艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎疗效及对患者血清微小RNA-141和微小RNA-335-5p表达的影响

目的:观察艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎(RA)的疗效及对患者血清微小RNA-141(miR-141)和miR-335-5p表达的影响。方法:将难治性RA患者80例随机分为甲氨蝶呤组(单纯甲氨蝶呤治疗,40例)和联合艾拉莫德组(艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗,40例),均治疗3个月。比较两组临床疗效、免疫功能指标、骨代谢指标、炎症因子水平、症状改善情况以及miR-141和miR-335-5p表达水平。记录治疗期间不良反应发生情况。结果:联合艾拉莫德组总有效率高于甲氨蝶呤组(P<0.05)。两组血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、类风湿因子(RF)、分泌型糖蛋白-3α(Wnt-3α)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-141水平,以及28个关节疾病活动度(DAS28)评分、关节压痛指数、关节肿胀指数较治疗前降低,且联合艾拉莫德组低于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。血清miR-335-5p、骨碱性磷酸酶(B-ALP)水平较治疗前升高,且联合艾拉莫德组高于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。晨僵时间较治疗前缩短,且联合艾拉莫德组短于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。治疗期间,联合艾拉莫德组与甲氨蝶呤组总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:相较于单纯甲氨蝶呤治疗,艾拉莫德联合甲氨蝶呤可进一步改善难治性RA患者免疫功能,改善相关细胞因子水平及炎症反应,缓解患者症状,同时具有良好安全性。艾拉莫德的治疗作用可能与调控血清miR-141、miR-335-5p水平有关。

脐带血浆微小RNA-141检测对新生儿早发型败血症的鉴别诊断价值

目的 分析脐带血微小RNA(miR)-141检测对新生儿早发型败血症(EOS)的诊断价值。方法 回顾性分析2021年1月1日—12月31日宝鸡市妇幼保健院由围产期发热母体分娩的568例新生儿,根据EOS诊断将新生儿分为EOS组(n=56)及非EOS组(n=484),剔除28例。采用实时聚合酶链反应检测脐带血miR-141水平。所有EOS患儿至少进行为期28 d的随访研究。结果 EOS组新生儿脐带血miR-141水平显著低于非EOS组[0.519(0.329,0.651)对0.920(0.712,1.264),Z=-12.483,P<0.001]。多因素logistic回归分析显示,产前母体白细胞计数(WBC)升高(P=0.041)、B族溶血链球菌感染(P=0.001)、产时体温峰值高(P=0.002)以及脐带血miR-141降低(P<0.001)都与EOS风险独立相关。经受试者工作特征曲线分析,脐带血miR-141鉴别诊断EOS的曲线下面积(AUC)[0.877(95%CI:0.828~0.927)]高于新生儿血清降钙素原[0.631(95%CI:0.554~0.708)]。且产前母体WBC联合脐带血miR-141鉴别诊断EOS的AUC为0.888(95%CI:0.841~0.936),较产前母体WBC[0.690(95%CI:0.620~0.760)]单独鉴别诊断价值更优(Z=-1.814,P=0.013)。结论 脐带血miR-141可能是EOS有用的潜在诊断和预后生物标志物。

