上海交通大学基础医学院、上海市免疫学研究所邹强团队等揭示乳酸介导CTLA-4的RNA剪接以维持Treg细胞免疫抑制功能的机制

2024年2月27日,上海交通大学基础医学院、上海市免疫学研究所邹强研究团队等在Immunity杂志在线发表了题为Lactate modulates RNA splicing to promote CTLA-4 expression in tumor-infiltrating regulatory T cells的研究论文。该研究发现代谢产物乳酸通过促进肿瘤浸润Treg细胞中CTLA-4的RNA剪接及其表达从而维持Treg细胞免疫抑制功能的作用机制,阐述了乳酸-Foxp3-USP39-CTLA-4信号轴介导肿瘤浸润Treg细胞高表达CTLA-4的分子机制,为肿瘤免疫治疗提供了新方向。

不同分期的成骨肉瘤患者免疫学的变化

目的：评价成骨肉瘤患者临床分期与免疫学变化的关系及意义。方法：利用流式细胞仪检测120例成骨肉瘤患者淋巴细胞亚群、利用MTT法检测NK细胞活性，应用放射免疫分析法检测IL－2、TNF－α、β2－微球蛋白的变化，应用ELISA法检测SIL－2R的改变。结果：随着Enecking分期的增高，患者NK活性、CD4、CD4／CD8、IL－2逐渐下降，CD8、sIL－2R、β2－MG、TNF－α逐渐升高P＜0．01；Ⅱa期成骨肉瘤患者机体免疫功能活跃，CD3、CD4、NK活性及IL－2、sIL－2R高于对照组P＜0．01，其余指标与对照组相同；Ⅰb及Ⅱb组患者各项指标改变明显；Ⅲ期肿瘤CD4、CD4／CD8、IL－2较Ⅱ期明显降低sIL－2R、TNF－α急剧升高P＜0．01。结论：成骨肉瘤患者免疫功能与疾病分期呈负相关，淋巴细胞亚群、sIL－2R、IL－2可作为监测患者病情改变的指标。

骨肉瘤免疫学研究进展

骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤。有关骨肉瘤的研究正日趋深入。本文综述了骨肉瘤的免疫标记、免疫诊断、免疫监测、免疫治疗等问题的研究进展。

骨肉瘤相关微小RNA的研究进展

骨肉瘤（osteosarcoma）是最常见的原发性恶性骨肿瘤。随着新辅助化疗方案研究的不断改善,以及影像学发展带来的肿瘤边界判定和病情检测水平的提高,新辅助化疗联合手术治疗的综合治疗策略使得骨肉瘤患者的5年生存率有所提高。但是化疗抵抗和肺转移仍是骨肉瘤不良预后的重要原因和难以逾越的屏障。

体外诱导骨肉瘤特异性抗肿瘤的免疫实验

采用分离骨肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导DC细胞,Trizol法提取患者骨肉瘤细胞总RNA,用总RNA转染DC并诱导特异性CTL的扩增,用MTT法检测淋巴细胞的增殖和CTL的杀伤活性。探讨骨肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力。经骨肉瘤细胞总RNA转染的DC特异性表面标志及功能相关分子表达均上调,转染后的DC可显著刺激自体T淋巴细胞增殖,诱导的特异性CTL对靶细胞的杀伤率显著高于单纯淋巴细胞和未经转染的DC。说明骨肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗可在体外诱导出特异性抗肿瘤免疫。

