乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。

MicroRNA-135在肿瘤中的研究进展

Mircro RNA(mi RNAs)通过与信使RNA(m RNA)的序列互补来降解靶m RNA并抑制蛋白质翻译,在细胞增殖、分化、发育和凋亡等方面起着重要的作用。许多mi RNA可作为原癌基因或抑癌基因,在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。越来越多的研究表明,微mi R-135(mi R-135)与肿瘤的发生发展密切相关,本文主要对近年来mi R-135参与调节肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、转移、耐药和预后等方面的机制作一综述,期望能对肿瘤的早期诊断、治疗和预后判断有所帮助。

微小RNA-135b在结直肠癌发生发展及治疗中的作用研究进展

结直肠癌的发生是一个多基因、多步骤的过程。许多已知基因(结肠腺瘤样息肉基因、磷脂酰肌醇-3-激酶基因、肉瘤基因、P53基因等)的突变都是通过微小RNA-135b(miR-135b)起作用。miR-135b能够通过调控基因的活性,参与许多基因的转录。抑制miR-135b的表达可以同时阻断多个致癌基因的突变,有望成为不引起耐药的抗癌新途径。在血液样本及粪便中筛查miR-135b,有望成为结直肠癌早期筛查的新方法。

高分辨率MRI联合微小RNA-135a-5p、微小RNA-373对宫颈癌的诊断价值研究

目的探讨高分辨率MRI联合微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)、微小RNA-373(miR-373)对宫颈癌的诊断价值。方法选取2018年9月至2020年9月浙江省台州医院进行宫颈病理检查的患者132例,根据病理诊断结果将其分为宫颈癌89例(恶性组)与宫颈癌前病变43例(良性组),所有患者均给予高分辨率MRI检查,记录检查参数并分析诊断价值,采用实时荧光定量(RT-PCR)检测两组患者血清miR-135a-5p、miR-373表达水平,分析高分辨率MRI、miR-135a-5p、miR-373表达水平与宫颈癌的关系,以及单项检测和3项联合检测的诊断价值。结果与良性组相比,恶性组miR-135a-5p、miR-373表达水平较高(均P<0.05)。阳性高危型HPV、鳞癌、低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴血管间隙浸润及深浸润宫颈癌患者miR-135a-5p、miR-373表达水平均高于阴性高危型HPV、腺癌、高与中分化、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴血管间隙浸润及无浸润与浅浸润宫颈癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,与高分辨率MRI、miR-135a-5p、miR-373单项检测相比,3项联合检测对宫颈癌的诊断效能较高(P<0.05)。结论高分辨率MRI可准确显示宫颈癌的征象,miR-135a-5p、miR-373在宫颈癌患者血清中呈异常高表达且与患者临床特征有关,3项联合检测对宫颈癌的诊断价值较高。

微小RNA-135a-5p和Krüppel样因子16在胃腺癌中的表达及靶向关系研究

目的:检测微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)和Krüppel样因子16(KLF16)在胃腺癌中的表达,分析两者的靶向关系。方法:收集胃腺癌并行手术治疗的患者45例,留取术后肿瘤组织和正常胃黏膜组织。选择胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和正常胃细胞株GES-1进行培养及相关实验。基于MGC-803细胞株建立si-KLF16组、miR-135a-5p mimic组,并设立无关序列组。应用免疫组化染色检测KLF16蛋白表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-135a-5p、KLF16 mRNA的表达。采用双荧光素酶报告基因实验,构建含有野生型KLF16的质粒(WT-KLF16)和突变型KLF16的质粒(MT-KLF16),分别与miR-135a-5p mimic、miR-135a-5p空白对照组(NC)进行共转染,验证miR-135a-5p和KLF16的靶向关系。结果:胃腺癌组织中miR-135a-5p表达量明显低于正常胃黏膜组织,KLF16阳性率明显高于正常胃黏膜组织(均P<0.05)。不同肿瘤最大径和浸润深度胃腺癌患者miR-135a-5p相对表达量及KLF16阳性率比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。线性相关分析显示,miR-135a-5p表达与KLF16阳性呈负相关(R=-0.623,P<0.05)。胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901细胞株miR-135a-5p表达明显低于正常胃GES-1细胞株,KLF16 mRNA表达明显高于GES-1细胞株(均P<0.05)。si-KLF16组中miR-135a-5p表达明显高于无关序列组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-135a-5p mimic+WT-KLF16与NC+WT-KLF16、miR-135a-5p mimic+MT-KLF16、NC+MT-KLF16比较,相对荧光素酶活性明显下降(均P<0.05),提示miR-135a-5p和KLF16具有靶向关系。结论:胃腺癌miR-135a-5p低表达,KLF16高表达,它们都参与肿瘤的形成和进展,且具有靶向关系。

