微小RNA-223-3p调控Notch通路对屋尘螨所致过敏性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的影响实验研究

目的:探讨微小RNA(miR)-223-3p对屋尘螨(HDM)所致过敏性鼻炎(AR)小鼠鼻腔炎症反应的影响及相关机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为对照组、HDM致AR组(AR组)、miR-223-3p激动剂组(agomiR-223-3p组)、miR-223-3p抑制剂组(antagomiR-223-3p组)及miR-223-3p激动剂+敲低Notch1组(agomiR-223-3p+sh-Notch1组),每组各16只。利用HDM变应原提取物构建AR小鼠模型,并给予miR-223-3p激动剂(miR-223-3p agomir)、miR-223-3p抑制剂(miR-223-3p antagomir)及敲低Notch1的腺相关病毒(AAV-sh-Notch1)滴鼻治疗。末次激发后,对小鼠进行AR症状评估,并收集血清、鼻腔灌洗液(NALF)和鼻黏膜组织标本。HE染色检测鼻黏膜损伤。Diff-Quik染色检测NALF中嗜酸性粒细胞数量。ELISA检测血清HDM特异性免疫球蛋白E(HDM-sIgE)和NALF中炎症因子水平。RT-qPCR检测鼻黏膜miR-223-3p、炎症因子及Notch通路相关mRNA水平。Western blot检测鼻黏膜Notch1、Jagged1蛋白水平。结果:与对照组比较,AR组小鼠鼻痒、喷嚏、流鼻涕情况严重,鼻黏膜增厚,可见大量炎症浸润;AR症状评分、血清HDM-sIgE水平、鼻黏膜miR-223-3p水平升高;NALF中嗜酸性粒细胞增多,白介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平升高,IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)水平降低;鼻黏膜IL-4、IL-5、IL-13 mRNA和Notch1、Jagged1 mRNA及蛋白水平升高,IL-12、IFN-γmRNA水平降低(均P<0.05)。agomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组增强,并激活Notch通路;antagomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组减轻,并阻断Notch通路(均P<0.05)。与agomiR-223-3p组比较,敲低Notch表达可逆转miR-223-3p对AR小鼠鼻腔炎症反应的激活作用。结论:miR-223-3p通过激活Notch通路增强HDM所致AR小鼠鼻腔炎症反应。

微小RNA-223调节胆固醇代谢减轻代谢相关性脂肪性肝炎的作用研究

目的 探讨微小RNA(miR)-223对代谢相关性脂肪性肝炎(MASH)细胞模型中胆固醇(TC)代谢的作用,并进一步探讨miR-223对MASH的影响。方法 采用棕榈酸(PA)刺激LO2细胞构建MASH细胞模型,检测细胞内TC水平;转染miR-223后,检测细胞内TC水平。采用Western Blot检测TC代谢相关基因(HMGCS1、SR-BI和ABCA1)蛋白的相对表达水平;采用HE染色和油红O染色观察肝组织病理变化和脂质沉积情况;采用免疫组化检测F4/80观察巨噬细胞浸润情况。结果 200μM及400μM PA刺激LO2细胞36 h的TC表达水平均高于同一浓度下刺激12 h和24 h,400μM PA刺激LO2细胞36 h的TC表达水平明显高于200μM PA刺激36 h;400μM PA刺激LO2细胞36 h的miR-223表达水平明显高于miR-NC和200μM PA刺激36 h(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,400μM PA作用LO2细胞后,SR-BI和HMGCS1基因蛋白的相对表达水平均升高,ABCA1基因蛋白的相对表达水平均降低;转染miR-223后,SR-BI和HMGCS1基因蛋白的相对表达水平均降低,ABCA1基因蛋白的相对表达水平升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,miR-223减轻高脂饮食诱导的MASH小鼠模型中的肝脏炎症及脂肪沉积。结论 miR-223通过直接或间接调控TC生物合成、摄取及排出的关键基因HMGCS1、SR-BI和ABCA1调节MASH细胞模型中TC的平衡,并进一步减轻高脂饮食诱导的MASH。

