粗穗披碱草1H^(t)S染色体特异荧光原位杂交标记开发

小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL罗伯逊易位系高抗小麦条锈病和叶锈病,是小麦遗传改良的优异基因源。我们前期利用中国春ph1b基因突变体对该易位系进行诱导,获得了一批诱导后代材料,为了从中准确鉴定小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系,需要建立能够覆盖粗穗披碱草1H^(t)S染色体的荧光原位杂交(FISH)标记。本研究利用21个小麦及其近缘种探针、61个基于中国春基因组序列新开发的小麦1BS染色体探针以及40个根据简单三碱基重复序列新开发的探针对小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL易位系进行非变性FISH分析。结果显示,B74、B76和B77等36个探针(33个为新开发的)在1H^(t)S染色体上具有杂交信号,并且杂交信号可分为仅在染色体末端、仅在着丝粒处、同时在着丝粒处和近着丝粒处、覆盖1H^(t)S约3/4染色体臂、覆盖绝大部分1H^(t)S共五种类型。因此,部分探针单独使用或多个探针联合使用,其信号能覆盖1H^(t)S染色体,能够满足小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系鉴定,这可为小麦背景中粗穗披碱草染色质追踪提供新的检测手段。

观察全自动免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)评价胃癌HER2状态的效果

探讨荧光原位杂交(FISH)和全自动免疫组化(IHC)评价胃癌表皮生长因子受体2(HER2)状态的效果。方法 对我院胃食管交界处腺癌或手术切除原发性胃石蜡组织标本展开FISH和IHC检测,288例标本采集时间为2019.1.1-2023.12.31,对FISH和IHC检测的胃癌HER2蛋白与基因表达情况加以分析。结果 228例标本中,50例(21.93%)表达为IHC2+与3+,178例(78.07%)表达为0+与1+。FISH检测HER2基因扩增病理病例34例,其中31例IHC+1病例FISH检测有27例扩增,未扩增病例共2例,来源于17号染色体多体;FISH检测扩增病例共2例,来源于IHC2+的19例;在检测FISH下可检出HER2扩增34例,其中低度、中度以及高度扩增分别有15例(44.12%)、10例(29.41%)、9例(26.47%);扩增病理中17号染色体非整倍性者17例,其中亚二体性、低多体性、高多体性各有1例(5.88%)、11例(64.71%)、5例(29.41%);HER2蛋白表达与WHO分化程度与Lauren分级密切相关,P<0.05;HER2基因扩增、Lauren分级、肿瘤分化程度三者之间关系密切,P<0.05。结论 HER2基因扩增中17号染色体多倍体发生比例与分化程度相对更高,HER2阳性率偏高,以肠型多见,IHC虽能够用于胃癌HER2的筛查,但若遇到无法明确的病例,可借助FISH检测进一步确诊,能够有效提升临床诊断的准确性。

尿液基细胞荧光原位杂交检测对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

目的探讨尿液基细胞学(LBC)靶向的荧光原位杂交(FISH)对膀胱尿路上皮癌(BUC)的诊断价值。方法回顾性收集2020年10月—2022年10月于首都医科大学附属北京天坛医院泌尿外科行膀胱镜检查的128例患者的临床资料。所有患者在行膀胱镜检查前进行尿核基质蛋白22(NMP22)检测、尿LBC检测与尿LBC靶向的FISH检测,以术后病理结果为标准,分析3种检查方法的灵敏度和特异度。结果NMP22、尿LBC与LBC靶向的FISH的灵敏度分别为61.11%、79.17%、82.46%,特异度分别为57.14%、73.21%、86.67%;NMP22、尿LBC的灵敏度在检测高级别BUC时优于低级别,差异有统计学意义(P=0.01,P=0.03);3种方法对肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌检测的灵敏度比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论尿LBC靶向的FISH对BUC诊断的灵敏度和特异度较高,尤其是对于低级别BUC,可以作为BUC早期筛查、诊断的重要方法。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

