中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

血浆外泌体微RNA-126-5p在儿童注意缺陷多动障碍中的表达及临床意义

目的探究血浆外泌体微RNA-126-5p(miR-126-5p)在儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)中的表达及临床意义。方法选取2021年7月至2022年7月在江苏省人民医院确诊的ADHD病儿70例为ADHD组,同时纳入同期江苏省人民医院健康体检的志愿者70例为对照组,采用韦氏幼儿智力量表第4版(WISC-Ⅳ)和家长评定行为量表(SNAP-Ⅳ)评估研究对象的临床症状,采用miRNA测序绘制研究对象的差异miRNA表达谱后寻找关键的miRNA,并利用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价miRNA诊断ADHD的价值,分析miRNA与临床症状的相关性,同时分析miRNA的生物学功能。结果与对照组比较,ADHD病儿WISC-Ⅳ的计算言语理解指数(VCI)[(76.99±6.93)分比(95.30±5.94)分]、知觉推理指数(PRI)[(75.38±4.49)分比(94.69±6.33)分]、工作记忆指数(WMI)[(76.35±7.01)分比(94.11±5.87)分]、加工速度指数(PSI)[(81.36±6.90)分比(89.49±6.20)分]以及总智商(FSIQ)[(79.18±9.30)分比(90.19±5.22)分]的分值显著降低,而SNAP-Ⅳ中注意缺陷和多动/冲动评分明显增高。同时miRNA测序筛选出11个差异miRNAs,其中miR-126-5p在ADHD病儿的血浆外泌体表达升高,并与病儿临床症状存在相关性,且ROC曲线显示miR-126-5p的AUC为0.817,灵敏度为78.6%,特异度为91.4%。此外miR-126-5p主要涉及突触囊泡循环、轴突导向、炎症介质以及长时程增强等生物学功能有关。结论ADHD病儿血浆外泌体miR-126-5p升高,具有诊断ADHD的临床应用价值,同时具有调控突触可塑性和炎症介质参与ADHD的病理机制。

外周血miRNA-126与miRNA-143表达对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值

目的:探讨外周血微小RNA-126(miRNA-126)、miRNA-143表达水平对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值。方法:选取113例行介入栓塞术治疗的颅内动脉瘤患者为研究对象,根据术后不同Raymond分级分为RaymondⅠ级组(n=88)、RaymondⅡ级组(n=13)和RaymondⅢ组(n=12);根据不同预后分为复发组(n=19)和未复发组(n=94)。比较不同分级患者、不同预后患者外周血miRNA-126、miRNA-143表达水平,分析其与Raymond分级的相关性及其对颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的预测价值。结果:与RaymondⅠ级组相比,RaymondⅡ级组和RaymondⅢ级组患者miRNA-126表达水平均升高(P<0.05),miRNA-143表达水平均降低(P<0.05)。相关性分析显示,miRNA-126水平与Raymond分级正相关(r=0.364,P<0.05),miRNA-143水平与Raymond分级负相关(r=-0.347,P<0.05)。复发组患者外周血miRNA-126表达水平高于未复发组(P<0.05),miRNA-143表达水平低于未复发组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-126、miR-143及其联合预测颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的曲线下面积分别为0.767、0.826、0.968,联合检测预测的价值高于两者单独预测(P<0.05)。结论:外周血miRNA-126、miRNA-143联合检测能提高颅内动脉瘤介入术后复发的预测价值。

miRNA-126通过抑制自噬逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用研究

目的:比较人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞与人肺腺癌顺铂敏感株A549细胞的自噬水平,观察微小RNA-126(microRNA-126,miRNA-126)对肺癌顺铂耐药细胞自噬的影响,并探讨miRNA-126在肺癌顺铂耐药中的作用。方法:MTT法检测顺铂的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);RT-qPCR检测miRNA-126转染后肺癌细胞中miRNA-126的表达量;吖啶橙染色观察肺癌细胞自噬囊泡的形成情况;Western blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达变化。结果:A549/DDP细胞自噬囊泡数量和LC3水平显著高于A549细胞(P<0.01);转染miRNA-126上调了A549/DDP细胞中miRNA-126的表达量(P<0.01);miRNA-126降低A549/DDP细胞中自噬囊泡比例和LC3-II蛋白表达水平(P<0.01),从而抑制了顺铂耐药细胞A549/DDP的自噬水平;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,miRNA-126联合3-MA进一步增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.01)。结论:miRNA-126通过抑制自噬逆转了肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药。

