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猪瘟病毒装甲RNA颗粒质控品的研制及评估
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作者 邓俊花 陈冬杰 +1 位作者 魏方 吴绍强 《养殖与饲料》 2023年第8期1-5,共5页
[目的]研制一种安全稳定高效的猪瘟核酸检测质控品,为猪瘟疫病监测提供技术支持。[方法]将猪瘟病毒核酸检测靶基因构入至新型装甲RNA表达载体pTMACC,转化、表达并纯化,制备猪瘟病毒装甲RNA质控品。借助电泳、电镜、动态散射分析鉴定该... [目的]研制一种安全稳定高效的猪瘟核酸检测质控品,为猪瘟疫病监测提供技术支持。[方法]将猪瘟病毒核酸检测靶基因构入至新型装甲RNA表达载体pTMACC,转化、表达并纯化,制备猪瘟病毒装甲RNA质控品。借助电泳、电镜、动态散射分析鉴定该物质结构特性,并对其均匀性、稳定性进行分析,评估其实用性能。[结果]该装甲RNA颗粒含有猪瘟病毒特异性基因,序列溯源至法国Thiverval株;为RNA-蛋白复合物,颗粒呈直径约26 nm的多边形;该质控品均匀、稳定,-20℃至少稳定保存36个月;经8家权威实验室性能评估,该物质可以作为猪瘟病毒核酸检测质控品。[结论]猪瘟病毒装甲RNA质控品均匀性良好,稳定性强,无生物传染性,核酸RNA不易降解,可稳定保存,进一步保障猪瘟疫病的临床检测的准确性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 装甲rna颗粒 核酸检测 质控品
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日本血吸虫GST、Sj23及GST-Sj23 RNA颗粒抗原的制备及表达研究
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作者 姜宁 尹继刚 +2 位作者 王心蕊 张嘉保 陈启军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期429-433,共5页
目的制备日本血吸虫自杀性RNA颗粒抗原,并研究其在真核细胞内的表达,以期探讨新型抗原的研制方法,为制备抗血吸虫疫苗奠定基础。方法将编码日本血吸虫主要抗原GST、Sj23及编码两种抗原的嵌合基因(GST-Sj23)分别克隆到自杀性RNA疫苗载体S... 目的制备日本血吸虫自杀性RNA颗粒抗原,并研究其在真核细胞内的表达,以期探讨新型抗原的研制方法,为制备抗血吸虫疫苗奠定基础。方法将编码日本血吸虫主要抗原GST、Sj23及编码两种抗原的嵌合基因(GST-Sj23)分别克隆到自杀性RNA疫苗载体SFV3.spider内,以体外转录法制备编码上述三种抗原的mRNA。同法合成编码SFV病毒表膜蛋白质(S蛋白质和C蛋白质)的mRNA,然后将编码上述三种抗原的mRNA分别与编码病毒膜蛋白质的mRNA混合,以电穿孔法导入BHK21细胞,制备含有日本血吸虫GST、Sj23抗原及GST-Sj23嵌合体抗原mRNA的假病毒颗粒。最后,对制备出的假病毒颗粒进行真核细胞感染实验,以间接免疫荧光法验证上述抗原的真核表达情况。结果三种RNA颗粒对BHK21细胞均具有很好的感染性,所编码的蛋白质在BHK21细胞内鉴定高效表达。 展开更多
关键词 日本血吸虫 rna颗粒抗原 真核表达
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含SARS CoV RNA病毒样颗粒的构建和表达 被引量:5
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作者 李振勇 景建洲 +8 位作者 刘明霞 邵大晓 冯艳铭 李智涛 宋国英 王秋旗 王云龙 屈凌波 赵玉芬 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2004年第20期1858-1861,共4页
目的 :构建并表达含有SARS冠状病毒RNA片断的抗核糖核酸酶的病毒样颗粒 .方法 :通过克隆大肠杆菌噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因以及SARS冠状病毒RNA聚合酶基因片段 ,将这些基因连接到载体pTrc99a上表达 ,并进行纯化、定量分析、RT PC... 目的 :构建并表达含有SARS冠状病毒RNA片断的抗核糖核酸酶的病毒样颗粒 .方法 :通过克隆大肠杆菌噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因以及SARS冠状病毒RNA聚合酶基因片段 ,将这些基因连接到载体pTrc99a上表达 ,并进行纯化、定量分析、RT PCR检测和稳定性试验 .结果 :获得病毒样核蛋白颗粒 ,在 37℃稳定性可达到 30d ,能抵抗核糖核酸酶降解 .结论 :该病毒样核蛋白颗粒稳定、安全、可靠 ,可作为SARS冠状病毒RT PCR检测、定量分析的有效阳性参考品 . 展开更多
关键词 SAILS 逆转录聚合酶链反应 rna 病毒样颗粒 核糖核酸酶类
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双表达系统制备新型冠状病毒N基因装甲RNA颗粒的研究 被引量:2