血浆微小RNA-223及叉头框蛋白3a水平与冠心病患者心脏结构及功能的相关性研究

目的探讨血浆微小RNA-223(miR-223)及叉头框蛋白3a(FoxO3a)水平与冠心病患者心脏结构变化的相关性。方法纳入2019年1月至2020年12月在新疆医科大学第一附属医院住院的126例冠心病患者为研究组和111例非冠心病患者为对照组,平均年龄(66.38±12.12)岁比(49.35±9.60)岁。通过酶联免疫分析法,检测所有研究对象血浆miR-223及FoxO3a水平,分析其与超声心动图中左心房(LA)、右心房(RA)、左心室舒张末期容积(EDV)、左心室收缩末期容积(ESV)、室间隔、右心室流出道、右心室(RV)、肺动脉、室壁运动评分、MV-E、MV-A、MV-E/A和射血分数(EF)等指标的关系。结果两组在年龄、合并高血压方面差异具有统计学意义(t=6.954、χ^(2)=12.014,P=0.000、0.001)。研究组miR-223[(0.415±0.065)ng/L比(0.309±0.057)ng/L]、FoxO3a[(0.402±0.058)ng/L比(0.306±0.059)ng/L]水平明显高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。相关分析中,miR-223和FoxO3a水平间呈正相关(r=0.485,P=0.000)。miR-223和FoxO3a水平与冠心病之间,年龄成为控制变量后仍呈相关性(r=0.388,P=0.000;r=0.506,P=0.000)。miR-223水平与心脏超声各指标中与LA、EDV、ESV、RA、室壁运动评分呈正相关(r=0.358、0.338、0.339、0.282、0.274,P=0.001、0.002、0.002、0.012、0.015)。FoxO3a水平与超声心动图各指标中与LA、EDV、ESV、室壁运动评分呈正相关(r=0.302、0.312、0.380、0.373,P=0.007、0.005、0.001、0.001),与FE呈负相关(r=-0.278,P=0.013)。结论血浆miR-223、FoxO3a水平在冠心病患者中明显升高,呈高表达状态,并与冠心病患者发生心脏结构的变化有一定的相关性。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ调控微RNA-223水平改善高脂诱导胰岛素抵抗细胞糖吸收障碍

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)调控miRNA-223水平在高脂诱导的胰岛素抵抗中的作用。方法Wistar雄性大鼠通过高脂饲料喂养,建立2型糖尿病动物模型并予以吡格列酮治疗,以qPCR、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法和ELISA法检测吡格列酮治疗前后2型糖尿病大鼠血清miRNA-223、血糖及4种炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)水平的变化;以软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型,上调或抑制PPARγ蛋白或miRNA-223水平后,以细胞葡萄糖吸收实验、蛋白质印迹法和qPCR法检测细胞葡萄糖吸收水平、细胞葡萄糖转运蛋白(葡萄糖转运蛋白1、2、4;胰岛素受体底物1、2)表达及miRNA-223水平的变化。结果与治疗前相比,吡格列酮治疗7 d后大鼠空腹血糖水平下降、血清miRNA-223水平上升、血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)相对表达量下降(P均<0.001)。经软脂酸处理24 h后,软脂酸组HepG2细胞PPARγ蛋白表达和miRNA-223水平均较空白对照组降低,且细胞葡萄糖吸收水平下降(P均<0.05);上调PPARγ蛋白可改善软脂酸导致的细胞葡萄糖吸收水平下降、升高miRNA-223及炎症因子水平(P均<0.05)。抑制PPARγ表达可导致细胞葡萄糖吸收水平降低(P<0.05)、miRNA-223表达水平下降(P<0.05),但对正常状态下炎症因子水平无调节作用;过表达miRNA-223可改善软脂酸诱导的细胞葡萄糖吸收水平下降和炎症因子水平增高(P均<0.05),以及上调葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白4、胰岛素受体底物1的表达(P均<0.05);抑制miRNA-223对软脂酸诱导的细胞葡萄糖吸收水平及葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白4、胰岛素受体底物1表达的作用与过表达miRNA-223效果相反(P均<0.05)。但过表达或抑制miRNA-223均对PPARγ表达无影响。结论PPARγ通过调节miRNA-223水平改善高脂诱导的胰岛素抵抗细胞葡萄糖吸收。

食管鳞癌微小RNA-223表达临床意义研究

目的通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者及健康对照者血清微小RNA-223(microRNA-223,miR-223)的表达来分析其与ESCC诊断、预后之间的相关性。方法以小无编码RNA U6为内参基因,通过miRNAs提取、反转录及实时荧光定量聚合酶链反应等检测50例ESCC患者(病例组)和50名年龄、性别与之相匹配的健康对照者(对照组)血清中miR-223的表达水平,再参照ESCC患者的临床病理特征进行统计学分析。结果病例组血清miR-223表达显著高于对照组(P<0.001)。在不同淋巴结转移情况、不同远处转移情况及不同临床分期的患者中,血清miR-223表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论血清miR-223表达水平与ESCC的发生、转移及临床分期密切相关,提示miR-223可能成为一个有效且无创的诊断及判断ESCC预后的血清生物标志物。

