327,P均<0.05),lncRNA NEAT1表达水平、Th2细胞比例与IL-4(r=0.484、0.537,P均<0.05)呈正相关。结论RRI患儿血浆lncRNA NEAT1呈高水平,Th1/Th2比值呈低水平,lncRNA NEAT1与Th1/Th2有一定负相关性,两者可能相互作用,从而共同影响RRI发生发展。

lncRNA NEAT1靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化的影响

目的:探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养PANC-1细胞株,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(siRNA-NC组)、沉默NEAT1组(NEAT1-siRNA组)、共转染组(NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组)。采用实时荧光定量PCR法检测NEAT1、miR-497-5p水平;CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测增殖细胞核抗原(Ki-67)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及EMT标志蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测NEAT1与miR-497-5p靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果:与NG组、siRNA-NC组比较,NEAT1-siRNA组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著升高(P<0.05),NEAT1水平、Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NEAT1-siRNA组比较,NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著降低(P<0.05),Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-497-5p是NEAT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-497-5p-inhibitor-NEAT1-WT组荧光素酶活性显著高于miR-497-5p-inhibitor-NC-NEAT1-WT组(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1表达能够靶向上调miR-497-5p表达,抑制胰腺癌细胞增殖及EMT过程,并诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌新的潜在治疗靶点。

急性脑梗死患者外周血LncRNA-NEAT1,miR-93-5p表达水平及临床意义

目的探究长链非编码RNA核富集转录体1(long non-coding RNA paraspeckle assembly transcript 1,LncRNA-NEAT1)和微小RNA(micro RNA,miR)-93-5p在急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者血清中的表达情况及临床意义。方法选取2020年1月~2022年2月河北北方学院附属第一医院收治的84例急性脑梗死患者作为脑梗死组,收集其临床资料,根据梗死病灶面积分为小面积梗死组、中面积梗死组和大面积梗死组;根据神经功能缺损程度分为轻度组、中度组和重度组;根据预后结局分为生存组和死亡组;同期健康体检者84例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清LncRNA-NEAT1和miR-93-5p表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNANEAT1和miR-93-5p表达水平对急性脑梗死患者预后的预测效能。结果与对照组相比,脑梗死组血清LncRNANEAT1(2.46±0.38 vs 1.01±0.20)表达水平显著升高,miR-93-5p(0.42±0.16 vs 1.02±0.22)表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=30.948,33.796,均P<0.05)。血清LncRNA-NEAT1表达水平随梗死病灶面积(2.21±0.36,2.45±0.39,2.75±0.45)和神经功能缺损程度(2.24±0.34,2.46±0.40,2.70±0.45)增加而升高(F=11.434,8.674,均P<0.05),miR-93-5p表达水平(0.68±0.20,0.43±0.17,0.12±0.04)随梗死病灶面积和神经功能缺损程度(0.63±0.19,0.41±0.16,0.21±0.08)增加而降低,差异具有统计学意义(F=79.777,49.316,均P<0.05)。与生存组相比,死亡组血清LncRNA-NEAT1(2.78±0.43 vs 2.39±0.40)表达水平显著升高,miR-93-5p(0.28±0.09 vs 0.45±0.18)表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=3.378,3.550,均P<0.05)。血清LncRNA-NEAT1,miR-93-5p单独及联合预测急性脑梗死患者死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.733(95%CI:0.591~0.876),0.784(95%CI:0.669~0.898)和0.849(95%CI:0.752~0.946),敏感度分别为53.3%,73.3%和86.7%,特异度分别为76.8%,75.4%和73.9%。结论LncRNANEAT1与miR-93-5p联合检测对急性脑梗死有一定预后预测价值。

卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达变化及其临床意义

目的观察卵巢癌组织长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)、羧基末端结合蛋白2(CtBP2)表达变化,并探讨其表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择卵巢癌患者76例、卵巢良性囊肿患者20例,取手术切除或剥离的卵巢癌组织与卵巢囊肿组织,采用RT-PCR法检测lncRNA NEAT1、CtBP2表达。比较卵巢癌组织与卵巢囊肿组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达,分析卵巢癌组织lncRNA NEAT1表达与CtBP2表达的关系以及二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量均明显高于卵巢囊肿组织(P均<0.01)。Pearson相关分析显示,卵巢癌组织lncRNA NEAT1相对表达量与CtBP2相对表达量呈正相关关系(r=0.689,P<0.01)。卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达均与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与患者年龄、肿瘤直径、病理类型无关(P均>0.05)。以卵巢癌组织lncRNA NEAT1或CtBP2相对表达量的均数为截断值,将患者分为lncRNA NEAT1高表达者34例、低表达者42例,CtBP2高表达者35例、低表达者41例。lncRNA NEAT1或CtBP2高表达者生存率和生存时间均低于lncRNA NEAT1或CtBP2低表达者(P均<0.05)。结论卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2高表达,二者表达变化可能协同促进肿瘤恶性进展并导致患者预后不良。

磷硫代siRNA的YAP基因沉默活性研究

为了探究RNA聚合酶酶促合成非对映体纯PS-siRNA(pPS-siRNA)的基因沉默活性,本研究针对潜在的癌症治疗靶点Yes相关蛋白(YAP),通过qPCR、Western blot等方法研究了其对YAP基因的沉默效果和对HeLa细胞的细胞毒性.结果表明,与未修饰的siRNA(PO-siRNA)相比,pPS-siRNA可以更好地下调YAP基因表达(效率提高约30%),而没有明显的细胞毒性.此外,MTT细胞增殖实验与流式细胞术的结果表明,经pPS-siRNA敲降YAP后,HeLa细胞的增殖受到了抑制.说明pPS-siRNA在基因治疗方面具有优越性以及YAP作为肿瘤治疗靶点的潜力.