骨肉瘤化疗后影像学变化与肿瘤细胞PCNA、P-gp表达的相关性研究

目的:分析化疗后骨肉瘤的影像学变化和骨肉瘤细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)及P-糖蛋白(P-gp)表达的相关性,探讨其临床意义。方法:对23例骨肉瘤患者于术前化疗前后行影像学检查,应用免疫组化技术检测化疗前后标本中PCNA、P-gp的表达,计算影像学评分及化疗后肿瘤细胞坏死率(TCNR)。结果:化疗后影像学评分明显比化疗前高,并且影像学评分越高,TCNR越高、预后越好。化疗后PCNA阳性表达率由87.0%降低到47.5%,P-gp阳性表达率由13.0%升高到47.8%,PCNA、P-gp阳性表达率越低预后越好,并且PCNA和P-gp的表达存在相关性。化疗后影像学评分高的患者PCNA、P-gp的阳性表达率低。结论:从细胞分子水平证实了骨肉瘤化疗后的影像学征象是以肿瘤细胞生物学行为为基础的,通过分析化疗后影像学征象和肿瘤中PCNA、P-gp的表达情况,可以预测化疗疗效,指导临床采用正确的治疗方法。

精准医学时代骨肉瘤诊疗的研究进展

随着组学技术和大数据技术的不断发展和成熟,精准医学在肿瘤领域取得了许多引人注目的成果。骨肉瘤多发于儿童和青少年,是最常见的骨骼系统原发性恶性肿瘤。自20世纪70年代至今,手术切除和药物化疗一直是骨肉瘤的主要治疗手段,高度基因异质性是其生存率停滞的主要原因。精准医学以组学等技术为基础,根据患者的生物学特征进行精确的诊断和治疗方案的定制。精准医学的实践有望为骨肉瘤研究及患者生存率提高提供新的契机。本文拟对精准医学在骨肉瘤治疗中的研究进展作一系统综述,并进一步探讨骨肉瘤精准治疗的前景和方向。

同源重组修复蛋白RAD51在骨肉瘤中的表达及其意义

目的:观察同源重组修复蛋白RAD 51在人骨肉瘤组织及细胞中的表达。方法:分别采用免疫组化法和免疫印迹法检测人骨肉瘤组织和细胞中RAD 51蛋白的表达水平变化。结果:RAD 51蛋白在骨肉瘤组织及细胞中均高表达,组织表达水平与性别、年龄、临床分期和病理组织学类型间均无相关性;细胞表达水平随着用药剂量的增加而逐渐增高。结论:RAD 51在骨肉瘤中高表达,可能参与了骨肉瘤的化疗抵抗。

RNA干扰技术在免疫学研究中的应用

RNA干扰是由双链RNA引发的转录后基因沉默。双链RNA经Dicer酶降解成21-23nt的小干扰RNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mRNA。随着RNA干扰机制的深入研究与广泛应用,RNA干扰作为一个强有力的研究工具,正发挥着越来越重要的作用。短期内这种方法将成为各国研究者关注的对象,并用于人类疾病的研究这项技术不仅是功能基因组分析的工具,在免疫学上,已用于癌症、病毒病、免疫信号转导、免疫疾病和炎症等,以后RNA将会为免疫学的研究提供强大的工具。

骨肉瘤干细胞起源、分离纯化及鉴定的研究进展

近年来的研究已证实骨肉瘤及其他恶性肿瘤中存在肿瘤干细胞,表明骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、发展中起着重要作用,但目前文献还未报道特异性高的标志物用于分选鉴定骨肉瘤干细胞,针对骨肉瘤干细胞治疗的临床应用还有很大的提升空间。该文就肿瘤干细胞学说及其细胞来源、骨肉瘤干细胞分离纯化及鉴定方法、免疫学表型等研究现状进行综述。

低度恶性中央性骨肉瘤

目的 探讨低度恶性中央性骨肉瘤的临床及病理特征。方法 对 2例低度恶性中央性骨肉瘤进行病理形态学观察和免疫组化分析。结果 2例肿瘤均为复发病例 ,发病年龄分别为 4 6岁和 5 7岁。影像学上肿瘤为发生于骨髓腔内的体积较大、边界清楚的肿物。组织学上肿瘤由纤维及骨组织构成 ,细胞分化良好 ,核分裂象少见。免疫表型示Vim阳性 ,SMA局灶阳性。结论 低度恶性中央性骨肉瘤是骨肉瘤的一种特殊类型 。