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作者 高志强 汪琳 +5 位作者 朱忠武 任彤 蒲静 赵相鹏 尹羿 张伟 《中国口岸科学技术》 2022年第2期73-80,共8页
人工合成新型冠状病毒(SARS-CoV-2)标准参考毒株Wuhan/WIV04/2019完整N基因序列(1260 bp)和包含MS2噬菌体基因组成熟酶蛋白、衣壳蛋白基因序列(1682 bp),分别克隆到原核双表达质粒pACYCDuet-1的2个不同的多克隆位点,从而获得重组表达质... 人工合成新型冠状病毒(SARS-CoV-2)标准参考毒株Wuhan/WIV04/2019完整N基因序列(1260 bp)和包含MS2噬菌体基因组成熟酶蛋白、衣壳蛋白基因序列(1682 bp),分别克隆到原核双表达质粒pACYCDuet-1的2个不同的多克隆位点,从而获得重组表达质粒pACYC-MS2-CoV2N。将pACYC-MS2-CoV2N转化表达菌株BL21(DE3),经表达、纯化,获得含有SARS-CoV-2完整N基因的装甲RNA颗粒。经鉴定装甲RNA颗粒含有SARS-CoV-2完整N基因且没有DNA残留,并可抵抗RNase消化。采用荧光RT-PCR对装甲RNA颗粒进行定值后,制备出了用于SARS-CoV-2 N基因检测的核酸质控品,该核酸质控品均匀、稳定、可重复性好,在2~8℃可保存180 d,可用于SARS-CoV-2核酸检测的质控。 展开更多
关键词 双表达系统 新型冠状病毒 N基因 装甲rna颗粒
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核苷和核苷酸类药物作用下主要产生复制缺陷型HBV RNA病毒样颗粒
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作者 廖昊 鲁凤民 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2018年第6期1186-1186,共1页
【据《J Hepatol》2018年4月报道】题:核苷和核苷酸类药物作用下主要产生复制缺陷型HBV RNA病毒样颗粒(作者Wang J等)自然状态下HBV RNA病毒样颗粒具有感染性的可能性很大,然而核苷和核苷酸类药物(NAs)治疗下产生的HBV RNA病毒样... 【据《J Hepatol》2018年4月报道】题:核苷和核苷酸类药物作用下主要产生复制缺陷型HBV RNA病毒样颗粒(作者Wang J等)自然状态下HBV RNA病毒样颗粒具有感染性的可能性很大,然而核苷和核苷酸类药物(NAs)治疗下产生的HBV RNA病毒样颗粒的感染性并不清楚。北京大学基础医学院鲁凤民实验室与中国医科大学盛京医院感染科窦晓光团队合作,对NAs作用下子代病毒中的HBV RNA病毒样颗粒的感染性进行了研究。用恩替卡韦处理HepA D38细胞,制备主要为HBV RNA病毒样颗粒的子代病毒;以未经恩替卡韦处理的HepA D38细胞培养上清(主要含HBV DNA病毒颗粒)为对照,分别感染HepG 2-NTCP-tet细胞. 展开更多
关键词 rna病毒样颗粒 核苷酸类药物 复制缺陷型 药物作用 HBV 北京大学基础医学院 中国医科大学 子代病毒
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一种RNA病毒对人体大肠癌细胞超微结构的影响
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作者 徐敏源 俞少勇 +2 位作者 陈彤 许沈华 钱丽娟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期53-55,59,共4页
通过对100例人大肠癌细胞超微结构的观察,研究了癌细胞内一种直径约为30nm的RNA病毒颗粒对癌细胞结构的影响。结果表明:病毒颗粒大部分分布在胞浆中,只有少数颗粒聚集在线粒体内或被溶酶体吞噬;癌细胞内存在另一种直径为... 通过对100例人大肠癌细胞超微结构的观察,研究了癌细胞内一种直径约为30nm的RNA病毒颗粒对癌细胞结构的影响。结果表明:病毒颗粒大部分分布在胞浆中,只有少数颗粒聚集在线粒体内或被溶酶体吞噬;癌细胞内存在另一种直径为150~500nm的特异性颗粒,开始是一种高电子密度的均质体,然后其结构逐步发生变化,最后整个颗粒内部形成很多与RNA病毒颗粒大小相似的小颗粒而释放到胞浆中,只留下一个明显的大颗粒外壳。 展开更多
关键词 人大肠癌 rna病毒颗粒 特异性颗粒 超微结构
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耐核糖核酸酶内含HCV RNA病毒样颗粒的表达 被引量:9
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作者 李金明 宋如俊 +1 位作者 王露楠 邓巍 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期811-813,共3页