基于微小RNA-135b-5p靶向调控瓣状核酸内切酶1探究姜黄素对人卵巢癌细胞顺铂耐药的改善机制

目的 基于微小RNA-135b-5p(miR-135b-5p)靶向调控瓣状核酸内切酶1(FEN1)探究姜黄素对人卵巢癌细胞顺铂耐药的改善机制。方法 取对数生长期人卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP,将细胞分为对照组、顺铂组、姜黄素组、顺铂+姜黄素组、顺铂+姜黄素+阴性对照抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p模拟物组。对照组不予处理,其余各组分别予顺铂和/或姜黄素,后3组细胞采用脂质体转染法分别转染绿色荧光蛋白质粒(pGFP)-阴性对照抑制剂、pGFP-miR-135b-5p抑制剂、pGFP-miR-135b-5p模拟物载体。各组给药处理72 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞miR-135b-5p及FEN1 mRNA表达量;蛋白质印迹法检测各组细胞FEN1蛋白表达;双荧光素酶靶标实验验证miR-135b-5p与FEN1之间的作用关系;噻唑盐比色法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 姜黄素组、顺铂+姜黄素组、顺铂+姜黄素+阴性对照抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p模拟物组miR-135b-5p表达量、增殖抑制率及细胞凋亡率均高于对照组和顺铂组,FEN1 mRNA及蛋白表达量均低于对照组和顺铂组(均P<0.05)。脂质体转染的3组中,顺铂+姜黄素+miR-135b-5p抑制剂组miR-135b-5p表达量、增殖抑制率及细胞凋亡率最低[(0.75±0.10)、(34.399±6.055)%、(17.3±3.1)%],FEN1 mRNA和蛋白表达量最高[(0.77±0.11)、(0.69±0.09)];顺铂+姜黄素+miR-135b-5p模拟物组miR-135b-5p表达量、增殖抑制率及细胞凋亡率最高[(1.68±0.26)、(80.365±10.617)%、(48.7±8.4)%],FEN1 mRNA和蛋白表达量最低[(0.33±0.04)、(0.29±0.04)](均P<0.05)。双荧光素酶靶标实验提示miR-135b-5p靶向FEN1。结论 姜黄素可增强OVCAR-3/DDP对顺铂的敏感性,可能与促进miR-135b-5p的表达从而靶向抑制FEN1的表达相关。

microRNA-135a通过靶向IL-17抑制肝癌细胞增殖的机制

目的探讨microRNA-135a(miR-135a)在肝癌中的表达及其影响细胞增殖的机制。方法收集17肝癌患者和7例正常受试者血液,用ELISA法测定血浆IL-17浓度。将THLE-3人肝永生化细胞分为乱序对照+IL-17 MUT组、乱序对照+IL-17 WT 3'UTR组、miR-135a+IL-17 MUT组和miR-135a+IL-17 WT 3'UTR组,通过荧光素酶报告基因测定实验验证miR-135a可能靶向调控IL-17的表达,进而影响荧光酶的活性。将miR-135a模拟物、空质粒及乱序寡核苷酸转染到原代肝癌细胞中,检测各组IL-17的浓度,并通过MTT测定各组细胞增殖能力。结果肝癌患者血浆IL-17浓度高于正常受试者(P<0.05)。miR-135a靶向IL-173'UTR的序列调控IL-17分泌,miR-135a模拟物和IL-17 WT 3'UTR共转染细胞后荧光素酶的活性减低(P<0.05)。外源miR-135a模拟物转染原代肝癌细胞可抑制肝癌细胞中IL-17分泌(P<0.05)及肝癌细胞增殖(P<0.05)。结论与正常人相比,肝癌患者的血浆IL-17升高。miR-135a调控IL-17的分泌。miR-135a高表达可能通过抑制IL-17表达,从而抑制肝癌的发展。