长链非编码RNA YAF2-AS1通过调控微小RNA-141-3p表达抑制肝星状细胞活化实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)YAF2-AS1在肝星状细胞活化中的作用及可能的分子机制。方法:采用基因表达数据库(GEO)分析YAF2-AS1在肝纤维化组织和正常肝组织中的表达。用YAF2-AS1质粒转染人肝星状细胞LX-2细胞并设为YAF2-AS1组,以转染阴性对照质粒为对照组。采用CCK-8实验检测LX-2细胞增殖。采用流式细胞术检测LX-2细胞周期分布和活性氧(ROS)含量。采用lncRMap软件和双荧光素酶活性实验验证YAF2-AS1与miR-141-3p的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p表达。采用Western blot检测蛋白磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)信号通路中PTEN、p-AKT蛋白以及肝纤维化标志物[α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβR2)]的表达。结果:与正常肝组织比较,肝纤维化组织YAF2-AS1表达水平降低(P<0.01)。与对照组比较,YAF2-AS1组LX-2细胞增殖活性被抑制(P<0.05);G_(0)/G_(1)期LX-2细胞比例升高(P<0.01),S期和G_(2)/M期LX-2细胞比例降低(均P<0.05);LX-2细胞ROS含量升高(P<0.01)。miR-141-3p是YAF2-AS1的靶基因(P<0.01)。与对照组比较,YAF2-AS1组LX-2细胞miR-141-3p表达降低(P<0.01);PTEN蛋白表达增加,p-AKT、α-SMA、CollagenⅠ、TGFβR2蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:YAF2-AS1在肝纤维化组织中表达下调,过表达YAF2-AS1通过降低miR-141-3p表达抑制肝星状细胞的活化。

MicroRNA-141靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响

目的:探讨微小RNA-141(miRNA-141)靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响。方法:乳腺癌T47D细胞分别转染miRNA-141模拟物(mimic)和阴性对照序列(NC),作为miRNA-141组和NC组,并设立未转染空白对照组,采用real-time PCR法检测细胞中miRNA-141的含量;MTT法与荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法分别检测细胞活力和活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测胞质接头蛋白Keap1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)的表达;双萤光素酶实验检测miRNA-141与Keap1的关系。结果:转染miRNA-141 mimic后,miRNA-141组的miRNA-141表达量明显增高,细胞活力、ROS水平和Keap1蛋白表达均下降,而细胞核Nrf2蛋白SOD2和GPx1表达升高(P<0.05);双萤光素酶实验结果显示Keap1为miRNA-141的靶基因。结论:miRNA-141可能通过靶向负调控Keap1激活Nrf2/ARE信号通路,诱导抗氧化酶的表达,以降低细胞氧化应激水平,从而抑制乳腺癌细胞的活力。

microRNA-141在结肠癌中的表达分析研究

目的分析microRNA141(miR-141)在结肠癌组织中的表达及意义。方法采用荧光定量PCR(SYBR Green)法检测48例结肠癌组织和对应癌旁正常组织中miR-141的表达。结果 miR-141在结肠癌组织中的相对表达量为5.19±0.52,与对应癌旁正常组织1.01±0.13比较差异有统计学意义(P<0.05);随着结肠癌分化程度的降低结肠癌组织中miR-141的表达增高;miR-141在淋巴结转移组的相对表达量为6.05±0.14,在淋巴结无转移组中为4.30±0.23,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-141高表达可能与结肠癌的分化程度和淋巴结有无转移有关。miR-141的出现为结肠癌的研究提供了新的切入点。

血清microRNA-141在结肠癌中的表达和临床意义

目的探讨microRNA-141(miR-141)在结肠癌患者血清中的表达及意义。方法用荧光定量PCR(SYBR Green法)检测60例结肠癌患者和60例健康对照组血清中miR-141的表达。结果 miR-141在结肠癌患者血清中的相对表达量为3.29±0.52,与健康对照组的1.02±0.23相比,显著升高(t=11.34,P<0.05);随着结肠癌分化程度的降低,血清miR-141的表达增高;血清miR-141在淋巴结转移组的相对表达量为4.45±0.32,在无淋巴结转移组为2.39±0.23,差异有统计学意义(t=2.34,P<0.05);结肠癌术后血清miR-141表达明显下降(t=8.53,P<0.01)。结论 miR-141在结肠癌血清中高表达,且与结肠癌分化程度和淋巴结有无转移有关。有望作为一种新的生物标志物用于结肠癌辅助诊断。

