miRNA-133b-3p对PC12细胞P2rx4的表达调控及细胞钙活动的实验观察

目的:从离体细胞水平观察miRNA-133b-3p调控P2rx4表达对神经元钙活动的影响。方法:用转染试剂将miRNA-133b-3p mimic和miRNA-133b-3p inhibitor转入PC12细胞中。转染48 h后,用荧光定量PCR的方法检测PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量,P2rx4 mRNA的表达变化;用免疫印迹的方法检测P2rx4受体蛋白的表达变化;用胞内钙成像技术检测ATP孵育后细胞中钙离子浓度的变化。结果:转染48 h后,与阴性对照组相比,加入miRNA-133b-3p mimic后PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量明显增加,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达减少,ATP孵育后细胞中钙离子浓度的升高明显减弱。转染inhibitor后,细胞内miRNA-133b-3p的含量明显减少,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达增加,ATP孵育后胞内钙离子浓度的升高明显增强。结论:miRNA-133b-3p通过负向调控P2rx4的表达来影响细胞钙活动。

CFA致炎大鼠脊髓腰膨大组织内miRNA-133b-3p与P2X4受体表达的实验观察

目的:观察CFA致炎大鼠脊髓腰膨大组织内miRNA-133b-3p与P2X4受体表达的相关关系。方法:大鼠足底注射CFA后,0 h、2 h、1 d、3 d检测大鼠机械痛和热痛的痛阈值变化,且在这四个时间点取脊髓腰膨大组织,提取总RNA和蛋白质,检测miRNA-133b-3p表达量的变化,同时检测P2X4受体m RNA和蛋白的表达量的变化。结果:与对照组相比,大鼠脚掌注射CFA后,机械痛和热痛痛阈均明显下降(P<0.05),在2 h时痛阈最低,1 d和3 d时较2 h略有回升;腰膨大部位miRNA-133b-3p表达量在2 h时没有变化,1 d和3 d开始呈现逐渐下降的趋势(P<0.05),四个时间点P2X4受体m RNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05),但P2X4受体蛋白在3 d时表达量显著升高(P<0.05)。结论:CFA致炎大鼠脊髓腰膨大组织miRNA-133b-3p表达下调,同时P2X4受体表达上调,两者可能存在负向调控关系。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1、微RNA-514b-3p、甲胎蛋白检测对早期肝癌根治术后复发的预测价值分析

目的探究血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1(lncRNA LUCAT1)、微RNA-514b-3p(miR-514b-3p)、甲胎蛋白(AFP)表达水平对预测早期肝细胞癌(HCC)病人根治术后复发的临床价值。方法选取2016年3月至2019年6月西安市中心医院诊治的130例Ⅰ~Ⅱ期HCC病人为研究对象,对所有早期HCC病人随访3年,按其行根治术后是否复发分为未复发组(n=92)和复发组(n=38)。检测并比较复发组、未复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP水平;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP对早期HCC病人根治术后复发的预测价值;多因素logistic回归分析早期HCC病人根治术后复发的影响因素;Pearson法分析根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1表达水平与miR-514b-3p的关系。结果与未复发组[0.99±0.33、(17.42±3.67)μg/L、1.01±0.34]相比,复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1(1.87±0.63)、AFP水平(25.38±5.18)μg/L升高(P<0.05),miR-514b-3p水平(0.56±0.19)降低(P<0.05)。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP预测早期HCC病人根治术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.81、0.68、0.83,且血清lncRNA LUCAT1、AFP联合预测早期HCC病人根治术后复发的AUC为0.93,灵敏度为93.8%,特异度为84.8%。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的AUC为0.91,高于二者单独预测(P<0.05);血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p单独及联合预测AFP阳性病人根治术后复发的AUC与AFP单独预测相比,差异无统计学意义(P>0.05)。AFP、lncRNA LUCAT1是影响早期HCC病人根治术后复发的独立危险因素(P<0.05),miR-514b-3p是独立保护因素(P<0.05)。根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平与miR-514b-3p水平呈负相关(P<0.05),且lncRNA LUCAT1与miR-514b-3p存在结合位点。结论根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平较高,miR-514b-3p水平较低,血清lncRNA LUCAT1与AFP联合检测更有利于临床预测早期HCC病人根治术后复发情况,且血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的效能更高。

