环状RNAhsa＿circ＿0082626的特征分析及过表达载体构建

目的环状RNA是目前非编码RNA的研究热点,文章旨在研究由抗病毒基因ZC3HAV1基因转录而来的环状RNA hsa_circ_0082626的基本特征以及过表达载体的表达效果。方法利用反向剪切位点的验证、RNA酶消化试验和提取细胞质、细胞核RNA进行细胞内分布定位研究了hsa_circ_0082626的基本特征,RNA酶消化试验中将样品分为RNase R处理组与对照组,RNase R处理组加入20 U(2 U/μg)的RNase R,对照组用等量ddH2O替代,以此检测经RNA酶处理后的表达量变化。转染24、48和72 h后分别收集以转染重组质粒的细胞为过表达组、未经转染的细胞作为阴性对照组,RT-qPCR检测环状RNA表达效果。结果与对照组比较,RNase R处理组ZC3HAV1、GAPDH表达均降低(0.144±0.002 vs 1.000±0.016,0.772±0.058 vs 1.000±0.122,0.077±0.009 vs 1.000±0.164,P<0.05)。hsa_circ_0082626可以抵抗RNase R的处理,主要分布于细胞质。过表达组的hsa_circ_0082626表达量明显较阴性对照组明显增高,而且在转染48 h时的表达量最高(表达量约为对照组的1000倍)。结论成功分析了hsa_circ_0082626的反向剪切位点、RNA酶的抵抗性和在细胞中的表达定位等特征,证明了hsa_circ_0082626确实具有环状结构及成功构建了hsa_circ_0082626的过表达载体,为深入研究环状RNA hsa_circ_0082626的生物功能和机制提供了实验基础。