微小RNA-141-3p在脑出血患者血清中的表达及其作用机制

目的分析微小RNA-141-3p(miR-141-3p)在脑出血(ICH)患者中的表达水平,并探讨miR-141-3p对大鼠脑出血损伤的作用及其机制。方法以40例脑出血患者和40例体检健康对照者为研究对象,采用Real-time PCR方法检测血清中miR-141-3p的含量。采用生物信息学预测miR-141-3p的靶标基因,双荧光素酶报告分析验证miR-141-3p对核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的调控作用。在大鼠脑出血模型侧脑室注射miR-141-3p激动剂(agonist)或者激动剂对照(agonist NC),治疗7 d后进行神经功能评分。麻醉处死大鼠后取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变。干湿重法测定脑组织含水量,并采用Real-time PCR测定miR-141-3p和NLRP3的表达,通过Western blotting方法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-18的表达。结果与健康对照组(0.520±0.028)相比,脑出血患者血清中miR-141-3p的表达水平(0.068±0.038)显著下调(t=15.93,P<0.001),且与血肿周围水肿严重程度成负相关(r=-0.8948,-0.9434~-0.8087,P<0.001)。miR-141-3p靶向调控NLRP3基因表达。miR-141-3p的表达水平在miR-141-3p agonist组中明显高于agonist NC组(P<0.001),炎症小体NLRP3和炎症因子IL-1β、IL-6和IL-18表达水平明显低于agonist NC组(P<0.001)。与agonist NC组相比,agonist组miR-141-3p在ICH术后7 d脑水肿减轻,神经功能评分明显降低(P<0.001)。HE染色结果表明,ICH大鼠注射miR-141-3p激动剂后血肿周围水肿明显缩小。结论miR-141-3p通过靶向NLRP3降低炎症反应,减轻对脑出血后血肿周围脑组织的损伤。

微RNA-141靶向Dlx5基因对骨形态发生蛋白2诱导人主动脉瓣钙化的调控作用

目的探讨miRNA-141对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导人主动脉瓣钙化的调控作用及机制。方法收集24例人退行性主动脉瓣,用qRT-PCR及蛋白质印迹法检测miRNA-141和BMP-2的mRNA及蛋白表达水平。在人主动脉瓣膜间质细胞(HAVIC)中上/下调miRNA-141表达,通过Von Kossa染色比较细胞钙化,并比较远端缺失同源盒5(Dlx5)mRNA和BMP-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证Dlx5是否为miRNA-141的靶基因。在主动脉瓣钙化小鼠和Dlx5基因敲除主动脉瓣钙化小鼠中,上/下调miRNA-141表达,通过Von Kossa染色比较主动脉瓣钙化,并检测BMP-2蛋白表达。结果与正常主动脉瓣膜组织相比,人退行性主动脉瓣miRNA-141的表达降低(1.00±0.02 vs 0.35±0.06,P=0.01),BMP-2的mRNA及蛋白表达增加(P均=0.01)。在HAVIC中,上调/下调miRNA-141可抑制/促进钙化(P=0.02或P=0.01),并降低/升高Dlx5 mRNA表达(P均=0.01)及BMP-2蛋白的表达(P=0.02或P=0.01)。双荧光素酶报告基因实验验证了Dlx5为miRNA-141的靶基因。上调/下调主动脉瓣钙化小鼠miRNA-141可抑制/促进钙化(P均=0.01),并降低/升高Dlx5、BMP-2 mRNA及蛋白的表达(P均<0.05);Dlx5基因敲除小鼠中,上/下调miRNA-141不影响瓣膜钙化和BMP-2的表达。结论miRNA-141靶向Dlx5基因抑制BMP-2蛋白诱导的人主动脉瓣钙化。