血清微小RNA-19b-3p、微小RNA-933水平对老年慢性心力衰竭患者心功能及预后的评估价值

目的 探讨血清微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)、微小RNA-933(miR-933)水平对老年慢性心力衰竭患者心功能、预后的评估价值。方法 选取收治的108例老年慢性心力衰竭患者作为研究组。研究组中,根据纽约心脏学会(NYHA)分级,分为Ⅱ级患者35例,Ⅲ级患者40例,Ⅳ级患者33例。选择同期体检的90例健康人群作为对照组。入院后检测血清miR-19b-3p、miR-933水平。采用超声心动图测量心功能指标[左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)]。采用Pearson相关分析法分析血清miR-19b-3p、miR-933水平与心功能的关系。根据老年慢性心力衰竭患者入院1年内是否发生终点事件分为发生组(n=34)和未发生组(n=74)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-19b-3p、miR-933对老年慢性心力衰竭预后的预测价值。采用多因素Cox回归分析法分析老年慢性心力衰竭患者预后的影响因素。结果 研究组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心功能分级Ⅳ级患者血清miR-19b-3p、miR-933及LVEF水平低于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,LVEDD大于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,差异有统计学意义(P<0.05)。老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.554、-0.368,P<0.001);血清miR-933水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.505、-0.410,P<0.001)。发生组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的曲线下面积(AUC)为0.835(95%CI:0.785~0.885)、0.843(95%CI:0.790~0.890),二者联合预测的AUC为0.901(95%CI:0.851~0.951)。血清miR-19b-3p(HR=3.762,95%CI:1.854~7.634)、miR-933(HR=3.480,95%CI:1.903~6.364)及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分(HR=3.047,95%CI:1.837~5.051)为老年慢性心力衰竭患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论 老年慢性心力衰竭患者的血清miR-19b-3p、miR-933水平均呈低表达。miR-19b-3p、miR-933水平变化与心功能及预后密切相关,其可作为预测老年慢性心力衰竭患者预后不良的有效指标。

血清微RNA-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4对多囊卵巢综合征不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值

目的探究血清微RNA(miR)-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4(SMAD4)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值。方法选取2018年1月至2022年1月在平顶山市妇幼保健院就诊的PCOS不孕病人172例为PCOS组,另取同期体检的180例月经周期正常且已婚已育女性作为对照组。实时荧光定量PCR法检测血清中miR-130b-3p的水平;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清SMAD4水平。判断PCOS病人人工授精结局并分为临床妊娠组(n=146)和未临床妊娠组(n=26)。Pearson法对PCOS病人血清SMAD4、miR-130b-3p、抗苗勒氏管激素(AMH)的相关性进行分析;logistic回归分析影响PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素,采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估miR-130b-3p、SMAD4水平预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的价值。结果与对照组相比,PCOS组血清miR-130b-3p(1.02±0.24比2.16±0.34)水平较高(t=36.47,P<0.05),血清SMAD4[(71.15±11.62)ng/L比(36.05±6.37)ng/L]水平较低(t=34.92,P<0.05),与临床妊娠组相比,未临床妊娠组血清miR-130b-3p(2.04±0.31比2.85±0.51)水平较高(P<0.05),优势卵泡数≥2个比例(78.08%比50.00%)及血清AMH[(8.27±1.85)pg/L比(6.16±1.01)pg/L]、SMAD4[(38.27±6.99)ng/L比(23.60±2.91)ng/L]水平较低(P<0.05)。Pearson分析显示,PCOS病人血清中SMAD4与miR-130b-3p呈负相关(r=−0.56,P<0.05),PCOS病人血清中miR-130b-3p与AMH呈负相关(r=−0.46,P<0.05),血清中SMAD4与AMH呈正相关(r=0.46,P<0.05)。logistic分析显示,miR-130b-3p水平升高是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素(P<0.05),AMH和SMAD4水平降低是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-130b-3p、SMAD4联合预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的曲线下面积(AUC)为0.95,其灵敏度为96.20%,特异度76.70%。结论PCOS病人血清miR-130b-3p水平升高,SMAD4水平下降,二者对PCOS病人人工授精未临床妊娠有预测价值。