环状RNA CDR1as靶向抑制微小RNA-135a-5p调控人肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(circCDR1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法体外培养HPASMC,缺氧诱导后干扰circCDR1as表达、抑制或过表达微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janus激酶2(JAK2)。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中circCDR1as、miR-135a-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。组间差异比较采用t检验。结果缺氧组circCDR1as表达水平和磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值高于常氧组(1.98±0.07比1.01±0.05、0.62±0.06比0.18±0.04、0.56±0.05比0.15±0.03),miR-135a-5p表达水平低于常氧组(0.52±0.05比1.00±0.04),差异有统计学意义(t=27.620、14.946、17.223、18.362,P<0.05)。si-circCDR1as组circCDR1as表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值和细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数低于si-NC组(0.41±0.05比1.02±0.06、0.41±0.05比0.61±0.05、0.38±0.03比0.54±0.04、0.42±0.04比0.73±0.06、75.64±17.95比145.38±26.42、68.96±16.82比121.05±24.80),miR-135a-5p表达水平高于si-NC组(1.73±0.06比1.03±0.05),差异有统计学意义(t=19.131、6.928、7.838、10.530、5.348、4.258、21.954,P<0.05)。结论circCDR1as通过靶向抑制miR-135a-5p表达激活JAK2/STAT3信号通路,促进缺氧诱导的HPASMC增殖、迁移和侵袭。

血清lncRNA UCA1、miR-135b-5p水平与急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化及预后的关系

目的探讨血清长链非编码RNA尿路上皮癌胚抗原1(lncRNA UCA1)及血清微小RNA-135b-5p(miR-135b-5p)水平与急性脑梗死(ACI)患者颈动脉粥样硬化及预后的关系。方法选取2019年2月至2023年5月该院收治的160例ACI患者为ACI组,经颈动脉彩色普勒超声检查有无颈动脉粥样硬化,将其分为有颈动脉粥样硬化组(80例)及无颈动脉粥样硬化组(80例)。根据改良Rankin量表将其分为预后不良组(76例),预后良好组(84例)。另选取同期该院160例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测ACI患者血清中lncRNA UCA1、miR-135b-5p水平,多因素Logistic回归分析ACI患者预后的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA UCA1、miR-135b-5p水平对ACI患者预后不良的预测价值。结果ACI组血清lncRNA UCA1水平高于对照组,血清miR-135b-5p水平低于对照组(P<0.05);ACI患者血清lncRNA UCA1水平与miR-135b-5p呈负相关(r=-0.417,P<0.05);有颈动脉粥样硬化组血清lncRNA UCA1水平高于无颈动脉粥样硬化组,血清miR-135b-5p水平低于无颈动脉粥样硬化组(P<0.05);预后良好组血清lncRNA UCA1水平低于预后不良组,血清miR-135b-5p水平高于预后不良组(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,血清lncRNA UCA1、LDL-C水平及美国国立卫生研究院卒中量表评分是ACI患者预后的危险因素,血清miR-135b-5p水平是ACI患者预后的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析发现,血清lncRNA UCA1、miR-135b-5p水平联合预测ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)大于血清lncRNA UCA1和miR-135b-5p单独预测的AUC(Z=3.579、2.258,均P<0.05)。结论血清lncRNA UCA1、miR-135b-5p与ACI患者颈动脉粥样硬化及预后密切相关,可将二者作为ACI预后评估的辅助指标。