微小RNA-141对小鼠肝癌细胞合成高迁移率族蛋白B1的调控作用

目的:探讨微小RNA-141(miR-141)对小鼠肝癌细胞株hepal-6高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达的调控作用。方法:将小鼠肝癌细胞株hepal-6分为miR-141拟似物转染组、miR-141拟似物转染对照组、miR-141抑制剂转染组、miR-141抑制剂转染对照组。分别用脂质体lipofectamine 2000将miR-141转染hepal-6细胞。用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-141和HMGB1 mRNA表达,然后用Western印迹检测HMGB1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因检测miR-141对靶基因HMGB1的调控作用。结果:与相应对照组比较,miR-141拟似物转染组中miR-141表达水平上调,而miR-141抑制剂转染组中miR-141表达水平下调。同时,与相应对照组比较,miR-141拟似物转染组中HMGB1 mRNA和蛋白表达明显下调,而miR-141抑制剂转染组中HMGB1 mRNA和蛋白表达均明显上调。双荧光素酶报告基因分析表明miR-141能够作用于HMGB1基因的3'-UTR。结论:miR-141可以作用于HMGB1基因的3'-UTR,在转录后水平可上调HMGB1蛋白的表达,HMGB1可能是miR-141直接调控的靶基因。

微小RNA-141和Yes相关蛋白1在胃癌组织中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的:探究微小RNA-141(miR-141)和Yes相关蛋白1(YAP1)在胃癌组织中的表达情况,同时分析它们对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法:选择行胃癌手术的40例患者为研究对象,取手术切除的胃癌组织及癌旁组织,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-141表达,采用免疫组化检测YAP1表达。分析miR-14、YAP1表达与胃癌患者临床病理特征的相关性。分别使用miR-141和YAP1对胃癌SGC-7901细胞系进行干预,分析它们对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。结果:胃癌组织中miR-141表达水平低于癌旁组织,YAP1蛋白表达水平高于癌旁组织(均P<0.05)。miR-141表达水平与胃癌患者组织分化程度及TNM分期存在明显相关性(均P<0.05)。YAP1表达水平与胃癌患者TNM分期、肿瘤直径以及组织分化程度相关(均P<0.05)。在24、48、72 h三个时间点,与阴性对照组比较,转染miR-141模拟物后,胃癌SGC-7901细胞活力出现明显降低,而转染miR-141抑制剂后胃癌SGC-7901细胞活力出现明显升高(均P<0.05)。在24、48、72 h三个时间点,与阴性对照组比较,转染YAP1沉默物siRNA YAP1的胃癌SGC-7901细胞活力出现明显降低,细胞迁移和侵袭能力明显下降(均P<0.05)。结论:胃癌组织中miR-141低表达,YAP1高表达,且两者表达水平同胃癌SGC-7901细胞活性密切相关,可以考虑将miR-141和YAP1作为胃癌治疗的新靶点。

微小RNA-141-3p靶向调控含CUE结构域蛋白2基因对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响

目的 探讨微小RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至2019年12月,从美国ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 雨蛙素干预处理后AR42J细胞中miR-141-3p的表达水平显著升高[(2.43±0.24)比(1.00±0.09)],CUEDC2的表达水平显著降低。miR-141-3p靶向负性调控CUEDC2表达。与转anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(136.54±14.58)ng/L比(226.48±20.54)ng/L]和IL-6[(115.89±11.65)ng/L比(193.47±18.63)ng/L]的分泌显著降低;与转染pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(158.74±15.32)ng/L比(236.87±18.66)ng/L]和IL-6[(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L]的分泌显著降低;转染si-CUEDC2可逆转转染anti-miR-141-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论 抑制miR-141-3p通过靶向CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。