miR-27b-3p联合miR-215对早期胃癌内镜黏膜下剥离术后复发的预测效能

目的探讨微小RNA(miR)-27b-3p联合miR-215对早期胃癌内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的预测效能。方法2021年1月~2022年2月医院收治的早期胃癌病人122例,所有病人均接受ESD术,随访10~15个月,平均(12.57±1.83)个月,根据早期胃癌病人ESD术后是否复发分为复发组与非复发组。对比两组miR-27b-3p、miR-215相对表达量及临床资料,分析早期胃癌病人ESD术后复发的影响因素,分析miR-27b-3p、miR-215相对表达量及二者联合对早期胃癌病人ESD术后复发的预测价值。结果随访10~15个月,平均(12.57±1.83)个月,122例病人失访3例,随访率为97.54%,其中12例复发,剩余107例均未复发。复发组miR-27b-3p低于非复发组(P<0.05),复发组miR-215相对表达量高于非复发组(P<0.05)。复发组病变大小≥3 cm、浸润深度为SM2~SM3例数占比高于非复发组(P<0.05),复发组R0切除例数占比低于非复发组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示病变大小≥3 cm、浸润深度为SM2~SM3、miR-27b-3p相对表达量、miR-215相对表达量为早期胃癌病人ESD术后复发的影响因素(P<0.05)。miR-27b-3p、miR-215相对表达量及二者联合预测早期胃癌病人ESD术后复发的曲线下面积(AUC)AUC分别为0.783、0.845、0.935。结论miR-27b-3p、miR-215可用于预测早期胃癌病人ESD术后复发风险,二者联合具有更高的预测价值。

EGCG调控miR-133a/b-3p和TGF-β1/Smad3抗慢性阻塞性肺疾病的作用研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的保护作用和机制。方法:通过烟熏和脂多糖滴注建立大鼠COPD模型。每日灌胃给予100或200 mg/kg EGCG,4 w后观察肺部形态学改变。检测肺促炎细胞因子、MDA、GSH、SOD水平。免疫组化法评价纤维连接蛋白(fibronectin)和波形蛋白(vimentin)表达情况,Western blot检测TGF-β_1、p-Smad3表达水平,q PCR检测fibronectin、vimentin、TGF-β_1mRNA和微小RNA(miR)-133a/b-3p水平。结果:与正常对照组比较,模型组肺泡壁破损明显,肺组织促炎细胞因子、MDA及Smad3磷酸化水平显著升高,GSH、SOD、miR-133a/b-3p水平显著降低,fibronectin、vimentin、TGF-β_1蛋白表达显著升高。与模型组比较,EGCG能改善COPD大鼠的肺损伤,显著降低促炎细胞因子、MDA和Smad3的磷酸化水平,升高GSH、SOD、miR-133a/b-3p水平,并减少fibronectin、vimentin、TGF-β_1蛋白表达。结论:EGCG能改善COPD大鼠的肺损伤,其作用机制与调控肺TGF-β_1/Smad3和miR-133a/b-3p水平,抑制氧化应激和炎症有关。