结肠癌组织microRNA-135a表达增高的临床意义与预后分析

目的 miRNA-135a作为miRNA-135家族的重要组成成员,其与多种肿瘤发生发展密切相关。但关于miRNA-135a的表达异常对结肠癌的临床意义及预后判断的研究较少。本研究旨在明确结肠癌组织miRNA-135a相对表达量与结肠癌患者临床病理因素的相关性及对患者生存预后的影响。方法收集2009-01-01-2009-12-31在哈尔滨医科大学附属第四医院行手术切除的结肠癌组织样本及距离肿瘤边缘5cm处癌旁黏膜组织样本共47对。在47对结肠癌样本中应用逆转录实时定量聚合酶链反应,检测miRNA-135a相对表达量,进一步分析其表达变化与结肠癌临床病理特征的相关性。并运用Kaplan-Meier生存曲线进行预后分析。结果 miRNA-135a在结肠癌组织中表达较癌旁组织显著升高,P=0.03。miRNA-135a表达量变化与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤分化程度、浸润深度及远处转移均无关,P值均>0.05。但在淋巴结转移组miRNA-135a表达明显升高,均值为0.49±0.25,而无淋巴结转移组为0.35±0.17,两组比较差异有统计学意义,P=0.03。在临床Ⅲ/Ⅳ期的患者中miRNA-135a表达较Ⅰ/Ⅱ期的患者显著升高,两组比较差异有统计学意义,P=0.04。Logistic二项回归分析显示,miRNA-135a高表达组增加了结肠癌患者淋巴结转移的风险,P=0.03。miRNA-135a高表达同时可增加结肠癌疾病进展(TNM分期)的风险,P=0.04。生存分析表明,21例miRNA-135a高表达组的中位生存期为(41±9.73)个月,26例miRNA-135a低表达组的中位生存期为(58±6.16)个月,两组比较差异有统计学意义,P=0.021。结论 miRNA-135a表达量增高与结肠癌疾病进展及不良预后正相关。miRNA-135a有望成为判断结肠癌预后的潜在靶点。

微小RNA-135a通过抑制其靶基因Sp3的表达促进大鼠胰腺腺泡细胞凋亡

目的探讨微小RNA135a（miR-135a）是否通过抑制其靶基因Sp3基因的表达促进大鼠急性水肿性胰腺炎中胰腺腺泡细胞（AR42J）凋亡。方法设计miR-135a模拟物及反义寡核苷酸链，并通过慢病毒转染AR42J细胞，72h后于荧光显微镜下观察AR42J细胞荧光表达量，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ．PCR）法检测转染后miR-135a的表达量。使用50陆∥L重组大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导AR42J细胞建立体外急性水肿性胰腺炎模型（AEP），淀粉酶试剂盒检测培养基上清淀粉酶含量，Westernblot法检测活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达量，流式细胞术检测AR42J细胞的凋亡率。构建Sp3野生型（WT）和突变型（Mut）3’非编码区（3’UTR）-荧光素酶报告载体，通过荧光素酶报告系统检测miR-135a对Sp3基因野生型及突变型3’UTR荧光素酶活性的影响，并通过FQ—PCR和Westernblot法检测转染miR-135a模拟物及反义寡核昔酸链后Sp3基因mRNA及蛋白表达量变化。结果转染miR-135a模拟物组较转染空病毒组miR-135a表达量升高（5．84±0．16）倍，转染miR-135a反义寡核苷酸链组miR-135a表达量是转染空病毒组的（0．54±0．01）倍，差异均有统计学意义（P〈0．05）。建立急性水肿性胰腺炎模型后，转染miR-135a模拟物组AR42J细胞凋亡率[（40．63±3．24）％]较转染空病毒组[（25．40±0．79）％]明显升高，转染miR-135a反义寡核苷酸链组AR42J细胞凋亡率[（15．10±0．10）％]较空病毒组明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。生物信息学软件及荧光素酶定量实验结果表明Sp3是mill-135a的靶基因，转染miR-135a模拟物组s03mRNA及蛋白质表达量较转染空病毒组明显降低，转染miR-135a反义寡核苷酸链组Sp3mRNA及蛋白质表达量较空病毒组明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-135a可能能够通过抑制其靶基因Sp3基因的表达促进大鼠体外急性水肿性胰腺炎中AR42J细胞的凋亡。