微小RNA-141靶向表皮生长因子受体调控乳腺癌上皮间质转化的作用机制研究

目的通过生物信息学筛选并探讨微小RNA-141(miR-141)、表皮生长因子受体(EGFR)在乳腺癌细胞中的表达水平及其对上皮间质转化、细胞迁移以及侵袭的影响。方法应用微阵列分析筛选差异表达的基因;采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)和基因的蛋白质-蛋白质相互作用网络找出乳腺癌的关键基因;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和细胞中的miR-141和EGFR表达;应用Targetscan和Miranda预测miR-141与EGFR的靶标关系,并通过双荧光素酶报告基因检测验证二者之间的靶向关系;使用Transwell实验测定评估细胞迁移能力;通过CCK-8法测定细胞活力;采用免疫印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果基因表达热图及WGCNA分析结果显示,EGFR在肿瘤组织中显著高表达。经分子生物学验证乳腺癌组织和细胞中miR-141的表达下调,而EGFR的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测发现EGFR是miR-141的靶基因,在乳腺癌细胞中受miR-141表达的调控。细胞实验显示,miR-141过表达组可以抑制乳腺癌细胞迁移和增殖,而EGFR组则呈现出相反的结果,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-141过表达能够促进E-cadherin表达,抑制Vimentin的表达,差异有统计学意义(P<0.05),提示miR-141过表达能抑制肿瘤细胞的上皮间质转化的进程。结论miR-141通过靶向EGFR抑制乳腺癌细胞增殖并调节上皮间质转化的进展。

肺癌患者血清中miR-141-3p,NRSN2表达水平与骨转移的相关性研究

目的探讨微小RNA-141-3p(miR-141-3p)和神经膜蛋白-2(NRSN2)表达水平与肺癌患者骨转移的相关性。方法选取2021年6月~2023年6月在我院就诊的76例肺癌骨转移患者(肺癌骨转移组)和43例肺癌未发生骨转移患者(肺癌未转移组)作为研究对象,另纳入52例体检健康者作为对照组,收集整理其临床基本资料和病理资料。采用qRT-PCR法检测三组血清中miR-141-3p、NRSN2表达水平;TargetScanHuman网站预测miR-141-3p与NRSN2的靶向关系;肺癌骨转移患者血清miR-141-3p与NRSN2表达水平相关性采用Pearson相关分析;Logistic回归分析探讨影响肺癌患者发生骨转移的因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-141-3p、NRSN2水平诊断肺癌患者是否发生骨转移的临床效能。结果与肺癌未转移组、对照组相比,肺癌骨转移组血清miR-141-3p水平显著降低(P<0.05),与对照组miR-141-3p水平相比,肺癌未转移组显著降低(P<0.05);肺癌骨转移组血清NRSN2水平显著高于未转移组、对照组(P<0.05),未转移组血清NRSN2水平比对照组高(P<0.05)。肺癌骨转移患者血清中miR-141-3p表达水平与肿瘤直径、病理类型、骨转移数目、临床分期和合并其他脏器转移有关(P<0.05),NRSN2水平与肿瘤直径、骨转移数目、临床分期、合并其他脏器转移相关(P<0.05)。Pearson相关分析显示,肺癌骨转移患者血清miR-141-3p与NRSN2表达水平呈现负相关(r=-0.517,P<0.05)。Logistic回归结果显示,NRSN2表达水平、病理类型、临床分期以及合并其他脏器转移均是肺癌患者发生骨转移的独立危险因素(P<0.05);血清miR-141-3p水平是独立保护因素(P<0.05)。血清miR-141-3p、NRSN2水平以及二者联合应用诊断肺癌发生骨转移的曲线下面积(AUC)分别为0.866、0.879、0.941,95%CI分别为0.791~0.921、0.807~0.932、0.882~0.976,二者联合应用诊断肺癌患者发生骨转移的临床价值优于miR-141-3p、NRSN2单独检测(Z二者联合-miR-141-3p=2.937、Z_(二者联合-NRSN2)=2.303,P=0.003、0.021)。结论miR-141-3p、NRSN2水平与肺癌骨转移患者肿瘤直径、骨转移数目、临床分期有关,且miR-141-3p、NRSN2联合应用对诊断肺癌患者是否发生骨转移具有较高的临床价值。

