运用SELEX技术筛选特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白RNA适配子

目的 获得特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白prepilS的RNA适配子 (aptamers) ,为开发预防、治疗伤寒杆菌肠热症的新型药物试剂奠定基础。方法 采用SELEX技术 (SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEn richment)筛选IVB型纤毛结构蛋白prepilS的特异性适配子 ,通过体外构建一个长度为 88nt含有 30个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库 ,PCR扩增为双链DNA随机文库后 ,体外转录构建RNA随机文库 ,以Sepharose 4B为筛选介质 ,筛选具有特异性高亲和力prepilS蛋白的RNA适配子。结果 经 8轮筛选获得具有特异性高亲和prepilS蛋白的RNA适配子库。结论 成功地筛选出具有特异性高亲和力的RNA适配子库 ,该RNA适配子库可显著抑制伤寒杆菌侵入THP

HIV-1整合酶的RNA适配子的筛选及活性研究

通过SELEX技术已经筛选到了多种HIV-1病毒相关蛋白,如:逆转录酶、Rev和Tat蛋白、核壳蛋白等的核酸适配子,然而以HIV-1整合酶为靶点的DNA或RNA适配子却鲜有报道.在结合缓冲液中以10mmol·L-1的Mg2+作为辅助因子,加入100mmol·L-1KCl筛选到了三个具有相似结构和Kd的适配子IN1,IN2和IN3.亲和力最高的适配子IN1的Kd为145nmol·L-1,保守区富含鸟嘌呤碱基(G),缺失任何一个茎环结构会使亲和力减弱.缺失右端固定序列的IN1-L的Kd为283nmol·L-1,虽然不能形成四链结构但可以被G-四链T40214竞争结合,可能与T40214具有相同的结合位点.

RNA药物抗乙型肝炎病毒的研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)导致的慢性感染已经成为威胁全球健康的主要问题之一.传统的抗乙肝药物如以拉米夫定和阿德福韦为代表的核苷类似物以及干扰素类药物在临床上都存在一定的局限性,因此寻找新的抗乙肝药物已经成为当务之急.本文主要从小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA)和配体指数富集的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选的RNA适配子这3个方面来分别阐述用小分子RNA药物抗HBV的研究进展和展望.