微RNA-223下调心脏特异性新激酶基因表达对心肌细胞肥大的抑制效应

目的探讨微RNA-223(miRNA-223)通过下调心脏特异性新激酶(TNNI3K)基因表达对心肌细胞肥大的调控作用。方法选取原代培养新生大鼠心肌细胞,以内皮素-1(ET-1)人工诱导心肌细胞肥大。应用实时定量PCR测定miRNA-223的表达水平。通过化学修饰RNA模拟物转染实现miRNA-223的过表达,通过重组腺病毒转染实现TNNI3K的过表达。采用抗α-辅肌动蛋白(α-actinin)荧光染色法测量细胞大小,实时定量PCR检测心肌细胞肥大标志性基因的表达,Western印迹法测定TNNI3K和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的蛋白表达,荧光素酶检测法判定miRNA-223与TNNI3K的3’端非编码区(3’-UTR)接合。结果 ET-1诱导的肥大心肌细胞的miRNA-223表达量显著低于正常心肌细胞(P<0.01),下调约40%。外源性miRNA-223干预后能显著缩小ET-1诱导的肥大心肌细胞的表面积(P<0.01)。miRNA-223模拟物转染组心肌细胞中经典的肥大标志性基因心房钠尿肽(ANP)、α-actinin、Myh6、Myh7的相对表达水平均显著低于空白心肌细胞组(P值分别<0.01、0.05)。荧光素活性检测实验显示,miRNA-223模拟物与TNNI3K的3’-UTR核心序列重组体共反应组的相对荧光表达显著低于内对照载体组(P<0.01),减少约60%,表明miRNA-223与TNNI3K的3’-UTR核心区可直接接合。miRNA-223组心肌细胞中的TNNI3K蛋白相对表达量显著低于空白心肌细胞组和错义miRNA(scr-miRNA)转染组(P值均<0.01),减少约90%。Western印迹法结果显示,miRNA-223模拟物转染组心肌细胞的磷酸化cTnI蛋白表达量显著低于空白心肌细胞组和scr-miRNA转染组(P值均<0.01),减少约40%;空白心肌细胞组、scr-miRNA转染组和miRNA-223模拟物转染组间cTnI蛋白表达量的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论 miRNA-223通过直接下调TNNI3K基因表达抑制心肌细胞肥大,此调控效应与cTnI的磷酸化受限有关。

微RNA-223在慢性阻塞性肺疾病血清外泌体中的表达

目的探讨微RNA-223(miRNA-223)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)血清外泌体中表达情况及临床意义。方法选择2019年3月至2021年6月在济宁市第一人民医院呼吸科治疗的稳定期COPD病人113例作为观察对象(COPD组),根据肺功能将COPD病人分为轻度组40例、中度组31例、重度组25例和极重度组17例,另选取同期在济宁市第一人民医院体检的100例健康体检人员作为对照组。提取各研究对象血清外泌体,并进行鉴定;检测各研究对象血清外泌体miRNA-223水平,血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)水平及肺功能指标第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占预计值百分比(FEV1%pred)、FEV1占用力肺活量(FVC)百分比(FEV1/FVC);采用Pearson分析COPD病人血清外泌体miR⁃NA-223与TNF-α、IL-6、CRP、FEV1%pred、FEV1、FEV1/FVC相关性。结果COPD组病人肺功能指标FEV1%pred(62.05±11.38比101.87±12.45)、FEV1[(1.77±0.62)L比(2.83±0.44)L]、FEV1/FVC[(64.01±11.52)%比(86.47±8.08)%]显著低于对照组(P<0.05);电镜结果显示,血清外泌体为圆形或椭圆形囊泡状结构,直径约100 nm;蛋白质印迹法结果显示,对照组与COPD组外泌体均表达特异性蛋白CD63、CD9、TSG101,说明成功提取血清外泌体,可用于后续实验。COPD组血清外泌体miRNA-223水平及血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于对照组(P<0.05);轻度、中度、重度、极重度组COPD病人血清外泌体miRNA-223表达水平依次升高,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),重度、极重度COPD病人血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于轻、中度病人(P<0.05),轻度与中度、重度与极重度COPD病人之间血清TNF-α、IL-6、CRP水平差异无统计学意义(P>0.05);相关性分析显示,COPD病人血清外泌体miRNA-223水平与TNF-α、IL-6、CRP水平呈正相关,与FEV1%pred、FEV1、FEV1/FVC呈负相关(均P<0.05)。结论miRNA-223在COPD病人血清外泌体中表达水平升高,且与病人疾病严重程度有关,可能作为判断COPD病情严重程度的潜在标志物。