多囊卵巢综合征患者血清miR-335-5p、miR-141-3p水平变化及其诊断价值

目的探究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微小RNA-335-5p(miR-335-5p)、miR-141-3p水平变化及其诊断价值。方法选择2019年2月—2022年6月南通市中医院妇科治疗PCOS患者145例为PCOS组,根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为IR亚组和非IR亚组;根据体质量指数(BMI)分为肥胖亚组和非肥胖亚组;根据睾酮水平分为高雄激素亚组和非高雄激素亚组;另选取同时期女性健康体检者110例为健康对照组。荧光定量PCR检测并比较2组血清miR-335-5p、miR-141-3p水平,以及2指标在不同临床/病情特点中的差异;Pearson相关或Spearman秩相关系数描述血清miR-335-5p、miR-141-3p与临床指标之间相关性;多因素Logistic分析影响PCOS发生的因素;ROC曲线分析血清miR-335-5p、miR-141-3p水平对PCOS的诊断价值。结果PCOS组患者的BMI、空腹胰岛素(FINS)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及HOMA-IR显著高于健康对照组(t/P=4.881/<0.001、16.326/<0.001、37.901/<0.001、43.690/<0.001、15.395/<0.001);与健康对照组比较,PCOS组患者血清miR-335-5p、miR-141-3p水平均下降(t/P=10.516/<0.001、8.767/<0.001);IR亚组、肥胖亚组、高雄激素亚组血清miR-335-5p、miR-141-3p水平均低于非IR亚组、非肥胖亚组、非高雄激素亚组(t/P=2.882/0.005、3.783/<0.001,5.196/<0.001、4.515/<0.001,5.069/<0.001、4.296/<0.001);相关性分析显示,血清miR-335-5p、miR-141-3p水平均与IR、BMI、睾酮呈负相关(P均<0.01);血清miR-335-5p低、miR-141-3p低、BMI高、FINS高、LH高、睾酮高、HOMA-IR高均为影响PCOS发生的危险因素[OR(95%CI)=1.812(1.348~2.436)、2.536(1.647~3.842)、2.913(1.523~5.573)、1.293(1.207~1.385)、1.692(1.180~2.427)、3.452(2.518~4.733)、4.620(1.916~11.139)];血清miR-335-5p、miR-141-3p及二者联合诊断PCOS患者的曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.733、0.873,二者联合检测较血清miR-335-5p、miR-141-3p单独检测更具诊断效能(Z=2.882、4.767,P均<0.001)。结论血清miR-335-5p、miR-141-3p在PCOS患者中低表达,可能参与了PCOS患者IR、肥胖及高雄激素分泌,二者联合诊断对PCOS更具诊断效能。