先天性心脏病患儿血清微小RNA-148b-3p表达水平及临床意义

目的:检测先天性心脏病患儿血清微小RNA(miR)-148b-3p表达水平,探究其临床意义。方法:选取先天性心脏病患儿150例为研究对象(试验组),根据患儿情况又分为单纯房间隔缺损组(48例)、单纯室间隔缺损组(37例)以及复合组(65例)。选取同期进行健康体检的儿童150例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组儿童血清miR-148b-3p表达水平。采用全自动生化分析仪检测两组儿童血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组儿童血清中肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用超声诊断仪检测左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积指数(LVEDVI)、左心室收缩末期室壁应力(LVESWS)水平。采用Pearson法分析先天性心脏病患儿血清miR-148b-3p表达水平与心功能指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-148b-3p水平对先天性心脏病患儿的早期预测价值。结果:与对照组相比,试验组患儿miR-148b-3p、cTnI、CK-MB、LVEDVI、LVESWS水平显著升高,LVEF显著降低(均P<0.05)。单纯房间隔缺损组和单纯室间隔缺损组患儿血清miR-148b-3p水平显著高于复合组(均P<0.05),但单纯房间隔缺损组患儿血清miR-148b-3p水平与单纯室间隔缺损组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析显示,先天性心脏病患儿血清miR-148b-3p水平与cTnI、CK-MB、LVEDVI、LVESWS呈正相关,与LVEF呈负相关(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-148b-3p水平预测先天性心脏病患儿的曲线下面积为0.873,截断值为1.28,敏感度为81.33%,特异度为85.67%。结论:先天性心脏病患儿血清miR-148b-3p表达水平较高,且与先天性心脏病患儿心功能指标具有相关性,可以作为预测先天性心脏病患儿及评估其病情的参考指标。

微小RNA-199b-3p靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-199b-3p(miR-199b-3p)靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响。方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-199b-3p抑制剂及阴性对照(NC)转染至SW620细胞并分为抑制剂组和NC组,同时以未转染的SW620细胞作对照。采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测3组miR-199b-3p的表达以评价转染效果,MTT法和AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测转染后的增殖活性及凋亡率,QPCR和Western blotting检测各组凋亡相关基因(Bax和caspase-3)及SOX6的mRNA和蛋白水平,构建含有野生型及突变型SOX6-3’UTR的荧光报告基因质粒并采用双荧光素酶报告实验验证miR-199b-3p对SOX6的靶向调控作用。结果 QPCR检测显示,转染48 h后抑制剂组的miR-199b-3p的表达水平为0.526±0.034,低于未转染组的1.009±0.064和NC组的0.960±0.057,差异有统计学意义(P<0.05);与其余两组相比,抑制剂组转染24、48、72 h后的SW620细胞的增殖活性均降低(P<0.05);抑制剂组的凋亡率为(37.533±1.459)%,高于未转染组的(6.101±0.663)%和NC组的(8.753±1.061)%,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制剂组SW620细胞的SOX6、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均高于未转染组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明miR-199b-3p可显著抑制野生型SOX6-3’UTR的荧光荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-199b-3p可靶向调控SOX6的表达,且下调miR-199b-3p表达可抑制SW620细胞的增殖并诱导凋亡,为结肠癌的治疗提供潜在的分子治疗靶点。

微小RNA-10b-3p对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨微小RNA-10b-3p (miR-10b-3p)对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用QPCR检测miR-10b-3p在ESCC TE-1、EC109、KYSE30、KYSE150、KYSE180、KYSE450和KYSE510细胞株中的相对表达量,选取相对表达水平最高和最低的细胞株分别转染miR-10b-3p抑制剂和模拟物,并设转染对照载体的对照组。采用MTS实验、克隆集落形成实验及Transwell趋化小室实验检测miR-10b-3p对ESCC细胞增殖,克隆形成及侵袭、迁移能力的影响。结果 miR-10b-3p在TE-1、EC109、KYSE30、KYSE150、KYSE180、KYSE450以及KYSE510细胞株中的相对表达量分别为0. 14、0. 27、0. 66、0. 10、0. 12、0. 08和0. 78。选取miR-10b-3p相对表达量最低的KYSE450细胞株和相对表达量最高的KYSE510细胞进行后续实验。MTS检测显示,与对照组比较,模拟物组KYSE450细胞的增殖能力显著上调(P<0. 05),抑制剂组KYSE510细胞的增殖能力显著降低(P<0. 05)。克隆集落形成实验显示,模拟物组KYSE450细胞的集落数为(613. 7±41. 1)个,高于对照组的(243. 7±25. 3)个(P <0. 05);抑制剂组KYSE510细胞的集落数为(90. 3±11. 0)个,低于对照组的(247. 0±14. 7)个(P<0. 05)。Transwell小室实验显示,模拟物组穿过迁移小室的KYSE450细胞数为(211. 1±27. 3)个,高于对照组的(151. 7±15. 3)个(P<0. 05);模拟物组穿过侵袭小室的细胞数为(183. 3±15. 5)个,高于对照组的(133. 5±8. 8)个(P<0. 05)。抑制剂组穿过迁移小室的KYSE510细胞数为(50. 0±6. 7)个,低于对照组的(83. 3±12. 9)个(P<0. 05);抑制剂组穿过侵袭小室的KYSE510细胞数为(38. 8±8. 5)个,低于对照组的(66. 7±7. 3)个(P<0. 05)。结论 miR-10b-3p可以促进ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能作为ESCC基因治疗的有效靶点。

