血清miRNA-146、LPS、ROS在早期妊娠胚胎丢失患者中的水平及临床意义

目的探讨血清微小RNA(miRNA)-146、脂多糖(LPS)和活性氧(ROS)在早期妊娠胚胎丢失(EPEL)患者中的水平及临床意义。方法选取2021年3月至2023年3月广东省东莞市妇幼保健院收治的100例EPEL患者作为研究组,另外选取同期在广东省东莞市妇幼保健院就诊的100例正常妊娠女性作为对照组,检测并比较研究组和对照组血清指标水平。培养HTR-8/SVneo细胞,按照不同转染方式分成miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组及NC组。比较miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组Toll样受体4(TLR4)蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平,比较NC组、miRNA-146模拟物组和miRNA-146抑制剂组miRNA-146水平及HTR-8/SVneo细胞的凋亡率,比较不同水平LPS处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力。采用Pearson相关分析EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平的相关性。结果研究组LPS、ROS、IL-6和TNF-α水平高于对照组,且雌二醇、孕酮、miRNA-146水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组miRNA-146水平高于miRNA-146抑制剂组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组TLR4蛋白、NF-κB蛋白水平低于miRNA-146抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同水平LPS(8、12、16、20μg/mL)处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力低于20μg/mL LPS+miRNA-146模拟物处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞的凋亡率高于NC组和miRNA-146模拟物组,且NC组高于miRNA-146模拟物组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平呈负相关(r=-0.737、-0.614、-0.712、-0.729、-0.739、-0.708,P<0.05)。结论EPEL患者血清中miRNA-146水平明显下降,并与LPS、ROS、IL-6、TNF-α的水平呈负相关,可能是EPEL发生的影响因素之一,有望为临床预测孕妇发生EPEL提供新思路。

微小RNA-146a保护脑出血大鼠神经的调控机制

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)表达及其在脑出血大鼠模型中参与神经保护和抑制细胞自噬的相关分子机制。方法将8周龄雄性SD大鼠40只随机分为4组,分别为假手术组、模型组、miR-146a过表达组和miR-146a低表达组,每组10只。除了假手术组,其他3组采用Ⅶ型胶原酶诱导法建立动脉瘤性自发性脑出血大鼠模型。4组大鼠均基于高盐饮食饲养6周,继续饲养20周后处死。比较4组大鼠的神经功能[改良神经严重程度评分(mNSS)]、脑含水量。采用FJC染色检测退变神经元数量;采用TUNEL染色检测细胞凋亡;采用苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146a和ZEB1 mRNA表达;采用蛋白质印迹(Western blot)检测ZEB1、自噬相关蛋白人重组自噬效应蛋白(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达。结果与假手术组比较,模型组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率增加,miR-146a表达量降低,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,miR-146a过表达组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率下降,miR-146a表达量升高,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,miR-146a低表达组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率增加,而miR-146a表达量降低,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-146a可通过靶向抑制ZEB1基因及其蛋白表达,以及调控细胞自噬活性,进而发挥神经保护作用。

彩色多普勒超声联合血清微RNA-128微RNA-146a检测对乳腺肿块定性诊断价值分析

目的探讨彩色多普勒超声(CDFI)联合血清微RNA-128(miR-128)、微RNA-146a(miR-146a)对乳腺肿块的定性诊断价值。方法选择2020年6月至2022年12月在本院就诊的有乳腺肿块患者156例为观察对象,其中良性乳腺病变患者83例、乳腺癌患者73例。分析观察对象CDFI表现特征,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测患者血清miR-128、miR-146a水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-128、miR-146a对乳腺癌的诊断价值,评价CDFI联合血清miR-128、miR-146a对乳腺癌的诊断效能。结果CDFI检查结果显示,156例有乳腺肿块患者中乳腺癌78例、良性乳腺病变78例,CDFI诊断乳腺癌的灵敏度为80.8%(59/73),特异度为77.1%(64/83),准确度为78.8%(123/156);与乳腺良性肿瘤患者比较,乳腺癌患者血清miR-128、miR-146a表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-128诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)(95%CI)为0.793(0.717,0.869),灵敏度为75.3%,特异度为83.1%,截断值为0.7;血清miR-146a诊断乳腺癌AUC(95%CI)为0.822(0.755,0.889),灵敏度为76.7%,特异性为80.7%,截断值为0.83;CDFI、血清miR-128、miR-146a联合诊断乳腺癌的灵敏度为93.2%、特异性为89.2%,准确度为91.0%,其诊断效能显著高于CDFI、血清miR-128、miR-146a单独检测。结论CDFI联合血清miR-128、miR-146a在鉴定乳腺肿块良恶性中,有一定临床应用意义。