多种血清肿瘤相关抗原自身抗体联合检测对骨肉瘤的诊断价值研究

目的:探讨多种血清肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)自身抗体联合检测对骨肉瘤的诊断价值。方法:收集2013年12月至2016年6月收治的51例骨肉瘤患者(骨肉瘤组)和同时期在医院体检的51例健康志愿者(健康组)的外周血血清。使用间接ELISA法检测所有受试对象血清中抗烯醇化酶1(enolase 1,ENO1)自身抗体、抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceral-dehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)自身抗体、抗热休克蛋白(heat shock protein,HSP)27自身抗体、抗HSP60自身抗体、抗核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)自身抗体、抗人PDZ和LIM域蛋白1(PDZ and LIM domain 1,PDLIM1)自身抗体、抗重组人微管解聚蛋白1(stathmin 1,STMN1)自身抗体、抗丙糖磷酸异构酶1(triosephosphate isomerase 1,TPI1)自身抗体共8种TAA自身抗体的血清含量。按单侧估计各TAA自身抗体含量的95%参考值范围,并以此计算和评价各TAA自身抗体血清含量检测诊断骨肉瘤的价值。按诊断的灵敏度由高到低排序,从诊断骨肉瘤灵敏度最高的自身抗体开始,每次增加1种灵敏度排名次一位的自身抗体,计算和评价对应的TAA自身抗体联合检测诊断骨肉瘤的价值。结果:①2组血清TAA自身抗体含量检测及对比结果。2组受试对象血清中抗ENO1自身抗体、抗GAPDH自身抗体、抗HSP27自身抗体、抗HSP60自身抗体、抗PDLIM1自身抗体、抗STMN1自身抗体和抗TPI1自身抗体含量比较,组间差异均有统计学意义(0.269±0.101,0.202±0.113,Z=-3.758,P=0.000;0.145±0.037,0.125±0.027,Z=-3.477,P=0.001;0.175±0.048,0.164±0.027,Z=-2.125,P=0.034;0.174±0.048,0.149±0.028,Z=-2.871,P=0.004;0.305±0.079,0.288±0.068,Z=-2.249,P=0.025;0.188±0.082,0.167±0.071,Z=-2.041,P=0.041;0.174±0.083,0.159±0.040,Z=-2.095,P=0.036);2组受试对象血清中抗NPM1自身抗体含量比较,差异无统计学意义(0.255±0.075,0.260±0.064,Z=-0.020,P=0.984)。②血清TAA自身抗体含量检测诊断骨肉瘤的结果。除抗NPM1自身抗体之外的7种TAA自身抗体中,抗STMN1自身抗体诊断骨肉瘤的价值最大,其灵敏度为27.45%、特异度为96.08%、Youden指数为0.2353、Kappa值为0.24。随着联合检测的TAA自身抗体种类增加,诊断的灵敏度逐渐增大、特异度逐渐减小。当联合检测抗STMN1自身抗体、抗TPI1自身抗体、抗PDLIM1自身抗体、抗ENO1自身抗体和抗HSP27自身抗体5种血清TAA自身抗体时,诊断效果比较理想,对应的灵敏度为60.78%、特异度为80.39%、Youden指数为0.4118、符合率为70.59%、Kappa值为0.41。结论:联合检测抗STMN1自身抗体、抗TPI1自身抗体、抗PDLIM1自身抗体、抗ENO1自身抗体和抗HSP27自身抗体5种血清TAA自身抗体,对骨肉瘤具有较高的诊断价值。

脾气虚证免疫相关基因组学机制初探

目的采用cDNA芯片技术,探讨脾气虚证免疫功能的异常变化,并揭示其发生的基因组学机制。方法分别提取脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者(6例)以及健康人(3名)外周血白细胞总RNA ,mRNA微量扩增,制成杂交探针;脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者分别用Cy3标记,健康人用Cy5标记。标记好的Cy3、Cy5探针等量混匀后与cDNA芯片杂交。扫描仪扫描芯片荧光信号,处理、分析数据。分别比较脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者同健康人外周血白细胞中免疫相关基因表达水平的差异。结果脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者外周血白细胞中CD9、CD16 4、PF4、RARB基因表达下调,IGKC、DEFA1、GNLY基因表达上调。结论脾气虚证发生有免疫相关基因组学基础,脾虚时机体免疫功能紊乱。