目的 构建可以表达耐核糖核酸酶 (RNase)的内含HCVRNA病毒样颗粒的载体质粒。方法 将表达载体pINCCL用HindⅢ酶切后 ,与用相同内切酶酶切的HCVRNA非编码区 (5′ UTR)扩增产物 ,在T4DNA连接酶的存在下连接 ,构建一新的表达载体pINCCL H... 目的 构建可以表达耐核糖核酸酶 (RNase)的内含HCVRNA病毒样颗粒的载体质粒。方法 将表达载体pINCCL用HindⅢ酶切后 ,与用相同内切酶酶切的HCVRNA非编码区 (5′ UTR)扩增产物 ,在T4DNA连接酶的存在下连接 ,构建一新的表达载体pINCCL HCVRNA 5′ UTR ,再转化BL2 1 DE3E .coli进行原核表达。结果 成功构建得到了新的表达载体pINCCL HCVRNA 5′ UTR ,经原核表达为耐RNase的内含HCVRNA病毒样颗粒。结论 得到的pINCCL HCVRNA 5′ UTR表达载体及原核表达系统 ,可作为一个耐RNase的HCVRNA标准品和质控品的构建和制备表达载体平台。 展开更多
关键词 耐核糖核酸酶 HCV rna病毒样颗粒 丙型肝炎病毒 基因表达
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Effects of Downregulation of Inhibin α Gene Expression on Apoptosis and Proliferation of Goose Granulosa Cells 被引量:3
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作者 陈锋剑 姜勋平 +2 位作者 陈秀萍 刘桂琼 丁家桐 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1106-1113,共8页
Inhibin a is one of the candidate genes that control the ovulation in poultry. To study the genetic effects of inhibin a on apoptosis and proliferation of goose granulosa cells cultured in vitro, two RNA interference ... Inhibin a is one of the candidate genes that control the ovulation in poultry. To study the genetic effects of inhibin a on apoptosis and proliferation of goose granulosa cells cultured in vitro, two RNA interference (RNAi) expression vectors, psiRNA-INHal and psiRNA-INHα2, were constructed to knock down inhibin α gene expression. After 48 h of transfection, the efficiency of these two RNAi expression vectors was examined by fluorescence microscopy. Meanwhile, inhibin protein expression levels, apoptosis indexes (AI) and proliferation indexes (PI) of granulosa cells were analyzed by flow cytometry. In addition, the supernatants were collected to assay the concentrations of estrogen (E2) and progesterone (P) by radioimmunoassay. The results showed that the expression level of inhibin a in the RNAi group were decreased 30%--40% than those in the control groups (P 〈0.05) and the apoptosis indexes and proliferation indexes in the RNAi groups were significantly higher than those in the control groups (P 〈0.05). However, the E2 concentrations in the RNAi groups were lower than those in the control groups (P 〈0.05). These results indicate that inhibin a has antagonistic effect on granulosa cell apoptosis. 展开更多
关键词 inhibin α rnai granulosa cell apoptosis PROLIFERATION GOOSE
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细胞因子mRNA转录后调控的研究进展 被引量:3
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作者 焦义祖 《生命科学》 CSCD 北大核心 2010年第5期437-443,共7页