特应性皮炎患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3和微小RNA-23b-3p水平检测及意义

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)和微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)水平检测及意义。方法:选取AD患儿165例(AD组)和体检健康儿童160例(对照组)为研究对象。采用荧光定量PCR法检测两组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平。采用AD积分指数(SCORAD)对AD患儿疾病严重程度进行评估,并将AD组患儿分为AD轻度组(65例)、AD中度组(68例)和AD重度组(32例)。比较对照组和AD组以及不同严重程度AD患儿血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平。采用Pearson法分析AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平和SCORAD评分三者间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平检测对中、重度AD的诊断价值。结果:与对照组比较,AD组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平显著降低(均P<0.05)。与AD轻度组比较,AD中度组和AD重度组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平依次降低,SCORAD评分依次升高(均P<0.05)。AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平呈正相关(r=0.404,P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平与SCORAD评分均呈负相关(r=-0.383、-0.366,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断中度AD的曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.753、0.883。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断中度AD的AUC更高(Z=2.177、3.595,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断重度AD的AUC分别为0.794、0.778、0.895。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断重度AD的AUC更高(Z=2.104、2.293,均P<0.05)。结论:AD患儿血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平呈低表达,与病情严重程度有关,有望成为评估儿童AD病情程度的生物标志物。

血清miR-133a/b-3p水平对COPD急性加重患者1年内死亡风险的预测价值

目的探讨血清miR-133a/b-3p表达水平对COPD急性加重(AECOPD)患者1年内死亡风险的预测价值。方法选取2017年1月至2019年1月接受治疗的AECOPD患者108例作为AECOPD组,同期进行体检的健康志愿者100例作为正常对照组,对比其血清miR-133a/b-3p表达水平的差异。1年内死亡患者为死亡组,未死亡患者为存活组。采用单因素、多因素分析AECOPD患者1年内死亡的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-133a/b-3p表达水平对AECOPD患者1年内死亡的早期预测价值。结果AECOPD组患者血清miR-133a-3p、miR-133b-3p的表达水平分别低于正常对照组(P<0.05)。死亡组、存活组患者年龄、APACHEⅡ评分、合并肺性脑病及血清hs-CRP、PCT、WBC、miR-133a-3p、miR-133b-3p水平的差异有统计学意义(P<0.05);性别、COPD病程、BMI、长期家庭氧疗、上1年AECOPD急性发作、呼吸衰竭类型、其他合并症的分布差异无统计学意义(P>0.05)。logistics回归分析发现,APACHEⅡ评分较高,合并肺性脑病,hs-CRP、PCT、WBC水平较高,miR-133a-3p、miR-133b-3p水平较低分别是AECOPD患者1年内死亡的独立危险因素(P<0.05);年龄对AECOPD患者1年内死亡的影响不明显(P>0.05)。ROC曲线显示,血清miR-133a-3p预测AECOPD患者1年内死亡的最佳截断值为0.50,AUC为0.815[95%CI 0.736~0.894],对应的灵敏度、特异度分别为65.85%、74.63%;血清miR-133b-3p预测AECOPD患者1年内死亡的最佳截断值为0.58,AUC为0.762[95%CI 0.672~0.852]对应的灵敏度、特异度分别为63.41%、67.16%。结论血清miR-133a/b-3p表达水平较低是AECOPD患者1年内死亡的独立危险因素,具体miR-133a/b-3p表达水平对AECOPD患者1年内死亡具有早期预测价值。