急性脑梗死患者血清miRNA-126和miRNA-182表达与卒中后血管性认知功能障碍的关系

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小RNA(miRNA)-126和miRNA-182表达与卒中后血管性认知功能障碍(VCI)的关系。方法将石家庄市人民医院收治的176例ACI患者,根据治疗后3个月是否合并VCI分为非VCI组(94例)与VCI组(82例)。收集临床资料及实验室指标,检测血清miRNA-126、miRNA-182表达水平,依据治疗后3个月MMSE评分将VCI组分为轻(27例)、中(24例)、重度认知功能障碍(31例)。采用Spearman法分析血清miRNA-126、miRNA-182与MMSE评分相关性,Logistic回归分析ACI后发生VCI的影响因素,并绘制ROC曲线评估血清miRNA-126、miRNA-182表达水平对VCI的预测价值。结果VCI组年龄、Hcy高于非VCI组,文化程度低于非VCI组(P<0.05)。VCI组血清miRNA-182表达水平(1.44±0.28)高于非VCI组(1.09±0.07),miRNA-126表达水平(0.78±0.15)低于非VCI组(1.06±0.10)(P<0.05)。VCI组轻度、中度、重度认知功能障碍者血清miRNA-126水平依次降低,miRNA-182水平依次升高(P<0.05)。VCI组血清miRNA-126与MMSE评分呈正相关(r=0.770,P<0.05),miRNA-182与MMSE评分呈负相关(r=-0.734,P<0.05)。文化程度(OR=0.816)、miRNA-126(OR=0.807)、miRNA-182(OR=1.953)是ACI后发生VCI的影响因素(P<0.05)。血清miRNA-126、miRNA-182单独预测ACI后VCI的AUC分别为0.882、0.857,二者联合预测的AUC为0.951,优于单独检测miRNA-126、miRNA-182的AUC(Z=3.114、3.623,P=0.002、<0.001)。结论ACI后VCI患者血清miRNA-126表达水平降低,miRNA-182表达水平升高,均与卒中后VCI关系密切,能反映认知障碍程度,二者联合对VCI的发生具有一定的评估价值。

人胃癌组织中微小RNA-126和解整合素-金属蛋白酶9的表达及其与临床病理参数的相关性

目的分析人胃癌组织中微小RNA-126(miR-126)及解整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)的表达及其与临床病理参数的相关性,探讨二者与胃癌发生发展的关系。方法收集2020年1月至2022年9月吉林省人民医院收治并经临床和病理组织学确诊为胃腺癌的46例患者手术切除的癌组织及距离癌组织3~5 cm的癌旁组织。采用荧光定量聚合酶链反应法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-126及ADAM9 mRNA的表达,免疫组织化学法检测ADAM9蛋白的表达。记录患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期及转移等基本信息,分析miR-126及ADAM9的表达与胃癌患者临床病理参数的相关性。结果胃癌组织中miR-126 mRNA的相对表达量显著低于癌旁组织[(0.53±0.24)比(1.00±0.00)](t=-8.613,P<0.001),ADAM9 mRNA的相对表达量显著高于癌旁组织[(1.43±0.56)比(1.00±0.00)](t=3.412,P=0.002)。ADAM9在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁组织[73.9%(34/46)比15.2%(7/46)],差异有统计学意义(χ^(2)=29.723,P<0.001)。胃癌组织中miR-126的表达水平与患者肿瘤分化程度、TNM分期以及远处转移有关(均P<0.05)。胃癌组织中ADAM9的表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论胃癌组织中miR-126的表达水平下调,ADAM9表达上调,二者之间可能存在负调节作用,且与胃癌的进展及转移关系密切。