微小RNA-135a在消化系统恶性肿瘤中的研究进展

微小RNAs（miRNAs，miR）是一类内源性、非编码的单链RNAs，在恶性肿瘤的演进过程中可发挥癌基因或抑癌基因的作用。研究结果表明，miRNA在消化系统肿瘤的发生、发展过程中均发挥着重要作用。目前，miR-135a在消化系统肿瘤发生、发展中的作用已引起广泛关注。研究结果证实，miR-135a可通过调控其靶基因的表达而影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移等多个关键生物学过程。本文主要就miR-135a在消化系统肿瘤中的最新研究进展予以综述。

寻常型银屑病患者血清microRNA-135a水平与Th1/Th2平衡的关系

【目的】分析寻常型银屑病患者血清微小RNA-135a(microRNA-135a,miR-135a)表达水平与Th1/Th2 平衡的关系。【方法】将2017 年5 月至2018 年6 月在本院诊治的63 例寻常型银屑病患者作为病例组,同期60 例健康者作为对照组,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测两组受试者血清miR-135a 相对表达量,采用银屑病皮损面积和严重程度评分(psoriasis area and severity index,PASI)评估病例组患者病情严重程度,采用流式细胞术检测外周血CD4+ T 细胞中Th1、Th2 细胞比例,ELISA 法检测血清干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)及白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)水平,分析病例组血清miR-135a 表达水平与PASI 评分、Th1/Th2 的关系。【结果】病例组血清miR-135a 相对表达量低于对照组,与PASI 评分呈负相关关系(r=-0.714,P=0.005);病例组Th1 细胞比例及血清INF-γ、IL-2 水平高于对照组,Th2 细胞比例及血清IL-4、IL-10 水平低于对照组,Th1/Th2 水平高于对照组(P<0.05);病例组血清miR-135a 表达水平与Th1/Th2 水平呈负相关关系(r=-0.675,P=0.013)。【结论】寻常型银屑病患者血清miR-135a 表达降低,与Th1/Th2 失衡有关,可能通过影响Th1/Th2 平衡,参与病情发生及发展过程。

沉默miR-135a-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制

目的 探究沉默微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,重点分析miR-135a-5p在宫颈癌HeLa细胞中的作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞经培育后分为对照组、过表达组、沉默组,对照组不做处理,过表达组转染miR-135a-5p mimics上调载体,沉默组转染miR-135a-5p inhibitor下调载体。使用实时荧光定量法检测每组宫颈癌HeLa细胞中miR-135a-5p表达量;四甲基偶氮唑盐法检测每组宫颈癌HeLa细胞增殖水平;Transwell小室法检测每组宫颈癌HeLa细胞侵袭水平。结果 与对照组比较,过表达组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、miR-135a-5p、宫颈癌HeLa细胞迁移数、侵袭数明显升高,宫颈癌HeLa细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);与对照组比较,沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低,凋亡能力明显升高(P<0.05);与过表达组比较,沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低,凋亡能力明显升高(P<0.05)。结论 miR-135a-5p作为一种促癌RNA,临床可通过沉默miR-135a-5p表达量来改变宫颈癌的治疗效率,为治疗宫颈癌提供借鉴指导,其可在宫颈癌诊断效能中起到重要意义。