单分子荧光原位杂交(smFISH)技术及应用

单分子荧光原位杂交(single-molecule fluorescence in situ hybridization,smFISH)技术是一种通过用偶联荧光基团的寡核苷酸探针,对固定细胞或组织中单个mRNA分子进行成像的方法。smFISH可对RNA进行定位、定量,以此对目标转录本进行实时研究。sm FISH适用于细胞、组织切片等多种类型生物样本。近年来,多种基于基础smFISH的改进技术被发明,进一步促进了该技术的实际应用。smFISH良好的RNA单分子可视化能力,使得其在发育生物学、神经生物学及肿瘤生物学等基础生物学科中得到了广泛的应用。本文综述了smFISH技术基本原理、smFISH技术的局限性、smFISH衍生技术方法、smFISH在不同生物学科中的应用进展,并对smFISH技术的发展前景做出展望。

荧光原位杂交检测MDM2和DDIT3基因信号改变在诊断脂肪肉瘤中的价值

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测MDM2和DDIT3基因在各亚型脂肪肉瘤的临床诊断价值。方法:回顾性分析北京大学第一医院病理科2015年1月至2019年12月诊断的62例脂肪肉瘤的临床病理学特征,所有病例进行了MDM2基因扩增FISH检测,其中48例进行了DDIT3基因断裂FISH检测,观察MDM2和DDIT3基因信号改变模式,并综合临床病理学特征确诊不同亚型脂肪肉瘤。结果:62例患者以男性多见(男∶女=1.75∶1),中位年龄59(31~89)岁。脂肪肉瘤组织学亚型包括20例非典型脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤(atypical lipomatous tumour/well differentiated liposarcoma,ALT/WDLPS)、26例去分化脂肪肉瘤(dedifferentiated liposarcoma,DDLPS)、13例黏液样脂肪肉瘤(myxoid liposarcoma,MLPS)和3例多形性脂肪肉瘤(pleomorphic liposarcoma,PLPS),其中23例(23/26)DDLPS和8例(8/20)WDLPS位于腹膜后,而MLPS和PLPS则均不位于腹膜后。肿瘤发生部位在不同亚型脂肪肉瘤间的差异具有统计学意义(P<0.05)。组织形态学上,各亚型脂肪肉瘤均可见多少不等的黏液样间质,且差别具有统计学意义(P<0.05)。MDM2基因扩增见于所有ALT/WDLPS和DDLPS(均为100%,20/20及26/26);DDIT3分离探针典型信号表现为基因断裂/易位,仅见于MLPS(100%,13/13),但值得注意的是,该探针还可出现非典型信号(端粒侧信号簇状扩增),比较常见,包括绝大多数DDLPS(96.2%,25/26)和ALT/WDLPS(83.3%,5/6,探针只随机检测6例)。对照分析探针说明书上的设计图,DDIT3分离探针之红绿色探针并未覆盖DDIT3基因本身,而是跨越了DDIT3基因,且探针端粒侧红色探针覆盖了CDK4基因,而DDIT3基因与CDK4基因距离很近,因此,当DDIT3分离探针端粒侧出现簇状扩增信号,提示CDK4基因扩增而非DDIT3基因断裂。随机挑选10例出现这种非典型信号的病例,以FISH法进一步应用CDK4和DDIT3计数探针进行验证,证实为CDK4基因扩增(100%,10/10),其中2例同时检测到DDIT3基因扩增(20%,2/10);DDIT3分离探针还存在另一种少见的非典型信号,即基因拷贝数增加(黄色融合信号数目≥3个),对应形态学表现为多形性和预后差,见于1例DDLPS和2例PLPS。结论:利用FISH技术观察MDM2和DDIT3基因信号改变模式时,需要注意对非典型信号做出正确判读,并结合患者的临床病理学特征,才能对不同亚型脂肪肉瘤做出正确诊断,进一步指导临床治疗。