甲型肝炎的流行病学及免疫策略

甲型肝炎病毒（HAV）是小RNA病毒，主要经粪-口途径传播。人感染HAV后，可表现为临床型和亚临床型感染。6岁以下儿童感染HAV后，70％为亚临床型感染；大龄儿童和成人感染HAV后，70％以上为临床型感染，病死率为0.3％～0.6％：50岁以上患者的病死率为1.8％；慢性肝病者感染HAV后，发生急性肝衰竭的危险性升高。

啤酒酵母RNA对5-氟尿嘧啶处理小鼠免疫功能的影响

目的探讨啤酒酵母RNA对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理小鼠免疫功能的影响。方法将小鼠随机分为空白组,5-氟尿嘧啶组,啤酒酵母RNA小剂量组、大剂量组[分别以啤酒酵母RNA 100 mg/(kg.d)、300 mg/(kg.d)灌胃给药];除空白组外,其余各组均以5-Fu 25 mg/(kg.d)灌胃。检测腹腔巨噬细胞吞噬率,血清溶血素形成水平、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-2(IL-2)的含量和淋巴细胞转化率,计算脾指数及胸腺指数。结果啤酒酵母RNA大、小剂量组均可明显提高5-氟尿嘧啶处理小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、血清TNF-α、IL-2水平,逆转脾指数、胸腺指数的萎缩,与5-氟尿嘧啶组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);啤酒酵母RNA大、小剂量组对5-氟尿嘧啶所致的血清溶血素形成水平低下和淋巴细胞转化率低下有明显的拮抗作用(P<0.05或P<0.01)。结论啤酒酵母RNA可提高免疫功能低下机体的免疫功能。

RNAi在免疫耐受诱导和终止方面的研究进展

目的:总结国内外RNAi在免疫耐受的诱导和终止方面的研究进展。方法:应用Highwire及CNKI期刊全文数据库检索系统,以RNAi、免疫耐受、移植免疫和肿瘤免疫等为关键词,检索1998～2007近10年相关的文献。文献选择标准:对参考文献进行初选,选择RNA干扰在各方面的应用及其发展近况等文献。纳入标准:1)RNAi在基础及临床研究中的应用进展;2)RNAi在肿瘤基因治疗方面的研究情况;3)RNAi在免疫耐受领域的应用前景;4)RNAi作用机制及其应用的优缺点评价。文献筛选:粗选有120篇关于RNAi方面的文献,根据纳入标准选出约近70篇,最后精选30篇文献作为综述参考文献。结果:随着RNA干扰技术的广泛应用,利用RNAi特异性沉默某些基因的表达,诱导机体产生特异性的免疫耐受或抗肿瘤免疫,从而为这两种疾病在基因水平的治疗提供了可能。目前RNAi在体内的具体作用机制仍不十分清楚,投入临床和仍处于研究阶段的RNAi药物远期作用仍不肯定。结论:RNAi在医学各个领域的研究应用颇多,但其作用的准确性,特异性和高效性仍有待进一步探讨。

IL-1β反义RNA在肝癌细胞中对NK细胞固有免疫杀伤的影响

目的:探讨将所获IL-1β反义RNA真核表达载体导入H epG 2细胞后,肝癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化。方法:转染后用RT-PCR法检测反义基因片段的表达,M TT比色法分析NK-92细胞杀伤活性的变化。结果:转染后反义RNA均得到高水平表达,并使NK细胞的杀伤活性提高约15%。结论:IL-1β反义RNA可在一定程度上恢复肝癌细胞对NK细胞的杀伤敏感性。