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重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12-Fc融合蛋白载体的构建和表达
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作者 傅行礼 鞠爱萍 +1 位作者 马小兰 叶军 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第32期14-19,共6页
目的用p IRES2-EGFP-Fc载体构建重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)-Fc真核表达质粒,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达MED12-Fc融合蛋白,纯化和鉴定MED12-Fc。方法根据Gen Bank中的序列信息,从基因组上扩增出人MED12基因第2、3和4外显... 目的用p IRES2-EGFP-Fc载体构建重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)-Fc真核表达质粒,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达MED12-Fc融合蛋白,纯化和鉴定MED12-Fc。方法根据Gen Bank中的序列信息,从基因组上扩增出人MED12基因第2、3和4外显子,并通过Overlap聚合酶链反应(PCR)拼接获得目的基因片段,以p IRES2-EGFP-Fc真核表达质粒为载体,构建重组人MED12-Fc真核表达质粒。使用脂质体瞬时转染293T细胞,48 h收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定质粒的表达能力。表达质粒电转CHO细胞,通过G418抗性筛选及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达的稳定细胞株。使用稳定细胞株培养表达人MED12-Fc融合蛋白,收集上清液,用Proein A亲和纯化柱纯化蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)检测蛋白质分子量。结果通过DNA测序和瞬时转染表达鉴定,证实MED12第2、3和4外显子基因序列正确,成功获得重组人MED12-Fc真核表达质粒。通过电转化、G418及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达重组人MED12-Fc的稳定表达细胞株。通过细胞培养,亲和层析纯化,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白。结论成功构建MED12-Fc融合蛋白的表达载体,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白,为进一步研究MED12蛋白功能奠定基础。 展开更多
关键词 rna聚合酶Ⅱ转录调节物12 融合蛋白 表达载体
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Downregulation of NFAT5 by RNA interference reduces monoclonal antibody productivity of hybridoma cells 被引量:4
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作者 Jihang Ju Ke Zou Hong Xie 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2007年第3期264-270,共7页
Hybridoma cells display an increase in antibody productivity following exposure to hypertonic conditions. However, the underlying mechanism is not well understood. In the present study, we hypothesize that the nuclear... Hybridoma cells display an increase in antibody productivity following exposure to hypertonic conditions. However, the underlying mechanism is not well understood. In the present study, we hypothesize that the nuclear factor of activated T cells 5 (NFAT5)/tonicity enhancer binding protein (TonEBP) functions to increase the antibody productivity of hybridoma cells. NFAT5 is an osmosensitive mammalian transcription factor. However, its ubiquitous expression in various organs that are not bathed in hypertonic milieu suggests that NFAT5 may also regulate cell growth and function under isotonic conditions. In this study, we examined the expression of NFAT5 in hybridoma cells by Western blot analysis, and found that it increased significantly in hypertonic medium. To further define the function of NFAT5 in hybridoma cells, RNA interference technique was used to downregulate the expression of NFAT5 in SGB-8 cells (a hybridoma cell line). In isotonic medium, antibody productivity ofhybridoma cells was reduced by downregulation of NFAT5 while cell proliferation was not influenced. The results presented here demonstrate that NFAT5 not only plays an important role in osmotic stress response pathway in hybridoma cells but also is essential for optimal antibody productivity. 展开更多
关键词 antibody formation HYBRIDOMAS NFAT transcription factors rna interference
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表观遗传调控在胎源性精神疾病中的研究进展
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作者 鲍青悦 徐永君 +1 位作者 盛慧 倪鑫 《中国医药导报》 CAS 2015年第9期38-42,72,共6页
宫内不良环境可导致胎儿某些分子、组织结构发生永久性改变即编程效应,使其成年后对内外环境变化的反应性产生异常,进而导致其患某些疾病的风险增加,而这其中的机制尚未阐明。近年来研究发现,表观遗传修饰如DNA甲基化、组蛋白乙酰化、mi... 宫内不良环境可导致胎儿某些分子、组织结构发生永久性改变即编程效应,使其成年后对内外环境变化的反应性产生异常,进而导致其患某些疾病的风险增加,而这其中的机制尚未阐明。近年来研究发现,表观遗传修饰如DNA甲基化、组蛋白乙酰化、micro RNA转录调节等可能是产生编程效应的重要机制之一。本文就表观遗传学机制在胎源性精神疾病中的研究进展进行综述,以期待对部分胎儿起源的成年疾病发生、治疗带来新的启示。 展开更多
关键词 胎源性精神疾病 编程效应 DNA甲基化 组蛋白乙酰化 micro rna转录调节
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MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病关系的荟萃分析 被引量:2
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作者 叶军 陈亚宝 +3 位作者 沙敏 马莹 袁冬兰 王华 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2013年第5期407-411,共5页
目的 探讨MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病的关系.方法 检索1995年7月-2013年1月Medline、EMBASE、Ovid、Springer数据库、Cochrane图书馆收录的英文文献,以及1994年1月-2013年1月中国知网全文数据库(CNKI)和1978年1月-2013年1月中... 目的 探讨MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病的关系.方法 检索1995年7月-2013年1月Medline、EMBASE、Ovid、Springer数据库、Cochrane图书馆收录的英文文献,以及1994年1月-2013年1月中国知网全文数据库(CNKI)和1978年1月-2013年1月中国生物医学文献数据库(CBMdisc)收录的中文文献.选择研究子宫肌瘤MED12基因突变情况的文献,探讨MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病的关系,分析不同人种子宫肌瘤MED12突变的情况和MED12突变类型在不同地区的分布.结果 纳入研究9篇文献合并分析共计641例患者,MED12基因突变率为64.90%(416/641),非子宫平滑肌瘤的对照组为0.79%(17/2146),差异有统计学意义(x2=1 540.848,P<0.001).MED12突变是子宫肌瘤发病的危险因素(OR=61.83,95%CI:33.82~ 113.03).不同人种合并分析显示,白人的MED12基因突变率为68.99%(238/345),黑人为62.75%(32/51),黄种人为63.39%(71/112),不同人种间的突变率比较差异无统计学意义(均P>0.05).不同地区人群子宫肌瘤MED12基因突变率合并分析显示,亚洲人群突变率为63.39%(71/112),欧洲人群突变率为65.29%(222/340),美洲人群突变率为67.70%(109/161),非洲人群突变率为50.00% (14/28),非洲人群的突变率低于欧洲、美洲人群(均P<0.05).结论 MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病危险有关,突变情况与种族无关,部分地区MED12基因突变率存在差异. 展开更多
关键词 肌瘤 子宫 rna聚合酶Ⅱ转录调节物12 突变 META分析
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