微RNA-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF)。取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic,miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF-β_(1)。实时荧光定量聚合酶链反应法检测组织和细胞中miR-133a-3p和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用TargetScan数据库通过生物信息分析预测miR-133a-3p与TGF-β_(1)的3′非翻译区(3′-UTR)存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)和突变型(Mt)TGF-β_(1)3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体,分别将用脂质体2000包裹的Wt TGF-β_(1)或Mt TGF-β_(1)报告基因载体与miR-133a-3p mimics或miR-NC共转染入KF细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组,双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞双荧光素酶活性。Western blot检测空白对照组、miR-NC组、miR-133a-3p组KF细胞中TGF-β_(1)、Smad3蛋白的相对表达量。结果瘢痕疙瘩组织中miR-133a-3p相对表达量显著低于正常皮肤组织(t=18.988,P<0.05)。KF细胞中miR-133a-3p相对表达量显著低于NF细胞(t=18.679,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中miR-133a-3p相对表达量显著高于空白对照组和miR-NC组,CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞中miR-133a-3p和CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-133a-3p组细胞凋亡率显著高于空白对照组和miR-NC组,细胞增殖活力显著低于空白对照组和miR-NC组(t=13.912、14.227、-8.020、-6.947,P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞凋亡率、细胞增殖活力比较差异无统计学意义(t=-0.607、0.448,P>0.05)。miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性显著低于miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组(t=-15.729、-19.490、-16.186,P<0.05)。miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性两两比较差异均无统计学意义(t=-0.596、0.847、0.842,P>0.05)。KF细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于NF细胞(t=5.758、9.027,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于miR-NC组(t=-4.913、-8.314,P<0.05)。miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量和细胞增殖活力显著高于miR-133a-3p组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组,细胞凋亡率显著低于miR-133a-3p转染组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组(P<0.05)。miR-133a-3p组与miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量及细胞凋亡率和细胞增殖活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达miR-133a-3p可通过负调控TGF-β_(1)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,促进细胞凋亡,提示miR-133a-3p/TGF-β_(1)通路可能是瘢痕疙瘩治疗的一个新的靶点。

人参皂苷Rh2调控微小RNA-133a-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rh2调控微小RNA(miR)-133a-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)凋亡的影响。方法用浓度为50、100、200 mg/L的人参皂苷Rh2培养KF,未给人参皂苷Rh2的KF记为对照(NC)组;将miR-NC、miR-133a-3p分别转染至KF中记为miR-NC组、miR-133a-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-133a-3p分别转染至KF再用200 mg/L的人参皂苷Rh2处理记为anti-miR-NC+人参皂苷Rh2组、anti-miR-133a-3p+人参皂苷Rh2组。流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-133a-3p表达水平;蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleavedcaspase-3)、β-连环素(β-catenin)表达。结果与对照组相比,50、100、200 mg/L人参皂苷Rh2处理的KF中细胞凋亡率升高[(9.08±0.91)%、(16.28±1.63)%、(23.18±2.32)%比(4.29±0.43)%],miR-133a-3p表达水平升高,β-catenin表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-133a-3p,Cleaved caspase-3表达水平升高,细胞凋亡率升高(P<0.05)。低表达miR-133a-3p部分逆转了人参皂苷Rh2对KF凋亡和β-catenin的影响。结论人参皂苷Rh2可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,其机制可能与miR-133a-3p和Wnt/β-catenin信号通路有关。

妊娠糖尿病患者血清miR130b-3-p、miR181a-5-p表达与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病患者血清微小RNA(miRNA)miR-130b-3p、miR-181a-5p表达与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年8月在北京航天总医院及北京妇产医院诊治的124例妊娠糖尿病患者作为研究组,根据妊娠结局分为良好组和不良组;采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130b-3p、miR-181a-5p表达;采用Pearson法分析血清miR-130b-3p、miR-181a-5p及二者与血脂和血糖的相关性;采用Logistic回归分析妊娠糖尿病患者不良妊娠结局的影响因素。结果 研究组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、miR-130b-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。不良组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、miR-130b-3p相对表达水平高于良好组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于良好组(P<0.05)。根据Pearson相关性分析可知,血清miR-130b-3p与miR-181a-5p相对表达水平呈负相关(P<0.05),血清miR-130b-3p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05),miR-181a-5p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,miR-130b-3p、TC、TG、LDL-C、FBG、FINS高水平,miR-181a-5p低相对表达水平均为妊娠糖尿病不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论 妊娠糖尿病患者血清miR-130b-3p相对表达水平升高,miR-181a-5p相对表达水平降低,二者与妊娠结局密切相关。