胃癌组织中miR-135a-5p、CDCA8表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨胃癌组织中微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)、细胞分裂周期相关基因8(CDCA8)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集胃癌组织、正常胃组织各82份。实时荧光定量PCR法检测组织中miR-135a-5p、CDCA8 mRNA表达,免疫组化法检测组织中CDCA8蛋白表达。术后随访,统计患者3年的生存情况。Pearson相关法分析胃癌组织中miR-135a-5p与CDCA8 mRNA表达的关系;用Kaplan-Meier法分析miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者生存期、3年总生存率的关系;Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果胃癌组织中miR-135a-5p表达低于正常胃组织(P<0.05),CDCA8 mRNA表达及蛋白阳性表达率均高于正常胃组织(P均<0.05)。基于ENCORI数据库预测miR-135a-5p与CDCA8的关系,结果显示,miR-135a-5p与CDCA8存在结合位点;胃癌组织中miR-135a-5p与CDCA8 mRNA表达呈负相关(r=-0.580,P<0.05)。胃癌组织中miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤最大径及分化程度无关(P均>0.05),与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关(P均<0.05)。随访3年,生存59例。miR-135a-5p低表达者生存时间及3年总生存率低于miR-135a-5p高表达者(P均<0.05);CDCA8蛋白阳性表达者生存时间及3年总生存率低于CDCA8蛋白阴性表达者(P均<0.05)。淋巴结转移、miR-135a-5p低表达及CDCA8蛋白阳性表达是胃癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论胃癌组织中miR-135a-5p低表达,CDCA8高表达;二者与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关,可作为评估胃癌预后的指标。

微小RNA-135a-5p对胰腺癌增殖、迁移和耐药的影响

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-135a-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移和对顺铂化疗敏感性的影响。方法采用聚合酶链反应检测胰腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织,正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人源胰腺癌Panc1和AsPc-1细胞中miR-135a-5p的表达;采用脂质体将miR-135a-5p mimic瞬时转染至Panc1和AsPc-1细胞中,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验和划痕实验检测各组细胞增殖能力和迁移能力;用不同浓度梯度的顺铂处理Panc1和AsPc-1细胞,酶标仪检测各组细胞吸光度值变化,以比较各组细胞顺铂化疗敏感性;使用在线软件预测miR-135a-5p下游靶基因,并使用双荧光素酶报告基因系统进行验证;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞支链氨基酸转氨酶1(BCAT1)的表达水平。应用SPSS 18.0统计软件分析,计量数据以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较使用单因素方差分析。结果胰腺癌组织中miR-135a-5p的表达显著低于癌旁组织(0.23±0.08比1.03±0.18),人源胰腺癌Panc1和AsPc-1细胞中miR-135a-5p的表达显著低于正常胰腺导管上皮细胞HPDE(0.30±0.13,0.56±0.09比0.97±0.12,P<0.05);miR-135a-5p mimic组Panc1和AsPc-1细胞增殖能力和迁移能力受到明显抑制(P<0.05),细胞中BCAT1蛋白表达水平明显降低,双荧光素酶报告基因实验证实miR-135a-5p可靶向调控BCAT1基因的表达。miR-135a-5p mimic组Panc1细胞对顺铂化疗敏感性明显提高(P<0.05)。Panc1细胞共转染miR-135a-5p mimic和BCAT1过表达载体,可部分逆转miR-135a-5p上调介导的细胞增殖、迁移能力减弱和对顺铂化疗敏感性的增加。结论miR-135a-5p在胰腺癌中低表达,上调miR-135a-5p可通过靶向BCAT1基因抑制胰腺癌细胞增殖、迁移,增加顺铂化疗敏感性。

微小RNA-135a通过Notch通路调控小儿肝母细胞瘤细胞增殖的机制

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-135a通过Notch通路调控小儿肝母细胞瘤细胞增殖和增殖的影响。方法将传代的肝母细胞瘤细胞分为两组：A组：PEF miR-135a和PSV2neo共转染组，B组：PEE和PSV2neo共转染组，取正常小儿肝脏细胞作为C组。A组为实验组，B、C两组为阳性对照组和阴性对照组。采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测miR-135a在两组肝母细胞瘤细胞中的表达，采用流式细胞法检测过表达的miR-135a对肝母细胞瘤细胞凋亡的影响，利用噻唑蓝（MTT）法及碱性磷酸酶（ALP）法检测观察两组细胞的增殖和增殖，Western blot检测两组细胞中Jagged1和Notch1蛋白的表达水平。结果Real-time PCR显示miR-135a在肝母细胞瘤细胞中的表达较正常小儿肝脏细胞明显下调（P＝0.009）；成功构建PEF-miR-135a真核表达载体，Real-time PCR显示：A组细胞miR-135a的表达明显上调（P＝0.003）。膜联蛋白V（Annexin V）-异硫氰酸荧光素（FITC）检测显示miR-135a过表达能够显著抑制肝母细胞瘤细胞的凋亡率（P＝0.030）。Western blot检测显示miR-135a过表达可以显著下调Jagged1和Notch1蛋白的表达水平。结论miR-135a过表达可能通过下调Notch通路的表达来抑制小儿肝母细胞瘤细胞的增殖。