糖尿病酮症酸中毒合并感染患者血清微小RNA-146a和微小RNA-155水平检测及意义

目的:检测糖尿病酮症酸中毒合并感染患者血清微小RNA(miR)-146a和miR-155水平,分析其意义。方法:选取DKA合并感染患者76例(感染组)和单纯DKA未合并感染患者60例(未感染组)。入院后24 h内,对实验室生化指标进行检测,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定血清miR-146a、miR-155水平。分析DKA合并感染的影响因素,DKA患者血清miR-146a、miR-155、白细胞计数(WBC)和C-反应蛋白(CRP)的相关性,以及血清miR-146a、miR-155对DKA合并感染的诊断价值。结果:感染组WBC、CRP以及血清miR-146a、miR-155水平高于未感染组(均P<0.05)。WBC、CRP、miR-146a、miR-155是DKA患者合并感染的独立危险因素(均P<0.05)。DKA合并感染患者血清miR-146a、miR-155与WBC、CRP呈正相关,且血清miR-146a与miR-155呈正相关(均P<0.05)。血清miR-146a和miR-155对DKA合并感染均有一定的诊断价值,且两项联合的诊断价值更高(均P<0.05)。结论:DKA合并感染患者血清miR-146a、miR-155呈高水平,与WBC、CRP密切相关,对DKA合并感染具有较高诊断价值。

miRNA-146通过调控TLR4/NF-κB信号通路促进 POI模型卵巢颗粒细胞生长的机制研究

目的 探讨小鼠原发性卵巢功能不全(POI)模型的微小RNA(miRNA)-146、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)的水平及对卵巢颗粒细胞生长的影响。方法 取健康雌性BALB/c小鼠40只,随机分为POI组和对照组,每组20只。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miRNA-146水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平;采用蛋白质印迹法检测小鼠卵巢组织TLR4和NF-κB蛋白水平。采用miRNA-146模拟物或抑制剂转染小鼠卵巢颗粒细胞,评估卵巢颗粒细胞增殖、生长活力和细胞凋亡率及TLR4、NF-κB通路蛋白的表达。采用Spearman相关分析POI模型miRNA-146水平与TLR4和NF-κB水平的相关性。结果 POI组的miRNA-146水平显著低于对照组(P<0.05),TNF-α、IL-6、TLR4、NF-κB水平高于对照组(P<0.05)。miRNA-146模拟物在卵巢颗粒细胞中呈高表达水平,且呈浓度依赖趋势。miRNA-146转染后,miRNA-146模拟物组细胞凋亡率低于对照组,miRNA-146抑制剂组细胞凋亡率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,POI小鼠的miRNA-146水平与TLR4、NF-κB水平呈负相关(r=-0.725、-0.681,P<0.05)。结论 上调miRNA-146水平具有促进卵巢颗粒细胞生长的作用,其机制可能与miRNA-146负性调控TLR4/NF-κB信号通路和下调TNF-α、IL-6的表达相关,miRNA-146有望作为评估卵泡质量的指标之一。

miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性

目的探讨微小RNA-19(miRNA-19)、微小RNA-146(miRNA-146)、微小RNA-155(miRNA-155)在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性。方法选取2019年2月至2021年2月92例支气管哮喘患者作为研究组,根据病情严重程度分为重度组(n=17)、中度组(n=30)及轻度组(n=45),根据胸部高分辨率CT诊断结果将研究组分为气道重塑组(n=34)及非重塑组(n=58),另取同期60例健康体检者作为对照组,检测并比较各组血清miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155,采用Perason相关性系数分析血清miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155与病情严重程度、气道重塑的相关性。结果研究组血清miRNA-19、miRNA-146水平高于对照组,miRNA-155水平低于对照组(P<0.05);重度组血清miRNA-19、miRNA-146水平均高于中度组、轻度组,中度组血清miRNA-19、miRNA-146水平均高于轻度组(P<0.05);重度组血清miRNA-155水平低于中度组、轻度组,中度组血清miRNA-155水平低于轻度组(P<0.05);重塑组血清miRNA-19、miRNA-146水平均高于非重塑组,miRNA-155水平低于非重塑组(P<0.05);Perason相关性分析显示,血清miRNA-19、miRNA-146与病情严重程度、气道重塑呈正相关,血清miRNA-155与病情严重程度、气道重塑呈负相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者血清miRNA-19、miRNA-146呈高表达、miRNA-155呈低表达,三者均与病情严重程度及气道重塑情况存在相关性。