miR-141-3p、KLF9异常表达对前列腺癌细胞株药物敏感性和雄激素受体表达的影响及靶向关系

目的观察miR-141-3p、Krüppel样因子9(KLF9)对前列腺癌细胞株药物敏感性、雄激素受体(AR)表达的影响,验证miR-141-3p、KLF9之间的靶向关系,以探讨miR-141-3p、KLF9对PCa药物敏感性的调控作用及机制。方法选择雄激素敏感且表达AR的LNCaP细胞株。将细胞分为miR-141-3p低表达组、miR-141-3p正常组、KLF9过表达组、KLF9正常组,采用脂质体转染法分别转染miR-141-3p-inhibitor、inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、KLF9过表达质粒、空白质粒。上述各组细胞加入不同浓度(0、10、25、50、75、100µmol/L)比卡鲁胺或(0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L)多西他赛后培养48 h,检测各组细胞OD值,计算细胞增殖率(反映药物敏感性)。采用qRT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中AR及AR-V7。采用TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9是否存在结合位点,然后采用荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与KLF9的靶向调控关系[将LNCaP细胞株分别分为A、B、C、D组,A组先后转染野生型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-WT)、inhibitor-NC,B组先后转染KLF9-WT、miR-141-3p-inhibitor,C组先后转染突变型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-Mut)、inhibitor-NC,D组先后转染KLF9-Mut、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后检测各组荧光素酶活性]。通过细胞功能回复实验进一步验证miR-141-3p通过靶向调控KLF9抑制前列腺癌细胞药物敏感性[将LNCaP细胞株分别分为a、b、c、d组,a组先后转染si-KLF9阴性对照(si-Ctrl)、inhibitor-NC,b组先后转染si-Ctrl、miR-141-3p-inhibitor,c组先后转染si-KLF9、inhibitor-NC,d组先后转染si-KLF9、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后分别使用75µmol/L比卡鲁胺或2.5 nmol/L多西他赛处理细胞48 h,使用CCK-8法检测细胞OD值,并计算细胞增殖率]。结果LNCaP细胞培养48 h,在无药物加入时,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05);随着药物浓度升高,各组细胞增殖率呈下降趋势(P均<0.05);在同等药物浓度情况下,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05)。LNCaP细胞培养48 h,与不加入药物的miR-141-3p正常组相比,加入75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR相对表达量升高(P均<0.05),加入50、75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR-V7相对表达量升高(P均<0.05);加入0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L多西他赛的miR-141-3p正常组AR及AR-V7相对表达量升高(P均<0.05)。miR-141-3p低表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的KLF9正常组(P均<0.05)。TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,B组的相对荧光活性高于A组、C组及D组(P均<0.05)。功能回复实验结果显示,d组的细胞增殖率高于b组(P均<0.05),低于c组(P均<0.05),但与a组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-141-3p低表达、KLF9过表达均可增强LNCaP细胞株的药物敏感性,并可抑制LNCaP细胞株AR和AR-V7的表达,miR-141-3p和KLF9存在靶向关系,miR-141-3p可靶向KLF9抑制LNCaP细胞药物敏感性,可能是通过促进AR-V7的表达实现的。

LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

五苓胶囊对前列腺癌循环miRNA-141表达的影响

目的:采用荧光定量PCR法检测前列腺癌循环miRNA-141表达,并研究五苓胶囊对其影响。方法:选取我院泌尿外科收治的前列腺癌患者20例,随机分为A、B两组,各10例;A组给予常规治疗,B组在常规治疗基础上给予加用五苓胶囊治疗。选取同期住院前列腺增生患者20例,正常对照组为同时期体检健康者20例。采用荧光定量PCR法检测正常对照组、前列腺增生组以及前列腺癌组血清miRNA-141的表达情况,以及前列腺癌组治疗前TPSA(前列腺特异性抗原)含量。结果:前列腺癌组的血清miRNA-141的表达水平为正常对照组的(11.22±8.19)倍,明显高于前列腺增生组(1.65±1.73)和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);前列腺增生组和正常对照组比较无明显差异(P>0.05);前列腺癌组血清miRNA-141的表达水平与TPSA水平呈正相关关系,相关系数r=0.753,有统计学意义(P<0.05)。治疗后,前列腺癌A组与B组的血清miRNA-141的表达水平均有所改善,与A组(5.82±4.51)相比较,B组的miRNA-141的表达水平(1.93±0.67)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:前列腺癌患者血清中miRNA-141表达水平明显升高,且与TPSA水平呈正相关关系,五苓胶囊能够降低miRNA-141表达。