微小RNA-135a抑制骨肉瘤干细胞的迁移、侵袭和自我更新

目的探讨微小RNA(miR)-135a对骨肉瘤干细胞(OSCs)迁移、侵袭和自我更新的影响。方法微球体筛选移植瘤原代细胞的OSCs(P-OSCs)和Saos-2的OSCs(S-OSCs)。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测分化群(CD)CD133、CD44、CD24和BMI1的转录水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CD133、CD44、CD24、BMI1和B细胞淋巴瘤2(bcl-2)的蛋白水平。构建miR-135a过表达的P-OSCs或S-OSCs为miR-135a组,相应的阴性病毒转染P-OSCs或S-OSCs为对照组(NC)。划痕、Transwell和球体形成实验分别检测细胞的迁移、侵袭和自我更新能力。采用GraphPad Prism 8.4.2进行分析。结果miR-135a组P-OSCs和S-OSCs的伤口愈合率[(46.33±11.25)%比(73.46±2.24)%和(31.25±2.61)%比(47.20±1.94)%,t=3.346、8.489,均P<0.05]、穿膜细胞数[(287.00±34.29)个比(401.33±14.66)个和(255.67±17.02)个比(574.67±31.58)个,t=4.336、12.570,均P<0.05]、成球率[(1.89±0.44)%比(3.72±0.21)%和(1.57±0.17)%比(2.65±0.05)%,t=5.360、6.789,均P<0.01]和球体直径均低于NC组[(97.21±8.89)μm比(184.91±15.32)μm和(90.68±7.02)μm比(163.75±14.14)μm,t=7.003、6.546,均P<0.01]。CD44和bcl-2蛋白在骨肉瘤组织中表达高于骨组织(分别为0.87±0.11比0.46±0.08和1.96±0.69比0.41±0.13,t=4.286、3.126,均P<0.05),细胞中的表达趋势与组织一致。miR-135a组P-OSCs和S-OSCs中CD44(0.68±0.02比1.02±0.06和0.29±0.01比1.03±0.01,t=9.311、90.630)和bcl-2(0.46±0.01比0.95±0.01和0.41±0.02比0.84±0.01,t=60.010、33.310)的蛋白表达量低于NC组,均P<0.01。结论miR-135能够通过抑制CD44和bcl-2抑制OSCs的迁移、侵袭和自我更新。

miR-135a调节Treg/Th17免疫平衡参与变应性鼻炎模型小鼠发病及机制探讨

目的:探究微小RNA(miR)-135a调节Treg/Th17免疫平衡参与变应性鼻炎(AR)的作用机制。方法:利用0.5 mg/ml卵清蛋白和20 mg/ml氢氧化铝生理盐水溶液构建AR模型。32只AR小鼠分为AR组和AR+miR-135a mimic组(n=16),16只健康小鼠作为对照组。通过腹腔注射miR-135a mimic以提高miR-135a的水平。比较各组血清IgE和IgG、鼻黏膜损伤情况、外周血Th17/Treg、miR-135a和GATA3蛋白表达量。通过双荧光素酶报告实验验证miR-135a和GATA3的靶向关系。结果:与对照组比较,AR组IgE水平、鼻黏膜损伤程度、Th17比例和GATA3蛋白水平显著升高,而miR-135a、Treg比例、Treg/Th17显著降低(P<0.05)。AR+miR-135a mimic组IgE水平、鼻黏膜损伤程度、Th17比例和GATA3蛋白水平显著低于AR组,而miR-135a、Treg比例、Treg/Th17显著高于AR组(P<0.05)。miR-135a能够与GATA3靶向结合(P<0.05)。结论:miR-135a可能通过使AR模型小鼠Th17/Treg平衡从而缓解AR病情。