蜡块保存年限对乳腺癌HER2基因荧光原位杂交结果的影响

目的以浸润性乳腺癌HER2基因表达为研究对象,探讨蜡块保存年限对HER2基因荧光原位杂交(FISH)检测结果的影响。方法回顾性收集2012年1月至2017年12月在首都医科大学附属北京友谊医院病理科初诊为原发浸润性乳腺癌的石蜡样本70例,其中免疫组织化学检测HER2蛋白2+且FISH检测HER2基因扩增的病例每年度10例,共60例,归为Fp组,包括手术切除标本32例,穿刺标本28例;另外选取2012年1月至2012年12月HER2蛋白2+且FISH检测HER2基因未扩增的病例10例,作为阴性对照,归为Fn组,包括手术切除标本5例,穿刺标本5例。将所有病例的归档蜡块以4μm厚度连续切片2张,一张用于苏木精和伊红染色以确定肿瘤位置,另一张重新进行FISH检测,切片预处理采用高温高压热修复方法,胃酶消化使用光学显微镜观察控制。最后按照乳腺癌HER2检测指南(2019版)进行判读并将计数的平均HER2拷贝数/细胞、平均CEP17拷贝数/细胞以及HER2/CEP17比值与初诊结果进行对比。结果Fp组60张切片中,除1张2016年的穿刺组织杂交失败外,其余组织均杂交成功,成功率为98.33%(59/60),成功的切片均判读为阳性,与初诊结果符合率为100%;Fn组10张切片全部杂交成功且均判读为阴性,与初诊结果符合率为100%。Fp组、Fn组中平均HER2拷贝数/细胞、平均CEP17拷贝数/细胞以及HER2/CEP17比值与初诊结果相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论保存5~10年的乳腺癌归档蜡块,采用高温高压热修复后行HER2基因FISH检测,成功率高、结果准确,可为初诊HER2 IHC 2+但未行FISH检测的癌转移患者在抗HER2靶向用药的筛选中提供一定的依据。

甲酸表面脱钙法在骨髓活检荧光原位杂交制片中的应用

目的对骨髓活检组织使用甲酸溶液进行表面脱钙,提高其石蜡切片荧光原位杂交检测的成功率,为骨髓内淋巴瘤的精确诊治及预后判断提供分子生物学依据。方法回顾性收集2015年1月至2022年5月间首都医科大学附属北京友谊医院病理科骨髓活检组织58例,其中套细胞淋巴瘤33例,弥漫大B细胞淋巴瘤21例,滤泡性淋巴瘤4例。根据常规制片前所用脱钙液和脱钙方式的不同,将实验分为3组:硝酸传统脱钙组(DG1)、硝酸表面脱钙组(DG2)和甲酸表面脱钙组(DG3)。其中DG2组和DG3组蜡块在荧光原位杂交制片前,需放入50%甲酸溶液中二次脱钙10 min,流水冲洗10 min。之后对3组蜡块进行连续切片,每例捞取组织面2张,分别用于苏木素和伊红染色和杂交检测。结果DG1组、DG2组和DG3组杂交的成功率分别为5.6%(1/18)、94.7%(18/19)和95.2%(20/21)。与DG1组相比,DG2组和DG3组杂交成功率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DG2组和DG3组成功率之间差异无统计学意义(P>0.05)。DG2组13例MCL和1例FL、DG3组8例MCL和2例FL中的CCND1/IGH和BCL2/IGH融合探针检测均为阳性。DG1组1例DLBCL、DG2组5例DLBCL、DG3组11例DLBCL细胞内MYC基因均未出现异常断裂信号,表现为两个红绿融合的黄色信号。杂交成功的切片上组织结构完整,细胞轮廓清楚,信号定位准确。结论甲酸表面脱钙法脱钙速度快,荧光原位杂交检测成功率高,结果准确。甲酸代替硝酸,配制安全而且容易购买。该法在骨髓活检FISH制片中的应用具有重要的临床价值,应用前景广阔,值得推广。

4种荧光原位杂交探针检测隐匿易位急性早幼粒细胞白血病的比较

目的:比较4种临床常用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)探针对罕见隐匿PML-RARα插入易位急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)的检测能力。方法:联合FISH、RT-PCR及常规染色体核型分析技术检测3例罕见APL病例相关融合基因及染色体异常,其中FISH技术采用4家不同公司PML-RARα探针进行检测。结果:FISH方法检测罕见插入易位PML-RARα融合时,由于片段短小极易出现假阴性的情况。4家不同探针FISH检测结果显示,美国Abbott公司探针3例PML-RARα融合基因检测均为阴性;英国Cytocell公司探针检测到2例阳性,1例阴性;武汉康录和广州安必平公司探针在3例中均成功检测到融合信号。结论:康录和安必平公司探针PML-RARα检出率高,是FISH检测此类罕见PML-RARα融合基因时的更优选择。