老年重症肺炎病人血清微小RNA-146a、微小RNA-223、微小RNA-21、微小RNA-124水平及其与预后的关系

目的 探究老年重症肺炎病人血清微小RNA(miR)-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及其与预后的关系。方法选取2018年2月至2020年3月郑州大学第二附属医院诊治的128例老年重症肺炎病人、130例普通肺炎病人分别为重症肺炎组、普通肺炎组,并纳入同期128例体检健康者为健康组。比较三组血清miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;分析老年重症肺炎病人血清miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平与TNF-α的相关性;比较不同预后老年重症肺炎病人临床资料和血清miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124水平;分析老年重症肺炎病人死亡的影响因素;分析血清miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α对老年重症肺炎病人预后的预测价值。结果 普通肺炎组病人血清miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及TNF-α水平分别为1.67±0.56、1.64±0.55、1.71±0.57、(12.78±4.30)ng/L,重症肺炎组病人血清miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及TNF-α水平分别为2.32±0.78、2.27±0.76、2.39±0.80、(23.64±7.92)ng/L,高于健康组的1.03±0.35、1.01±0.34、0.99±0.33、(5.43±1.84)ng/L、(P<0.05),普通肺炎组、重症肺炎组血清miR-124表达水平分别为0.71±0.24、0.37±0.13,低于健康组的1.07±0.37(P<0.05);重症肺炎组病人血清miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及TNF-α水平高于普通肺炎组(P<0.05),血清miR-124表达水平低于普通肺炎组(P<0.05);老年重症肺炎病人血清miR-146a、miR-223、miR-21表达水平与TNF-α呈正相关(P<0.05),血清miR-124表达水平与TNF-α呈负相关(P<0.05);死亡组老年重症肺炎病人血清miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α水平及有呼吸系统疾病史、吸烟史、机械通气占比高于生存组(P<0.05),血清miR-124表达水平、氧分压水平低于生存组(P<0.05);miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α、机械通气是老年重症肺炎病人死亡的危险因素(P<0.05);血清miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α预测老年重症肺炎病人预后的曲线下面积(AUC)分别为0.84、0.88、0.82、0.66、0.68,其灵敏度分别为72.5%、80.4%、82.4%、60.8%、60.8%,特异度分别为85.7%、81.8%、79.2%、67.5%、72.4%。结论 老年重症肺炎病人血清miR-146a、miR-223、miR-21表达水平较高,与TNF-α水平呈正相关;miR-124表达水平较低,与TNF-α水平呈负相关。且测定血清miR-146a、miR-223、miR-21表达水平有助于临床预测老年重症肺炎病人的预后情况。

微小RNA-223对经输尿管镜碎石术后并发脓毒症的早期诊断价值

目的 观察微创治疗上尿路结石术后并发脓毒症患者微小RNA-223（miR-223）的变化并探讨miR-223对脓毒症的早期诊断价值.方法 选择2012年1月至2017年1月在杭州师范大学附属医院泌尿外科行微创治疗的上尿路结石术后患者,以术后24 h内并发脓毒症的60例患者为脓毒症组,60例未发生脓毒症者为非脓毒症组.收集患者术后24 h内血中miR-223、CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）、降钙素原（PCT）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C-反应蛋白（CRP）等临床资料.比较两组上述指标的差异.绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价miR-223、PCT和CRP对尿路结石术后并发脓毒症患者的诊断价值;采用直线相关分析法分析miR-223与CD4＋CD25＋Treg、IL-10、TNF-α 的相关性.结果 脓毒症组患者血中miR-223表达 、CD4＋CD25＋Treg、IL-10、TNF-α、PCT、CRP含量均显著高于非脓毒症组〔2ΔΔCt（×10-^4）：2.81±1.04比2.13±0.91,CD4＋CD25＋Treg（×10^-2）：17.61±4.48比8.37±2.71,IL-10（ng/L）：58.42±16.38比34.68±12.45,TNF-α（pg/L）：249.41±30.69比167.54±25.98,PCT（ng/L）：4.45±1.89比0.31±0.08,CRP（μg/L）：10.29±3.63比4.13±1.57,均P〈0.05〕;脓毒症组患者miR-223表达与CD4＋CD25＋Treg水平（r=0.367,P=0.004）和IL-10（r=0.516,P=0.006）均呈明显正相关,miR-223与TNF-α 无显著相关性（r=0.237,P〉0.05）.miR-223预测脓毒症的ROC曲线下面积（AUC）、敏感度、特异度和95%可信区间（95%CI）均高于CRP、PCT（AUC：0.923比0.547、0.769,敏感度：81.73%比71.23%、66.59%,特异度：86.00%比42.00%、83.00%,95%CI：0.862-0.979比0.351-0.679、0.682-0.927）.结论 miR-223能反映机体免疫反应状态,可以作为微创治疗上尿路结石术后并发脓毒症患者的早期诊断标志物之一.