分泌型卷曲相关蛋白4、微小RNA-126-5p在三阴乳腺癌组织中表达及与临床病理特征的关系

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)、微小RNA-126-5p在三阴乳腺癌组织中表达及与临床病理特征的关系。方法选取2014年10月至2016年10月在沧州市人民医院接受手术切除治疗的三阴乳腺癌病人78例作为研究对象,取其癌组织及癌旁组织(距离肿瘤边缘5 cm),以SP免疫组化法检测SFRP4表达情况,以RT-qPCR分析法检测miR-126-5p水平。收集病人资料,分析SFRP4、miR-126-5p表达与三阴乳腺癌病人临床病理特征的关系。以Spearman等级相关性分析SFRP4、miR-126-5p表达的相关性。绘制K-M生存曲线分析病人生存状态,行Cox多因素分析影响三阴乳腺癌病人预后的因素。结果三阴乳腺癌组织中SFRP4阳性率[53.85%(42/78)]明显高于癌旁组织[37.18%(29/78)](P<0.05),miR-126-5p表达0.78±0.21明显低于癌旁组织1.00±0.00(P<0.05)。对纳入病人进行临床病理特征分析,结果显示,SFRP4表达与淋巴结转移[78.13%(25/32)比36.96%(17/46)]、肿瘤浸润程度[65.12%(28/43)比22.86%(8/35)]、细胞增殖抗原Ki-67表达[83.33%(20/24)比40.74%(22/54)]有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级无关(P>0.05)。miR-126-5p与淋巴结转移[81.25%(26/32)比30.43%(14/46)]、Ki-67表达[70.83%(17/24)比42.59%(23/54)]有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级及肿瘤浸润程度无关(P>0.05)。行Spearson相关性分析,结果显示,SFRP4、miR-126-5p在三阴乳腺癌组织中具有相关性(P<0.05)。对病人进行为期5年的随访,生存63例,死亡15例。miR-126-5p低表达组病人生存28例,死亡12例,miR-126-5p高表达组生存35例,死亡3例,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);SFRP4阳性组病人生存29例,死亡13例;SFRP4阴性组病人生存34例,死亡2例,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。行多因素Cox分析,结果显示,有淋巴结转移、Ki-67阳性、miR-126-5p低表达、SFRP4阳性为影响三阴乳腺癌病人预后的独立危险因素(P<0.05)。结论三阴乳腺癌组织中miR-126-5p呈低表达,SFRP4阳性率高,两者表达具有相关性,可作为预测三阴乳腺癌病人预后的重要指标。

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果:Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论:miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

电针水沟穴对大脑中动脉闭塞大鼠脑缺血后微小RNA-126及靶基因的影响

目的观察电针水沟穴对大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠脑缺血后微小RNA-126（miR-126）及其靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚单位（PIK3R2）mRNA、出芽相关蛋白-1（SPRED1）mRNA表达的影响，从血管新生角度探讨电针治疗脑缺血的可能机制。方法将20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、治疗组，每组5只。参照改良Longa线栓法复制MCAO大鼠模型，假手术组不插入线拴。制模后治疗组于水沟穴（大鼠唇裂鼻尖下1mm中处，向上斜剌1mm）与右耳根部皮肤接G6805—1A型治疗仪进行电针治疗，1mA电流、2Hz，持续留针30min，连续治疗3d；正常组、假手术组、模型组制模后不进行处理。采用Berderson评分评价大鼠神经功能缺损程度；用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-126及PIK3R2、SPRED1的mRNA表达。结果与正常组比较，模型组大鼠有不同程度的神经功能缺损，Berderson评分明显增高（分：11．20±1．64比0，P〈0．01），治疗后Berderson评分较模型组明屁降低（分：7．20±1．48比11．20±1．64，P〈0．01）。模型组miR-126、PIK3R2及SPRED1的mRNA表达均较正常组明显升高[miR-126（2^-△△Cr）：1．13±0．48比0．16±0．12．PIK3R2mRNA（2^-△△Cr）：12．03±6．09比0．42±0．33，SPRED1mRNA（2^-△△Cr）：8．77±3．85比0．21±0．40，均P〈0．01]；治疗组miR-126表达较模型组明显升高（2^-△△Cr：1．93±0．81比1．13±0．48），PIK3R2、SPRED1的mRNA表达较模型组明照明显降低[PIK3R2mRNA（2^-△△Cr）：5．78±3．61比12．03±6．09，SPRED1mRNA（2^-△△Cr）：3．90±3．24比8．77±3．85，P〈0．05或JP〈0．01]。结论电针水沟穴能促大鼠脑缺血后神经功能体征的恢复，其机制可能与其调控miR-126及其靶基因从而促进了脑血管新生有关.