母体血清微RNA-146a-5p联合三联法检测在孕中期唐氏综合征筛查中的意义

目的 探讨母体血清微RNA-146a-5p(miR-146a-5p)联合三联法检测在孕中期唐氏综合征筛查中的意义。方法 选取2017年1月至2020年8月于黄冈市中心医院孕中期行唐氏综合征筛查结果为阳性的孕妇65例(病例组),同期选择本院健康的妊娠孕妇65例(对照组)。使用化学发光免疫分析仪检测孕妇血清甲胎蛋白(AFP),人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)以及游离雌三醇(uE3)指标。实时荧光定量PCR法检测血清中miR-146a-5p的水平。采用受试者操作特征(ROC)曲线分析母体血清miR-146a-5p联合三联法对孕中期唐氏综合征的预测价值。采用Pearson法分析miR-146a-5p相对表达水平与血清AFP、uE3、β-hCG中位数的倍数(MOM)值的相关性。结果 与对照组(1.89±0.32)U/mL、(1.63±0.36)μg/L、1.03±0.24、(2.41±0.28)μg/L相比,病例组孕妇血清AFP MOM值(2.84±0.27)U/mL、β-hCG MOM值(2.84±0.25)μg/L及血清miR-146a-5p相对表达水平3.07±0.95较高(P<0.05),uE3 MOM值(1.71±0.19)μg/L较低(P<0.05)。Pearson法分析显示,miR-146a-5p与AFP、β-hCG呈正相关(P<0.05),与uE3呈负相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,AFP+uE3+β-hCG预测孕中期唐氏综合征的曲线下面积(AUC)为0.85,灵敏度分别为83.10%,特异度分别为75.40%;miR-146a-5p预测孕中期唐氏综合征的AUC为0.86,灵敏度为81.50%,特异度为87.70%;miR-146a-5p+AFP+uE3+β-hCG预测子孕中期唐氏综合征的AUC为0.91,灵敏度为86.20%,特异度为80.00%,miR-146a-5p联合三联法检测对孕中期唐氏综合征筛查价值高于三联法检测(P<0.05)。结论 母体血清miR-146a-5p联合三联法对孕中期唐氏综合征的预测效能具有较高的临床价值,可为孕中期唐氏综合征筛查提供一种新途径。

长链非编码RNA X染色体失活特异转录物和微小RNA-146-5p在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录物(XIST)、微小RNA-146-5p(miR-146-5p)的表达及其诊断价值。方法选取甲状腺癌患者92例为研究对象,均行手术切除术,术中收集甲状腺癌组织和癌旁正常组织。分析LncRNA XIST、miR-146-5p水平与患者临床病理特征之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估LncRNA XIST、miR-146-5p单独及联合对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达水平为(0.65±0.17),低于癌旁组织的(1.02±0.18),miR-146-5p表达水平为(2.56±0.87),高于癌旁组织的(1.07±0.25),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期、发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者肿瘤组织中LncRNA XIST表达水平低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,miR-146-5p表达水平高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,LncRNA XIST、miR-146-5p二者联合诊断甲状腺癌的曲线下面积(AUC)大于LncRNA XIST、miR-146-5p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达下调,miR-146-5p表达上调,二者与临床分期、颈部淋巴结转移有关,并对甲状腺癌有一定的诊断价值。

miRNA-146调控TLR4/NF-κB通路促进滋养层细胞增殖和迁移

目的探讨miRNA-146是否通过调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移,以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考。方法(1)细胞研究:将转染后的胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo分成miRNA-146抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146模拟物组、模拟物对照组,检测各组HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平。(2)动物研究:建立Dicer酶敲除的uRSA小鼠模型,将正常妊娠小鼠作为对照组,通过qRT-PCR检测胎盘组织的miRNA-146 mRNA表达情况,采用免疫组织化学法检测胎盘组织的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达情况。结果(1)细胞研究:与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。不同浓度(10~80μmol/L)miRNA-146对HTR-8/SVneo细胞生长活力的增长均有显著影响(P<0.05),并呈浓度依赖性。(2)动物研究:与对照组比较,uRSA组小鼠胎盘组织中miRNA-146 mRNA的相对表达量显著降低[(0.32±0.19)vs.(0.96±0.24),t=12.473,P<0.05],而TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白表达有增高趋势。结论上调miRNA-146的表达具有促进胎盘滋养层细胞的增殖和迁移作用,其机制可能与负性调控TLR4/NF-κB通路相关。miRNA-146有望成为防治uRSA的潜在靶标。