血必净注射液辅助治疗对脓毒症患者病情及微小高迁移率族蛋白B1、微小RNA-223表达的影响

目的分析血必净注射液辅助治疗治对脓毒症患者病情转归及外周血高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、微小RNA-223(miR-223)表达的影响。方法选取我院2019年1月—10月收治的脓毒症68例,据治疗方法不同分为观察组和对照组,每组34例。对照组接受常规治疗,观察组在对照组基础上加用血必净注射液。比较2组治疗前及治疗后1 d急性生理学和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、全身感染相关器官功能衰竭评分(SOFA)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、内毒素、HMGB1、miR-223水平及不良反应情况。结果与治疗前比较,2组治疗后APACHEⅡ、SOFA评分、CRP、PCT、内毒素、血清HMGB1及miR-223表达均降低,且观察组上述指标均低于对照组(P<0.01)。2组治疗期间均未发生不良反应。结论血必净注射液辅助治疗可有效改善脓毒症患者病情,减少机体炎性因子分泌及炎症反应程度,抑制miR-223/HMGB1途径可能是其作用机制。

微小RNA-223及高迁移率族蛋白-1在脓毒症患儿中的表达及意义

目的观察脓毒症患儿血浆中微小RNA-223(mi R-223)及血清高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)的表达。方法选取49例脓毒症患儿,其中一般脓毒症24例、严重脓毒症25例,同时选取50例健康儿童作对照组,检测及比较血浆中mi R-223及血清HMGB-1的表达水平。结果严重脓毒症组、一般脓毒症组及对照组mi R-223、HMGB-1表达的差异有统计学意义(F=63.02、76.32,P<0.05)。mi R-223和HMGB-1预测脓毒症的受试者工作特征曲线(ROC)下面积分别为0.904(95%CI:0.821-0.998),0.748(95%CI:0.625-0.903)。mi R-223与HMGB-1呈正相关(r=3.532,P<0.05)。结论脓毒症患儿外周血中mi R-223及HMGB-1表达水平升高,两者联合检测对早期诊断脓毒症具有一定的临床价值。

IQGAP2、MCM7、SULT2A1、miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及相关性研究

目的探究人含IQ基元GTP酶激活蛋白2(IQGAP2)、微小染色体维持蛋白7(MCM7)、硫酸基转移酶2A1(SULT2A1)、微小RNA-223(miRNA-223)在子宫肌瘤组织中的表达及相关性。方法选取2019年1月至2020年1月收治的子宫肌瘤患者85例作为本文研究对象,取所有患者手术切除的子宫肌瘤组织、瘤旁组织标本,采用免疫组化、Western Blot法检测IQGAP2、MCM7、SULT2A1、miRNA-223在子宫肌瘤组织、瘤旁组织中表达。分析其与子宫肌瘤患者临床特征的相关性,并分析四者相关性。结果与瘤旁组织相比,子宫肌瘤组织中IQGAP2、SULT2A1表达量显著降低,MCM7、miRNA-223表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。IQGAP2、MCM7、SULT2A1、miRNA-223表达与子宫肌瘤患者年龄、肌瘤数量、肌瘤部位无关(P>0.05);IQGAP2、MCM7、SULT2A1、miRNA-223表达与子宫肌瘤患者月经情况、肌瘤直径、病理类型相关,与月经正常、肌瘤直径≤5 cm、腺肌瘤患者比较,月经异常、肌瘤直径>5 cm、平滑肌瘤患者IQGAP2、SULT2A1表达量显著降低,MCM7、miRNA-223表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示IQGAP2与MCM7呈负相关(r=-0.273,P=0.012);IQGAP2与SULT2A1呈正相关(r=0.261,P=0.016);IQGAP2与miRNA-223呈负相关(r=0.290,P=0.007);MCM7与SULT2A1呈负相关(r=-0.344,P=0.001);MCM7与miRNA-223呈正相关(r=0.342,P=0.001);SULT2A1与miRNA-223呈负相关(r=-0.249,P=0.022)。结论IQGAP2、SULT2A1在子宫肌瘤组织中表达降低,MCM7、miRNA-223表达升高,与患者月经情况、肌瘤直径、病理类型相关,且四者之间具有一定的相关性,可能共同参与此病的发展。