细胞因子(cytokine)是分子量较小的分泌型蛋白质,是宿主免疫应答过程中一类重要的细胞间信号传递分子。它的转录后调控(post-transcriptional regulation)机制在协调机体促炎与抗炎细胞因子的水平,从而在调节免疫应答的起始和终止中起... 细胞因子(cytokine)是分子量较小的分泌型蛋白质,是宿主免疫应答过程中一类重要的细胞间信号传递分子。它的转录后调控(post-transcriptional regulation)机制在协调机体促炎与抗炎细胞因子的水平,从而在调节免疫应答的起始和终止中起到非常重要的作用。细胞因子转录后调控机制主要包括:mRNA在胞浆中的定位、翻译起始及mRNA的降解等多个方面。近年来,许多研究已致力于阐明这些转录后调控机制如何共同调节免疫应答过程中细胞因子的表达水平。该文详细阐述了目前细胞因子转录后调控的研究进展,使人们对细胞因子的转录后调控机制及其生物学功能有更深入地了解和认识,另一方面将有助于以此为靶点预防、诊断及治疗免疫性疾病。 展开更多
关键词 细胞因子 转录后调控 ARE MICROrna rna颗粒
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SARS-CoV-2 nucleocapsid protein phase separates with G3BPs to disassemble stress granules and facilitate viral production 被引量:7
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作者 Lingling Luo Zhean Li +17 位作者 Tiejun Zhao Xiaohui Ju Peixiang Ma Boxing Jin Yulin Zhou Su He Jinhua Huang Xun Xu Yan Zou Ping Li Aibin Liang Jia Liu Tian Chi Xingxu Huang Qiang Ding Zhigang Jin Cheng Huang Yu Zhang 《Science Bulletin》 SCIE EI CSCD 2021年第12期1194-1204,M0004,共12页
A key to tackling the coronavirus disease 2019(COVID-19)pandemic is to understand how severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-Co V-2)manages to outsmart host antiviral defense mechanisms.Stress granules(S... A key to tackling the coronavirus disease 2019(COVID-19)pandemic is to understand how severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-Co V-2)manages to outsmart host antiviral defense mechanisms.Stress granules(SGs),which are assembled during viral infection and function to sequester host and viral m RNAs and proteins,are part of the antiviral responses.Here,we show that the SARS-Co V-2 nucleocapsid(N)protein,an RNA binding protein essential for viral production,interacted with RasGTPase-activating protein SH3-domain-binding protein(G3 BP)and disrupted SG assembly,both of which require intrinsically disordered region1(IDR1)in N protein.The N protein partitioned into SGs through liquid-liquid phase separation with G3 BP,and blocked the interaction of G3 BP1 with other SG-related proteins.Moreover,the N protein domains important for phase separation with G3 BP and SG disassembly were required for SARS-Co V-2 viral production.We propose that N protein-mediated SG disassembly is crucial for SARS-Co V-2 production. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 Nucleocapsid protein Stress granules Liquid-liquid phase separation G3BP Viral production
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