miRNA-126与颈动脉粥样硬化患者斑块稳定性的关系

目的研究颈动脉粥样硬化患者中外周血小分子RNA-126(miR-126)与斑块稳定性之间的关系。方法选择可能存在颈动脉硬化的患者,根据颈动脉超声检测结果分为正常组、稳定斑块组和不稳定斑块组,常规检测血压、体重指数、肝肾功能、血糖、血脂、尿酸、超敏C反应蛋白(hs CRP),real time PCR检测外周血中miRNA-146a的表达水平。对存在颈动脉粥样硬化的患者予瑞舒伐他汀20 mg每晚一次口服治疗,12个月后复查颈动脉超声、hs CRP及miR-126。结果 3组患者的年龄、体重指数、血压、血糖、血脂、尿酸、肝肾功能均无明显差异(P>0.05),不稳定斑块组患者的hs CRP明显升高(P<0.05)。与正常组相比,稳定斑块组患者血浆中的miR-146a水平上升(P<0.05),不稳定斑块组患者的miR-126水平更加显著(P<0.01)。治疗12个月后,16例不稳定型动脉粥样硬化患者的颈动脉斑块稳定性改善,同时外周血hs CRP及miR-126也明显下降(P<0.05)。结论 miR-126可能与颈动脉粥样硬化发展的发生发展相关。

微小RNA-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响

目的探讨微小RNA(mi RNA)-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响。方法收集该院胸外科手术切除且保存完整的食管癌及相应癌旁组织标本30例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中mi RNA-126 m RNA表达;mi RNA-126 mimi和control转染EC109细胞,设置阴性对照组(转染mi RNA mimic control)、转染组、空白对照组(仅转染试剂),PCR检测转染EC109细胞mi RNA-126表达,转染细胞培养1、3、5 d后MTT检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞迁移活力。结果癌组织中mi R-126 m RNA低于癌旁组织(P<0.05);转染EC109细胞后mi RNA-126在阴性对照组和空白对照组表达量均低于转染组(P<0.05);三组转染EC109细胞随着培养时间延长,细胞OD值均逐渐升高(P<0.05),培养第3、5天细胞OD值组间差异显著(P<0.05),其中转染组EC109细胞OD值均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);转染EC109细胞迁移活力检测结果显示,转染组OD值低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论食管癌组织中mi RNA-126低表达,并且对食管癌EC109细胞增殖和迁移具有一定抑制作用。

微小RNA-126在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的观察微小RNA-126(miR-126)在结肠癌组织中的表达情况,并分析miR-126的表达与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。方法收集2015年1月至2018年9月吉林省人民医院行结肠癌根治术或肠镜下结肠息肉切除术102例患者的手术标本,包括结肠癌70例、腺瘤性息肉32例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测腺瘤组织、结肠癌及其癌旁组织中miR-126的表达。以结肠癌组织miR-126平均表达值为界,将结肠癌病例分为高表达组和低表达组,分析miR-126表达与患者临床特征及病理参数的关系。结果 miR-126在腺瘤型息肉组织中的表达(0. 75±0. 09)明显低于癌旁组织(1. 00),而在高、中、低分化结肠癌组织中的表达[(0. 47±0. 04)、(0. 36±0. 12)、(0. 29±0. 07)]明显低于腺瘤型息肉组织(P <0. 05或P <0. 01)。以miR-126平均表达值(0. 37±0. 03)为界将结肠癌患者分为高表达组(19例)和低表达组(51例),miR-126的低表达与肿瘤分化程度、TNM分期、是否发生淋巴结转移及远处转移具有明显相关性具有明显相关性(P <0. 05或P <0. 01)。结论 miR-126在结肠癌中低表达,其可能作为抑癌基因与结肠癌的发生和进展有关。