血小板微小RNA-223和微小RNA-21对冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗后氯吡格雷抵抗的预测价值

目的探讨血小板微小RNA(miR)-223和miR-21对冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后氯吡格雷抵抗的预测价值。方法根据血小板抑制率,将119例行PCI的冠心病患者分为氯吡格雷反应正常组(正常组)67例和氯吡格雷抵抗组(抵抗组)52例。比较两组患者的血小板miR-23和miR-21水平。采用多元logistic回归分析评估发生氯吡格雷抵抗的影响因素。采用Pearson相关分析评估血小板miR-223、miR-21水平与血小板抑制率的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血小板miR-223和miR-21水平对发生氯吡格雷抵抗的预测价值。结果抵抗组患者血小板miR-223和miR-21水平高于正常组(P<0.05)。多元logistic回归分析结果显示,血小板miR-223和miR-21水平升高是冠心病患者PCI后发生氯吡格雷抵抗的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,行PCI的冠心病患者血小板miR-223和miR-21水平与血小板抑制率均呈负相关(P<0.05)。血小板miR-223和miR-21预测冠心病患者PCI后发生氯吡格雷抵抗的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.69(95%CI 0.53~0.78)、0.64(95%CI 0.51~0.69);血小板miR-223联合miR-21的AUC为0.85(95%CI 0.77~0.94)。结论PCI后发生氯吡格雷抵抗的冠心病患者血小板miR-223和miR-21水平升高,且与血小板抑制率呈负相关,可用于预测氯吡格雷抵抗的发生风险。

阿米卡星调控微小RNA-223对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞凋亡以及肿瘤坏死因子α、白细胞介素6表达的影响

目的 探讨阿米卡星对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6表达的影响和分子机制。方法 该研究于2020年1—7月完成,采用LPS诱导肺泡上皮细胞,构建急性肺损伤细胞模型。将肺泡上皮细胞分为对照组、模型组(LPS处理24 h)、实验组(由LPS和不同剂量的阿米卡星处理24 h)、anti-miR-NC组(转染微小RNA阴性对照后进行LPS处理)、anti-miR-223组(转染微小RNA-223抑制剂后进行LPS处理)、实验3+miR-NC组(转染微小RNA阴性对照后进行LPS和15μg/L阿米卡星处理)、实验3+miR-223组(转染微小RNA-223激动剂后进行LPS和15μg/L阿米卡星处理)。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blotting)检测兔源裂解的胱天蛋白酶3(cl-caspase3)表达。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α和IL-6含量。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-223(微小RNA-223)表达。结果 与对照组比较,模型组肺泡上皮细胞凋亡率(25.81±1.82)%、cl-caspase3(0.81±0.06)和miR-223表达(0.17±0.02)、细胞上清液中TNF-α(793.92±34.49)ng/L和IL-6含量(412.04±23.94)ng/L升高(P <0.05)。与模型组比较,实验组肺泡上皮细胞凋亡率(22.07±1.69)%、cl-caspase3(0.68±0.05)和miR-223表达(0.28±0.03)、细胞上清液中TNF-α(478.38±25.85)ng/L和IL-6含量(202.95±15.55)ng/L降低(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-223组肺泡上皮细胞凋亡率(10.12±1.13)%、cl-caspase3(0.27±0.03)和miR-223表达(1.69±0.08)、细胞上清液中TNF-α(403.48±29.94)ng/L和IL-6含量(166.35±15.61)ng/L降低(P<0.05)。与实验3+miR-NC组比较,实验3+miR-223组肺泡上皮细胞凋亡率(24.03±1.64)%、cl-caspase3(0.75±0.06)和miR-223表达(4.67±0.22)、细胞上清液中TNF-α(726.18±33.57)ng/L和IL-6含量(385.07±22.15)ng/L升高(P<0.05)。结论 阿米卡星对LPS诱导的肺泡上皮细胞具有明显的抗炎和抗凋亡作用,其机制可能与抑制miR-223表达有关。