外周血miRNA-146a、miRNA-26a在重症急性胰腺炎预后中的价值探讨

目的 探究外周血微小RNA-146a(miR-146a)、微小RNA-26a(miR-26a)在重症急性胰腺炎预后中的价值。方法 选择器工业五二一医院2019年4月—2021年3月收治的119例重症急性胰腺炎患者作为研究对象,根据临床病历资料收集患者的临床一般资料,于患者入院24 h内对患者外周血miRNA-146a、miRNA-26a相对表达量及血常规指标进行检测。根据患者治疗28 d内病情转归情况将其分为生存组和死亡组。通过Logistic多因素回归分析影响重症急性胰腺炎患者预后的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积评估外周血miR-146a及miR-26a水平对患者临床预后的预测价值。结果 死亡组胰周感染所占比例及APACHEⅡ评分、miR-146a相对表达量、miR-26a相对表达量均高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高均为重症急性胰腺炎患者预后死亡的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,外周血miR-146a、miR-26a水平单一及联合对重症急性胰腺炎患者预后死亡的ROC预测的曲线下面积(AUC)分别为0.793、0.780、0.883,且外周血miR-146a、miR-26a水平对重症急性胰腺炎患者死亡预后的单一预测效能低于两者联合(P<0.05)。结论 合并胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高的重症急性胰腺患者死亡率较高,外周血miR-146a、miR-26a相对表达水平均可有效预测重症急性胰腺炎患者的死亡预后。

前列腺小体miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路在EAP大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的研究

背景目前对慢性前列腺炎(CP)的治疗未达到预期的疗效,亟需寻找新的治疗药物,本课题组前期研究发现大火草〔Anemone tomentosa(Maxim.)Péi〕对CP有较好的疗效,但具体作用机制还有待进一步研究。目的探讨前列腺小体源性微小RNA-146a(miRNA-146a)调控Toll样受体4(TLR-4)/核转录因子κB(NF-κB)通路在自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的可能机制。方法2021年12月—2022年6月,将42只Wistar大鼠采用随机数字表法分正常组、模型组、大火草低剂量组、大火草中剂量组、大火草高剂量组、miRNA-146a激动剂(mimics)组、miRNA-146a抑制剂(inhibitor)组,每组6只。药物干预后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA,采用蛋白质印迹法检测TLR-4、细胞内抑制性蛋白κB(IκB)、磷酸化细胞内抑制性蛋白κB(p-IκB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6),酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测炎症因子。结果与正常组比较,各组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均下调(P<0.01)。与模型组比较,大火草中、高剂量组,miRNA-146a mimics组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均上调(P<0.01);miRNA-146a inhibitor组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达下调(P<0.01)。大火草和miRNA-146a mimics可以显著降低前列腺组织TLR-4、p-IκBα、TRAF6蛋白表达(P<0.01);促进前列腺组织IκBα蛋白表达上调(P<0.01);降低大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、干扰素γ(IFN-γ)水平(P<0.05)。大火草和miRNA-146a mimics可以减轻前列腺组织炎症细胞浸润,改善前列腺组织病理损伤。结论前列腺小体源性miRNA-146a可以调节TLR-4/NF-κB通路参与EAP大鼠前列腺局部病理变化。大火草抗EAP大鼠慢性炎症的作用机制可能与其调控前列腺小体源性miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路有关。

IgA肾病患者尿液外泌体中微小RNA-146a、微小RNA-210表达及与病理分级的相关性研究

目的探索IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者尿液外泌体中微小RNA(miRNA,miR)-146a、miR-210表达及其与IgAN病理分级的相关性。方法选取2018年1月至2022年1月在雅安市人民医院经肾穿刺后病理组织学活检确诊的IgAN患者113例作为研究对象,并选取同期健康体检人群100人作为健康对照组。将研究对象的肾脏病理标本按照Lee氏分级分为轻(Ⅰ-Ⅱ级)、中(Ⅲ级)、重(Ⅳ-Ⅴ)3组,实时荧光定量PCR比较实验组及健康对照组两组间尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平;比较不同病理分级IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平;Spearman秩相关系数分析IgAN患者24 h尿蛋白、血肌酐、尿液外泌体miR-146a及miR-210表达水平之间的相关性;采用受试者工作特征曲线评估尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达对IgAN的诊断价值。结果IgAN患者尿液外泌体中miR-146a[(3.27±1.59)比(5.13±0.34)]、miR-210[(1.25±0.71)比(2.33±0.45)]表达较健康对照组明显降低(P<0.01);IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平与Lee氏分级、24 h尿蛋白及血肌酐呈负相关,即Lee氏分级越高,其表达水平越低。miR-146a用于诊断IgAN的敏感度及特异度分别为88.89%、77.52%,曲线下面积为0.835;miR-210用于诊断IgAN的敏感度及特异度分别为79.71%、85.92%,曲线下面积为0.842。结论IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平明显降低,对尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平进行检测有助于对IgAN病理分级进行判断,尿液外泌体中miR-146a、miR-210有望作为IgAN辅助诊断和治疗效果监测的潜在分子标志物。