微小RNA-141对肝癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨上调微小RNA-141模拟物（miR-141mimics）表达对肝癌细胞（HepG2）增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测正常肝上皮细胞（L02）和肝癌细胞（HepG2）中miR-141的差异表达。以合成的miR-141模拟物转染HepG2细胞作为实验组（miR-141组），以空白对照（CON组）和阴性对照（miR—NC组）作为对照组。采用qPCR检测各组细胞中miR-141表达情况，CCK-8法检测细胞的增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果qPCR结果显示，HepG2中miR-141相对表达（0．64±0．13）明显低于L02（1．00±0．18），差异有统计学意义（P〈0．05）。转染后，miR-141组细胞中miR-141相对表达（3．33±0．66）明显高于CON组（1．00±0．17，P〈0．05）和miR—NC组（1．08±0．14，P〈0．05）。CCK8结果显示，miR-141组在转染后48、72、96h相对吸光度值分别为（0．67±0．07）、（1．17±0．05）、（1．36±0．03），均明显低于CON组[（0．81±0．02）、（1．42±0．03）、（1．73±0．05）]和miR—NC组[（0．78±0．01）、（1．38±0．02）、（1．69±0．01），均P〈0．05]。细胞凋亡检测结果显示，miR-141组细胞凋亡率[（11．81±0．23）％]明显高于CON组[（4．18±0．18）％]和miR—NC组[（4．04±0．08）％]，差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞周期检测结果显示，miR-141组S期细胞[（19．89±2．78）％]明显少于CON组[（31．87±1．00）％]和miR—NC组[（30．49±1．73）％]，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；而miR-141组GO／G1期细胞[（74．74±2．03）％]明显多于CON组[（60．85±1．69）％]和miR．NC组[（60．93±1．95）％]，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论HepG2细胞中miR-141低表达。上调miR-141表达能明显抑制HepG2细胞增殖，促进细胞凋亡及改变细胞周期的分布。

MicroRNA-141在上皮性卵巢癌患者组织和血清中的表达及临床意义的探讨

目的:探讨微小RNA-141(miR-141)在卵巢癌患者组织和血清中的表达情况并初步探讨其作为肿瘤标记物早期诊断上皮性卵巢癌的可行性。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测16例上皮性卵巢癌患者和4例正常人卵巢组织及血清标本中miR-141的表达;检测4例良性卵巢肿瘤血清中miR-141的表达。结果:miR-141在卵巢癌患者组织中相对表达量分别为(72.846±76.671)显著高于正常人(2.869±3.201)(P<0.05);miR-141在卵巢癌患者血清中相对表达量(31.581±52.885)显著高于良性卵巢肿瘤患者(0.668±1.196)和正常人(1.690±1.697)(P<0.05),后两组间表达无差异(P>0.05);miR-141表达随卵巢癌临床分期的进展呈上升趋势(P<0.01),在无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组(P<0.05),与组织分级和CA125的升高无关(P>0.05)。在组织中miR-141表达水平与上皮性卵巢癌临床病理特征均未见明显差异(P>0.05)。结论:miR-141可能在上皮性卵巢癌的发生发展中发挥癌基因的作用;miR-141用于检测上皮性卵巢癌敏感性和特异度较高,有望成为上皮性卵巢癌早期诊断的新指标。

微小RNA-141在膀胱癌组织中的表达及与肿瘤分级的相关性研究

目的:探究微小RNA-141(miR-141)在膀胱癌组织中的表达及与肿瘤分级的相关性。方法:选取2012年3月至2014年3月山西医科大学第二医院泌尿外科收治的80例膀胱癌患者,男67例,女13例,年龄(68.23±3.57)岁,年龄范围为61~83岁。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)检测膀胱癌组织及癌旁正常组织中miR-141 mRNA相对表达量,分析miR-141表达与膀胱癌患者临床病理特征的相关性,分析miR-141表达与膀胱癌患者预后的相关性,比较miR-141低表达患者与miR-141高表达患者总生存率与无进展生存率。结果:MiR-141 mRNA在膀胱癌组织相对表达量(4.93±0.88)显著高于癌旁正常组织(0.83±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄的膀胱癌患者癌组织中miR-141 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤分级、肿瘤分期、肌层浸润、肿瘤转移不同的膀胱癌患者癌组织中miR-141 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移、miR-141表达不同的膀胱癌患者3年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移、miR-141表达均是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(P<0.05);miR-141低表达患者总生存率[71.0%(22/31)]、无进展生存率[64.5%(20/31)]显著高于miR-141高表达患者[20.4%(10/49)、24.5%(12/49)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-141在膀胱癌组织中呈高表达,miR-141表达与膀胱癌患者肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移及预后呈相关性,这可为膀胱癌患者早期诊断及预后评估提供参考依据。