微小RNA-223对急性脑梗死大鼠神经功能保护作用的研究

目的探讨微小RNA(miR)-223对急性脑梗死大鼠神经保护作用。方法清洁级雄性健康SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、对照序列组(NC组)和miR-223模拟物组(miR组),每组12只,构建缺血-再灌注大鼠模型,S组于缝皮后10 min时经侧脑室注入10μL的0.9%氯化钠注射液,M组、NC组和miR组于恢复血流灌注前15 min,以同样的方法分别将等量0.9%氯化钠注射液、含5 nmol对照序列或miR-223模拟物的0.9%氯化钠注射液注入。分别于建模后和建模7 d时,采用Zea-Longa评分标准对各组大鼠神经功能评分,酶联免疫吸附试验检测血清中炎症因子水平,TUNEL法检测脑组织中细胞凋亡,实时荧光定量PCR术检测脑组织中miR-223表达。结果M组、NC组和miR组大鼠建模后和建模7 d时神经功能评分均高于S组(F=83.943、87.410,P<0.01),miR组大鼠建模7 d时神经功能评分低于M组和NC组(P<0.01);与S组相比,M组、NC组和miR组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平升高(F=16.085、52.672、27.393,P<0.01),与M组和NC组相比,miR组大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05);M组、NC组和miR组大鼠脑组织中细胞凋亡指数均高于S组(F=461.821,P<0.01),miR组大鼠脑组织中细胞凋亡指数低于M组和NC组(P<0.05);M组和NC组大鼠脑组织中miR-223表达量低于S组,而miR组高于S组,差异有统计学意义(F=328.334,P<0.01)。结论miR-223可能对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经功能有保护作用,机制可能与其抑制炎症反应而减少细胞凋亡有关。

肾透明细胞癌患者外周血中微小RNA-223的表达及临床意义

目的探讨肾透明细胞癌(ccRCC)患者外周血微小RNA-223(miR-223)的表达及其与临床病理参数的关系。方法收集40例ccRCC患者术前及术后7 d外周血标本为实验组,收集80例健康人群外周血标本为对照组。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)仪器检测miR-223在实验组与对照组中的表达水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价外周血中的miR-223表达水平诊断ccRCC的价值。分析ccRCC患者外周血miR-223表达水平与患者病理特征的关系。结果本研究结果显示,ccRCC患者术前外周血中miR-223的表达量为(0.568±0.047),显著高于健康人群的(0.231±0.037)(P<0.05);ccRCC患者术后7 d外周血中miR-223的表达量为(0.324±0.041),较术前外周血中miR-223表达量降低,但仍显著高于健康人群(P<0.05)。同时,miR-223在外周血中的表达与肿瘤TNM分期、肿瘤大小、肿瘤分化程度有显著相关性(P<0.05),与年龄、性别、有无淋巴结转移无显著相关性(P>0.05)。外周血中miR-223的表达在区分ccRCC患者和健康人群中具有较高诊断价值,其ROC曲线下面积为0.893。结论在ccRCC患者外周血中,miR-223呈高表达,且与肿瘤的临床病理特征有一定相关性,对患者术后的复查及预后判断亦有一定的价值。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