荧光原位杂交技术在性染色体异常产前诊断中的应用

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术在性染色体异常产前诊断中的应用。方法:回顾性分析100例因无创产前检测提示性染色体异常高风险的孕妇资料,在郑州大学第三附属医院产前诊断中心接受羊膜腔穿刺行FISH检测,同时进行染色体核型分析、全基因组低深度测序(CNV-seq)或染色体微阵列分析(CMA)检测,收集检测结果和孕妇妊娠结局,比较FISH和其他技术(染色体核型分析、CNV-seq或CMA)结果的一致性。结果:羊水FISH检出38例性染色体异常,其中22例为性染色体数目异常,与其他检测方法结果一致;16例为性染色体嵌合体,有6例FISH结果与其他检测方法结果不一致。其他检测方法检出FISH未检出的性染色体异常病例5例。FISH与其他检测方法结果一致性较好(Kappa=0.788,P<0.001)。FISH联合其他检测方法共检出性染色体异常病例43例,终止妊娠21例,分娩活产胎儿15例,分娩死胎1例,6例失访。结论:FISH技术在产前诊断中对性染色体异常的诊断有着重要的应用价值,但因技术的局限性,适合和其他的遗传学诊断技术联合应用,共同提高产前诊断检出率。

探讨提高石蜡样本荧光原位杂交重复检测成功率的方法

目的探讨石蜡包埋样本荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测失败的原因,并分析FISH检测失败与样本来源、探针种类、实验条件的相关性,以提高石蜡样本FISH重复检测的成功率。方法收集12709例石蜡检测样本,对其中首次检测失败的512例样本,采取更换蜡块或改变实验条件的方法进行重复实验,统计重复实验前后FISH检测结果。结果总体检测重复率为4.03%(512/12709),包括信号微弱无法判读58.59%(300/512),完全无信号41.41%(212/512)。其中本院样本195例(2.89%,195/6753),会诊样本317例(5.32%,317/5956)。按照样本来源分类,检测重复率较高的组织分别为软组织(4.41%)、肺(4.20%)、乳腺(4.18%)、淋巴(4.16%)、头颈部(4.03%)、胃(3.69%)、神经(2.88%)。样本来源及探针种类间的检测重复率差异无统计学意义(P>0.05)。重复检测后,186例(36.33%)样本检测成功,其中更换蜡块和改变实验条件的成功率分别为60.75%和29.88%(P<0.05)。结论石蜡样本FISH检测重复率与样本的前处理和实验操作相关,与组织学类型和探针类型无关,采取更换蜡块的方式重复实验可有效提高FISH二次检测的成功率。

新型寡聚核苷酸荧光原位杂交:发展与应用

荧光原位杂交技术(FISH,fluorescence in situ hybridization)是分子细胞遗传学中最为重要的手段之一,可以实现DNA或RNA序列在染色体上精确的可视化的直观定位。随着基因组测序技术的发展和测序成本的降低,大量物种的基因组信息被不断公布,基于高通量测序和参考基因组衍生的寡聚核苷酸序列(Oligo,oligonucleotide)探针在FISH中表现出独特的优势。和传统FISH探针相比,Oligo-FISH能更加精确、深入地揭示植物在进化过程中染色体的进化、遗传与变异。本研究对荧光标记的靶标DNA与荧光探针的种类与应用,寡聚核苷酸探针的种类及制备技术进行了综述,重点聚焦于Oligo-FISH的起源发展及其在鉴定植物染色体、识别植物同源染色体方面所发挥的重要作用。Oligo-FISH技术可用于构建物种属内的染色体核型,利用Oligo-FISH结果可为该属没有全基因组的作物的基因组组装提供指导,Oligo涂染还可以很好地解决异源多倍体物种中非同源染色体间的融合与交换问题,能够准确地检测染色体间是否存在易位等行为及异源重组。因此,Oligo-FISH技术的发展为基因组染色体水平的组装提供了强有力的支撑。未来Oligo-FISH技术与信号放大技术结合能够克服重复序列高度富集区域Oligo探针密度低的困难,可对非常短的基因区域进行可视化,如对启动子、增强子的检测,在转基因中对基因片段定位等,这些研究将有助于更加深入地了解物种遗传和进化,进一步推动作物遗传育种的改良与发展。