温阳通络方基于miR-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的机制研究

目的:探讨温阳通络方基于微小RNA(miR)-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的作用。方法:SD大鼠随机分为温阳通络方组和空白血清组。温阳通络方组大鼠给药剂量为4.05 g·kg^(-1)·d^(–1),2次/d,间隔12 h,连续给药3 d,末次给药后1 h腹主动脉取血分离血清;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验筛选温阳通络方含药血清最佳浓度和干预时间;在人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A中分别转染inhibitor NC、miR-26b-3p inhibitor、mimic NC、miR-26b-3p mimic片段,并用温阳通络方含药血清干预,设置正常关节成纤维样滑膜细胞为对照组,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测MH7A细胞中miR-26b-3p的表达;CCK-8实验检测各组细胞的增殖情况;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭情况。结果:不同浓度温阳通络方含药血清均能上调miR-26b-3p的表达(P<0.05),miR-26b-3p的表达呈浓度依赖性升高。温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。miR-26b-3p过表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05);干扰miR-26b-3p的表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。在干扰miR-26b-3p表达的基础上,温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:温阳通络方通过上调miR-26b-3p的表达抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭。

微小RNA-23b-3p通过靶向TGFBR3促进人心房肌成纤维细胞纤维化相关基因表达

目的:探究微小RNA-23b-3p(mi R-23b-3p)对人心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用及其可能作用靶基因。方法:分离并体外培养房颤患者心耳中原代心房肌成纤维细胞,并用细胞免疫荧光染色实验鉴定;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-23b-3p与潜在靶基因转化生长因子β受体3(TGFBR3) 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用; CCK-8、Ed U染色及Transwell实验检测细胞活力、增殖及迁移能力,RT-qPCR和Western blot法检测TGFBR3及纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达。结果:在人心房肌成纤维细胞中过表达mi R-23b-3p不影响细胞的活力、增殖及迁移能力,但可显著增强细胞中纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达(P <0. 05或P <0. 01)。双萤光素酶报告基因实验显示mi R-23b-3p与TGFBR3 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实mi R-23b-3p可在转录水平抑制TGFBR3表达。过表达mi R-23b-3p和沉默TGFBR3均能显著促进人心房肌成纤维细胞中Smad3激活和纤维化相关基因表达(P <0. 05或P <0. 01)。结论:TGFBR3是mi R-23b-3p的作用靶基因,并介导mi R-23b-3p促进心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。

长链基因间非编码RNA 00963通过靶向微小RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系。将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭。结果与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05)。LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达。干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用。结论干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭。

高危型急性肺血栓栓塞症患者血清miR-34a-3p和miR-106b-5p的表达及意义

目的探讨高危型急性肺血栓栓塞症(APTE)患者血清微小RNA(miR)-34a-3p和miR-106b-5p的表达和意义。方法选取该院2022年2月至2023年2月收治的85例高危型APTE患者作为研究组;选择同期在该院就诊的80例非高危型APTE患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有研究对象血清miR-34a-3p和miR-106b-5p水平。采用Pearson相关分析高危型APTE患者血清中miR-34a-3p与miR-106b-5p水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析高危型APTE发生的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-34a-3p与miR-106b-5p对高危型APTE的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。高危型APTE患者血清miR-34a-3p水平与miR-106b-5p水平呈正相关(r=0.764,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-34a-3p与miR-106b-5p水平升高是发生高危型APTE的保护因素(P<0.05)。血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平单独及二者联合检测诊断高危型APTE的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.772和0.828,二者联合检测诊断高危型APTE的AUC明显大于血清miR-106b-5p单独检测(Z=2.231,P=0.030),与miR-34a-3p单独检测诊断高危型APTE的AUC比较,差异无统计学意义(Z=1.156,P=0.248)。结论高危型APTE患者血清中miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,二者可能对高危型APTE具有较高的临床诊断价值。