MicroRNA-126通过靶向抑制EZH2增加胃癌SGC-7901细胞的放射敏感性

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)增强胃癌细胞放射敏感性的分子生物学机制。方法:体外培养胃癌SGC-7901细胞,通过转染miR-126模拟序列上调细胞内的miR-126水平,使用RT-q PCR及Western blot检测miR-126上调后zeste基因增强子同源物2(EZH2)的mRNA及蛋白水平的变化。双萤光素酶报告基因实验确认miR-126与EZH2的靶向结合关系。在上调miR-126水平的同时,通过共转染pc DNA3.1-EZH2真核表达质粒提高细胞内的EZH2表达,CCK-8法及流式细胞术分析照射后胃癌细胞的活力及凋亡率的变化,从而评估EZH2过表达对miR-126放射增敏作用的影响。结果:上调胃癌SGC-7901细胞中的miR-126水平可以显著抑制EZH2的mRNA及蛋白水平(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验提示miR-126与EZH2的mRNA间存在直接靶向关系。与仅上调miR-126的细胞相比,上调miR-126水平的同时过表达EZH2水平,将导致照射后SGC-7901细胞的活力增加,凋亡率减少(P<0.05)。结论:对EZH2靶向抑制是miR-126增强胃癌SGC-7901细胞放射敏感性的机制之一。

微小RNA-126和血管内皮生长因子在增殖性糖尿病视网膜病变患者视网膜前膜中的表达及意义

目的探讨微小RNA-126(miR-126)和血管内皮生长因子(VEGF)在增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者视网膜前膜组织中的表达及临床意义。方法选取眼科择期行玻璃体切割手术的PDR患者65例纳入研究组,另选取同期行玻璃体切割手术的特发性黄斑裂孔患者62例纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测2组患者视网膜前膜组织中miR-126、VEGF mRNA表达水平,采用Western blotting法检测VEGF蛋白表达水平,检测患者空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平,采用Pearson相关分析法分析miR-126与VEGF mRNA的相关性及两者与FGB、HbA1c、TG的相关性,并对PDR发生的影响因素进行Logistic多元回归分析。结果研究组患者视网膜前膜组织中miR-126表达水平低于对照组,VEGF mRNA及其蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者FBG、TG和HbA1c水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-126与VEGF mRNA呈显著负相关(P<0.05);miR-126与FGB、HbA1c、TG呈显著负相关(P<0.05),而VEGF mRNA与FGB、HbA1c、TG呈显著正相关(P<0.05);Logistic多元回归分析显示,miR-126与VEGF mRNA表达水平均是患者发生PDR的独立影响因素。结论 PDR患者视网膜前膜组织中miR-126表达显著降低,VEGF表达显著升高,miR-126可能通过负性调控VEGF表达而参与PDR的发生发展。

miRNA-126对非小细胞肺癌细胞功能的影响及相关机制研究

目的观察miRNA-126对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡侵袭以及迁移能力的影响及相关机制。方法 2015年3-5月在辽宁省葫芦岛市中心医院实验室进行实验。将非小细胞肺癌A549细胞转染,建立稳定转染的miRNA-126组和空白对照组。采用RT-PCR检测miRNA-126基因的表达,MTT比色法检测细胞增殖能力,倒置显微镜观察细胞侵袭能力、细胞迁移能力,Western Blot检测表皮生长因了-受体(EGFR)、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达。结果 miRNA-126转染组24 h、48 h、72 h时miRNA-126水平均高于空白对照组(t/P=15.112/0.000、8.714/0.012、7.537/0.013),而空白对照组各时间段miRNA-126的相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05);miRNA-126转染组72 h miRNA-126的相对表达量显著高于48 h和24 h(F/P=4.575/0.043)。miRNA-126转染组细胞24 h、48 h、72 h增殖率均低于空白对照组(t/P=6.280/0.000,6.804/0.000,6.401/0.000),凋亡率均高于空白对照组(t/P=19.726/0.000,22. 052/0. 000,5.170/0. 000);空白对照组各时间段的细胞增殖率和凋亡率差异无统计学意义(P> 0.05)。miRNA-126转染组72 h的细胞增殖率显著低于48 h和24 h (F/P=5.738/0.001),miRNA-126转染组72 h的细胞凋亡率显著高于48 h和24 h(F/P=2. 681/0. 045); miRNA-126转染组划痕宽度宽于空白对照组(t/P=8. 318/0.000),侵袭细胞数显著低于空白对照组(t/P=24. 394/0. 000)。miRNA-126转染组EGFR、AKT、mTOR蛋白表达量均低于空白对照组(t/P=4.093/0.000、6.325/0.000、3.061/0.000)。结论转染的miRNA-126通过调控EGFR、AKT、mTOR表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移能力。