基于荧光原位杂交技术的全自动病理染色系统结构设计

荧光原位杂交(FISH)技术是检测恶性肿瘤细胞核酸序列的常用方法,在癌症的诊疗领域有广泛应用。为实现FISH实验的全自动化,设计了一种全自动病理染色系统。该系统设置有多轴操纵臂、试剂加样器、载玻片、盖玻片夹具、辅助模块等。多轴操纵臂定位误差不大于±0.1 mm,提取及丢弃移液枪头准确率大于99.5%,抽取盖玻片成功率大于99%,微量试剂加样误差不大于0.6μL,大量试剂加样误差不大于0.5 mL,载玻片夹具控温误差不大于±1℃且无试剂泄漏。生物实验结果表明,该系统荧光染色效果良好,信号点清晰可见,荧光图像可判读率超过90%,具有较好的人工替代性。

荧光原位杂交法分析肥披碱草的染色体核型

以肥披碱草为材料,用45S rDNA和5S rDNA做探针,通过荧光原位杂交(FISH)法,借助肥披碱草染色体内45S rDNA、5S rDNA的分布特性,分析其染色体核型。结果表明,检测到45S rDNA中第2号、第20号染色体短臂的末端及第17号染色体短臂次缢痕上有杂交信号,并检测到5S rDNA中第2号、第7号和第14号染色体短臂上及第17号染色体短臂次缢痕上有杂交信号。肥披碱草的核型公式为2n=6x=42=30 m+12 sm(4 sat);染色体平均长度为12.68μm,染色体长度范围为9.19~17.39μm,染色体组总长度为266.29μm,根据Stebbins核型分类原则,肥披碱草核型属于2A型。

荧光原位杂交和NanoString nCounter技术检测乳腺癌HER2的表达及其与化疗疗效的相关性

目的探讨荧光原位杂交和NanoString nCounter技术检测HER2蛋白在乳腺癌FFPE组织样本中的表达及对化疗疗效的影响。方法分别采用荧光原位杂交和NanoString nCounter技术检测53例乳腺癌及癌旁组织中HER2蛋白的表达,对两种方法的检测结果进行对比,检测结果分别和蒽环类化疗药物的疗效进行对比。结果FISH检测53例乳腺癌FFPE组织标本中HER2阳性率为56.60%(30/53);NanoString nCounter技术检测HER2阳性率为69.81%(37/53);将FISH结果作为金标准,NanoString nCounter检测敏感度为93.32%,特异性为60.87%。FISH检测HER2阳性的30例患者中,19例化疗有效(63.33%)(CR+PR),11例化疗无效(36.67%)(SD+PD);23例阴性结果中,10例化疗有效(43.48%),13例化疗无效(56.52%)(P=0.412)。NanoString nCounter技术检测HER2阳性的37例患者中,19例化疗有效(51.35%),18例化疗无效(48.65%);16例阴性患者中,3例化疗有效(18.75%),13例化疗无效(81.25%)(P=0.039)。结论与FISH方法相比,NanoString nCounter技术结果有较高的敏感度和特异性,且HER2的NanoString nCounter技术的检测结果和化疗疗效更相关。

荧光原位杂交不同染色体畸变在尿路上皮癌中的临床意义

目的 评估荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)在尿路上皮癌(urothelial carcinoma, UC)中的应用价值。方法 回顾性分析作者医院2014-08/2021-09月134例病理确诊为UC的患者。所有患者均行FISH检查,包括4个位点[染色体着丝粒特异性探针(chromosome-specific centromeric probe, CSP)3、7、17以及基因座特异性探针(gene locus-specific probe, GLP)-p16位点]。比较不同染色体畸变与肿瘤复发,进展及转移之间的关系。结果 CSP3、CSP7阳性的UC患者更容易出现肿瘤复发、进展(P均<0.05),p16基因座缺失的UC患者更容易出现肿瘤进展(P<0.05)。CSP17阳性与肿瘤复发、进展、转移差异无统计学意义。CSP3、CSP7、CSP17阳性与肿瘤分期及病理级别相关(P均<0.05)。p16基因座缺失与肿瘤分期及病理级别无显著相关性。结论 FISH是UC的有力临床工具,在与染色体畸变相关的肿瘤诊断、发生、预后、术后随访等方面具有巨大的应用价值。