基于微小RNA-146a探究川陈皮素对帕金森病模型的神经保护作用

目的通过建立帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞和动物模型,揭示微小RNA-146a(miR-146a)介导川陈皮素(nobiletin)对PD的调控作用。方法分别构建PD细胞模型和PD小鼠模型作为研究样本,并接受不同浓度川陈皮素治疗。利用实时荧光定量PCR检测样本中miR-146a的表达水平,CCK-8法分析细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,使用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测小鼠血清和海马组织匀浆中炎症因子的表达水平,并利用旷场实验记录小鼠运动能力,分析miR-146a介导川陈皮素对PD的治疗功效。结果与对照组相比,PD细胞模型组中miR-146a的表达和细胞凋亡率随川陈皮素浓度的增加而下降,细胞增殖水平则相反,提示川陈皮素具有提高PD细胞增殖活力、抑制凋亡的作用。进一步选择川陈皮素高剂量组验证发现,异常表达miR-146a介导川陈皮素调控PD的进展,并通过PD小鼠运动能力、血清和组织中炎症因子的变化再次验证了川陈皮素对神经保护功能的分子机制。结论miR-146a在PD细胞模型中表达显著升高,川陈皮素可恢复神经细胞的活力。miR-146a通过介导川陈皮素调控神经细胞的生长及炎症因子的水平,恢复小鼠的正常运动功能,可能是治疗PD的潜在靶点。

脓毒症患者血浆微RNA-146a表达与患病风险、炎性因子水平及预后的相关性分析

目的评估脓毒症患者血浆miRNA-146a表达水平对患病风险及预后的价值。方法连续纳入2015年10月至2017年3月于海军军医大学(第二军医大学)附属公利医院急诊科和ICU就诊的132例脓毒症患者,以及同期在健康体检中心进行健康体检的131名健康对照。采集两组研究对象的血液样本,采用qRT-PCR检测血浆miRNA-146a表达,采用ELISA法测定血清炎性因子(CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10)水平。结果与健康对照相比,脓毒症患者血浆中miRNA-146a表达水平较低(Z=-7.423,P<0.01);ROC曲线显示血浆miRNA-146a对脓毒症有较好的诊断价值,AUC为0.765(95%CI 0.707~0.823),取约登指数最大值处的界值为最佳诊断界值,此时灵敏度和特异度分别为87.9%和61.8%。多元logistic回归模型显示血浆miRNA-146a表达水平低是脓毒症患病风险的独立预测因素(OR=0.312,95%CI 0.225~0.434,P<0.01)。Spearman相关分析显示血浆miRNA-146a表达水平与急性生理功能和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分呈负相关(r=-0.562,P<0.01),与血清CRP(r=-0.304,P<0.001)、TNF-α(r=-0.287,P=0.001)、IL-1β(r=-0.173,P=0.047)及IL-6(r=-0.213,P=0.014)呈负相关,与血清IL-10(r=0.225,P=0.009)呈正相关。与存活脓毒症患者相比,死亡患者血浆中miRNA-146a的表达水平降低(Z=-2.818,P=0.005)。ROC曲线分析显示血浆miRNA-146a对脓毒症有良好的预后价值,AUC为0.660(95%CI 0.546~0.773),最佳诊断界值的灵敏度和特异度分别为88.5%和47.2%。结论血浆miRNA-146a表达水平低是脓毒症患病的独立预测因素,并与疾病严重程度高、炎性因子水平高及预后不良有关。