外周血微RNA-223、Nod样受体蛋白3水平与心绞痛病人冠状动脉钙化的关系

目的检测心绞痛病人外周血微RNA-223(miR-223)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)水平并探究其与冠状动脉钙化及严重程度的关系。方法回顾性选取2019年12月至2021年12月在河北中石油中心医院接受治疗286例心绞痛病人,入院进行CT心脏冠状动脉成像检查,根据有无冠状动脉钙化将其分为非钙化组(70例)及钙化组(216例)。再根据病人冠状动脉钙化积分为轻度钙化组、中度钙化组及重度钙化组。以荧光定量PCR方法检测外周血miR-223水平。以酶联免疫吸附法检测外周血NLRP3水平。Pearson相关性分析外周血miR-223、NLRP3水平及二者与高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的相关性。Spearman相关分析miR-223、NLRP3与冠脉狭窄程度(Gensini)积分的相关性。多因素logistic回归分析影响冠状动脉钙化发生的危险因素。结果钙化组NLRP3、hs-CRP、Gensini积分水平[(74.12±7.36)ng/L、(3.67±1.35)mg/L、(40.95±5.23)分]明显高于非钙化组[(55.12±6.78)ng/L、(3.15±1.12)mg/L、(13.05±2.59)分](P<0.05),miR-223水平(0.52±0.11)低于非钙化组(0.98±0.32)(P<0.05);轻度、中度、重度钙化组NLRP3水平[(65.42±6.45)ng/L、(72.49±7.23)ng/L、(87.79±8.75)ng/L]、Gensini积分[(31.33±4.42)分、(41.82±5.63)分、(52.69±5.80)分]依次升高(P<0.05),miR-223水平[(0.72±0.15)、(0.51±0.12)、(0.28±0.06)]依次降低(P<0.05);Pearson相关性分析显示,NLRP3与hs-CRP水平、Gensini积分呈正相关(P<0.05),miR-223与NLRP3、hs-CRP、Gensini积分水平呈负相关;行多因素logistic回归分析显示,NLRP3、hs-CRP、合并糖尿病、miR-223为影响冠状动脉钙化的独立危险因素(P<0.05)。结论心绞痛病人外周血NLRP3呈高表达,miR-223呈低表达,与疾病严重程度及炎症反应关系密切,为影响冠状动脉钙化发生的危险因素。

微小RNA-223在脓毒症患儿血浆中表达的临床意义

目的 观察脓毒症患儿血浆中微小RNA-223（miR-223）的表达变化,探讨其与脓毒症的关系.方法 选取35例脓毒症患儿为研究对象（脓毒症组）,其中22例为严重脓毒症.同时选取20例术后全身炎症反应综合征（SIRS）患儿（SIRS组）和15例健康儿童（健康对照组）作对照,通过实时荧光定量PCR （RT-PCR）法检测血浆中miR-223的表达水平.受试者工作特征（ROC）曲线评价血浆miR-223、降钙素原（PCT）和CRP等指标对脓毒症的预测价值.结果 各组儿童年龄、性别之间无明显差异.脓毒症组和SIRS组血浆miR-223的表达水平均较健康对照组显著升高（P均＜0.05）,脓毒症组血浆miR-223表达水平较SIRS组显著升高（P＜0.05）.严重脓毒症患儿血浆miR-223的表达水平较一般脓毒症患儿显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.miR-223和PCT、CRP预测脓毒症的ROC曲线下面积分别为0.919（95％ CI：0.851 ～0.988）,0.796（95％ CI：0.679 ～0.912）,0.531 （95％ CI：0.363～0.698）.结论 脓毒症患儿血浆中miR-223表达水平升高,可以作为脓毒症的早期诊断和判断炎症严重程度的标志物之一.

微小RNA-223及其标靶基因c-myc在肝癌发病中的作用

目的探讨微小RNA－223（miR－223）对原癌基因c-myc的调控及其在肝癌发病中的作用。方法通过实时定量聚合酶链反应和Westernblot检测正常肝脏组织、癌旁组织、肝癌组织及肝癌HepG2细胞、胎肝L02细胞中miR-223和c-myc的mRNA和蛋白质表达水平。构建miR－223模拟物（mimics）上调肝癌细胞HepG2中miR－223表达后，实时定量聚合酶链反应和Westernblot检测HepG2细胞中c-myc表达水平的变化。分别用独立样本t检验和单因素方差分析进行两组及多组数据间的比较，P〈0．05为差异有统计学意义。结果miR-223在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0．055±0．015、0．030±0．008和0．020±0．016，肝癌组织低于正常肝组织（t=-0．031，P〈0．05）。miR-223在HepG2细胞中的表达较L02细胞下调（0．005±0．003比0．011±0．006，t=12．74，P〈0．01）。c-mycmRNA在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0．029±0．023、0．136±0．071和0．425±0．026，肝癌组织高于正常肝组织（t=-0．317，P〈0．05）；c-myc蛋白在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0．137±0．015、0．299±0．033和0．439±0．027，差异有统计学意义（F=103．35，P〈0．01）。miR-223mimics转染HepG2细胞后，c-myc蛋白在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0．423±0．041、0．116±0．015和0．432±0．034，转染组较其他两组明显降低（F=94．93，P〈0．05）。结论miR-223在肝癌组织中表达下调，丧失其对c-myc表达的抑制而导致c-myc异常高表达可能是肝癌发生的重要机制。