影响尿脱落细胞荧光原位杂交在诊断尿路上皮癌中阳性率的临床研究

目的分析行尿脱落细胞荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)的尿路上皮癌(urothelial carcinoma,UC)患者临床资料,探索影响尿脱落细胞在诊断UC中阳性率的临床因素。方法回顾性分析作者医院2014-08/2021-09月134例行FISH的UC患者资料。对影响FISH诊断结果的相关因素进行单因素分析,再对单因素分析有统计学意义的指标进行多因素Logistic回归分析,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定截断点、灵敏度、特异度和曲线下面积(area under the curve,AUC)。结果单因素分析中差异有统计学意义的因素:有无夜尿增多、肿瘤数量、肿瘤部位、是否血尿以及T分期纳入多因素Logistic回归分析,结果显示,无夜尿增多、肿瘤多发、肿瘤部位在膀胱、标本有血尿、T分期为T2~T4是患者FISH检测阳性的独立危险因素,其OR值分别为0.21、4.78、0.36、3.25和5.70。ROC曲线的AUC为0.84,95%置信区间(confidence interval,CI)为(0.77~0.91),灵敏度为0.84,特异度为0.70,约登指数为0.54,模型区分度较高。结论肿瘤数量、肿瘤部位、夜尿、血尿、T分期在FISH诊断UC中具有重要意义,综合考虑上述因素有助于优化FISH在UC诊断中的应用。

基于荧光原位杂交法的液态活检技术在肺癌早期诊断中的应用

目的基于荧光原位杂交法的液态活检技术在肺癌早期诊断中的应用。方法使用3号与10号染色体的四色非放射性荧光着丝粒探针和端粒探针对120例肺结节血液样本的间期分裂细胞进行杂交染色检测,分析杂交后扫描所得的细胞图像,并计算其灵敏度、特异度和准确度。结果荧光原位杂交法检测120例血液样本中73例细胞内染色体分裂基本正常,循环肿瘤异常细胞(CTC)数<3,为阴性;47例细胞内3号或10号染色体出现双通道同时扩增,且CTC数≥3,为阳性。对应病理切片结果显示79例阴性,41例阳性。荧光原位杂交法灵敏度、特异度与准确度分别为80.49%、89.04%、81.67%。结论荧光原位杂交法灵敏度与准确度较高,液态活检技术可为临床肺癌早期诊断提供新的依据。

循环荧光原位杂交在淋巴瘤诊断中的价值

建立循环荧光原位杂交检测的方法,为需要多基因检测的淋巴瘤患者在组织或切片不足的情况下提供及时有效的诊断。方法 回顾性收集2021年1月至2022年5月某医院和外院会诊的淋巴瘤病例共27例,其中某医院10例,外院会诊17例。27例均进行过MYC、BCL2和BCL63种基因的FISH检测,每例切片3张。根据杂交的不同将实验分为3组:杂交1组(HG1)、杂交2组(HG2、杂交3组(HG3)。观察3组切片红、绿荧光信号的有无、信号模式及组织、细胞结构情况。结果 HG2组和HG3组循环荧光原位杂交的成功率均为100%。循环杂交后,HG2组中BCL2基因和HG3组中BCL6基因断裂阳性、阴性及扩增病例与HG1组完全相符,每张切片上基因表达异常的细胞数目与HG1组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。HG2组和HG3组在循环杂交后,切片上的组织结构完整,细胞轮廓清晰,信号明亮清晰、定位准确。结论 循环荧光原位杂交检测法可以在同一张切片上多次杂交不同的基因探针,方法简便,成功率高,结果准确,可有效解决淋巴瘤患者因组织或切片不足而无法进行多基因检测的问题。

分子标记物1p/19q荧光原位杂交图像中细胞自动计数和标记方法

细胞数值是临床中利用荧光原位杂交检测方式对分子标记物1p/19q共缺失状态评定工作中非常重要的参数。文章提出了一种新的细胞自动计数方法,利用1p/19q荧光原位杂交图像特点,提取红色通道图像,经二值化,去干扰,统计两点间距离等操作来实现细胞的自动计数和标记工作。该方法在临床收集的不同成像质量、背景干扰、细胞团簇等情况的图像中获得了90%以上的平均准确率。