MicroRNA-146a通过靶向TAK1诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察微小RNA-146a(miR-146a)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将miR-146a mimic(上调miR-146a表达)和miR-146a inhibitor(下调miR-146a表达)分别转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置miRNA无义序列转染为阴性对照组(NC组)。RT-q PCR检测转染后胃癌细胞miR-146a的表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测miR-146a对SGC-7901胃癌细胞生长活力和凋亡的影响;RT-q PCR和Western blot法检测miR-146a上调或下调对转化生长因子β激活激酶1(TAK1)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。结果:在SGC-7901细胞中,上调miR-146a表达显著促进细胞凋亡,而下调miR-146a表达则显著抑制细胞凋亡。与NC组相比,miR-146a mimics转染SGC-7901细胞后,TAK1的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异均有统计学显著性(P<0.05),而miR-146a inhibitors转染组TAK1的mRNA和蛋白质表达则显著增加(P<0.05),提示miR-146a负调控TAK1表达。敲低TAK1促进SGC-7901细胞凋亡(P<0.01),而TAK1过表达TAKI则抑制SGC-7901细胞凋亡(P<0.01)。此外,过表达miR-146a和敲低TAK1均能显著上调NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达。结论:本研究结果表明miR-146a通过靶向TAK1抑制NF-κB途径,从而诱导胃癌细胞凋亡。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞微小RNA-146a表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雌性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠50只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方低剂量组(n=10,简称中药1组)、温化蠲痹方中剂量组(n=10,简称中药2组)、温化蠲痹方高剂量组(n=10,简称中药3组)。中药1、2、3组分别给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d、45.8 g/kg·d、68.7 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,提取各组大鼠外周单个核细胞,采用实时定量PCR法检测miRNA-146a表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01);与MTX组比较,中药1、2、3组大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMC miRNA-146a表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠PBMC miRNA-146a表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与MTX比较,中药1、2、3组大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P>0.05);中药1、2、3组比较,大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达升高。中药温化蠲痹方下调CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达无剂量依赖性,其可能通过下调miRNA-146a表达,而调节免疫细胞分化、信号转导等达到治疗CIA的作用。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

微RNA-146a在风湿性疾病中的研究进展

微RNA(miRNA)作为一种高度保守的、内源性非编码小分子RNA,主要在转录后调节细胞增殖、分化、凋亡及免疫应答等重要生命过程。miR-146是第一个被发现的哺乳动物先天免疫及适应性免疫的调制器,miR-146a表达失调与风湿性疾病的发生及免疫调节异常密切相关。miR-146a作为miR-146家族中的一员,在风湿性疾病发病中的作用受到广泛关注,研究miR-146a在风湿性疾病中的作用机制有助于风湿性疾病的诊断与治疗。

微小RNA-146b-5p对甲状腺乳头状癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)对甲状腺乳头状癌细胞迁移和侵袭的影响。方法构建过表达miR-146b-5p的稳定转染甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,并采用RT-PCR检测其在转染组、空载组和对照组TPC-1细胞中的表达,采用划痕实验和Transwell小室侵袭实验分别检测3组TPC-1细胞的迁移、侵袭能力。结果转染组TPC-1细胞中的miR-146b-5p表达明显高于空载组和对照组。转染组48 h划痕愈合率明显高于空载组和对照组。转染组48 h穿膜细胞数明显高于空载组和对照组。结论MiR-146b-5p可以显著增强甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭能力。

原发性免疫性血小板减少症患者血清微小RNA-155和微小RNA-146a表达情况及临床意义

目的探讨原发性免疫性血小板减少症(pITP)患者血清微小RNA(miRNA)-155、miRNA-146a的表达情况及临床意义。方法选取130例pITP患者(观察组)及130例血小板捐献者(对照组)作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测所有研究对象血清miRNA-155、miRNA-146a表达水平。比较两组研究对象血小板相关参数、miRNA-155和miRNA-146a表达水平,并分析pITP患者血清miRNA-155、miRNA-146a表达水平与血小板计数、血小板分布宽度(PDW)及血小板平均体积(MPV)的相关性。采用Logistic回归分析影响pITP发生的因素。结果观察组血小板计数、血清miRNA-146a表达水平低于对照组,PDW、MPV及血清miRNA-155表达水平高于对照组(均P<0.05)。pITP患者血清miRNA-155表达水平与血小板计数呈负相关,与PDW、MPV均呈正相关(均P<0.05);血清miRNA-146a表达水平与血小板计数呈正相关,与PDW、MPV均呈负相关(均P<0.05)。血清miRNA-155高表达、血清miRNA-146a低表达均是影响pITP发生的独立危险因素(均P<0.05)。结论pITP患者血清miRNA-155表达水平升高,血清miRNA-146a表达水平下降,两者或在pITP的发生中发挥重要作用。