miRNA-126与血管稳态

血管结构与功能的稳态平衡是人体生理活动的重要基础,而越来越多的研究认为微小RNA(miRNA),尤其是miRNA-126,在血管的生成和修复过程中起着关键性的作用,是维持血管稳态的重要组成部分。因此,该文对miRNA-126在血管稳态中发挥的具体作用机制进行阐述。

微RNA-126介导磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2及磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B信号与肿瘤关系的新进展

磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2(PIK3R2)是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的家庭成员之一,通过PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路参与血管的形成、维护以及改造的调控,是组织器官正常发育、损伤以及肿瘤发生的一个重要的基因调控靶目标。不同类型的肿瘤,微RNA(miRNA)126介导的PIK3R2调控水平及趋势存在差异,可能与肿瘤的发生存在联系,是肿瘤研究中有前景的调控靶目标之一。

微小RNA-126抑制间质转化中内皮祖细胞的增殖与迁移

目的探讨微小RNA-126(mi R-126)对间质转化中的血管内皮祖细胞(EPC)增殖与迁移的影响。方法分离大鼠骨髓源内皮祖细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)诱导EPC的间质转化,慢病毒转染建立mi R-126过表达EPC,通过MMT法检测EPC的增殖,细胞划痕实验与Transwell法检测细胞迁移能力。结果 TGF-β1成功诱导EPC间质转化,mi R-126抑制间质转化中EPC损伤细胞间距的缩短,抑制Transwell小室膜下单位面积的细胞数量。结论 mi R-126过表达抑制间质转化中EPC的增殖与迁移。

MicroRNA-126-5p在阿霉素所致损伤心肌中的表达及作用

目的:探讨微小RNA-126-5p(microRNA-126-5p)在阿霉素诱导的小鼠损伤心肌中的表达及在心肌细胞损伤中的作用。方法:采用BALB/c小鼠腹腔注射阿霉素的方法制备小鼠急、慢性阿霉素心肌损伤模型,苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠心肌形态学改变,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定小鼠血清中的LDH活性,应用PowerLab数据采集分析系统检测小鼠心肌损伤情况。采用real-time PCR法检测阿霉素刺激大鼠心肌细胞株H9c2后micro RNA-126-5p的表达情况;转染microRNA-126-5p模拟物或抑制物,检测microRNA-126-5p模拟物及抑制物对阿霉素刺激后H9c2细胞microRNA-12-5p表达水平、LDH释放及caspase-3活化情况的影响。结果:在小鼠急、慢性阿霉素心肌损伤模型中,HE染色发现小鼠心肌纤维排列紊乱,肌原纤维溶解,局部有炎症细胞浸润;血清LDH释放增多(P<0.05);左心室等容舒张期压力下降最大速率(-dp/dtmax)及左心室等容收缩期压力上升最大速率(+dp/dtmax)下降;real-time PCR检测发现小鼠心肌中microRNA-126-5p的表达显著上调。阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤中也伴有microRNA-126-5p表达明显上调;进一步采用micro RNA-126-5p模拟物与抑制物转染H9c2细胞,发现与单纯阿霉素处理组相比,microRNA-126-5p模拟物组LDH的释放增加,caspase-3活性升高,而microRNA-126-5p抑制物组结果则与之相反。结论:阿霉素可诱导小鼠心肌细胞microRNA-126-5p的表达明显升高,进而降低心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡,发挥促心肌损伤作用。