微小RNA-451在小细胞性贫血及慢性感染贫血儿童血清中的表达及临床意义

目的 分析微小RNA-451(miR-451)在小细胞性贫血及慢性感染贫血儿童血清中的表达情况,探讨miR-451与红细胞相关参数的相关性及其对儿童贫血的诊断价值。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测小细胞性贫血组(n=80)、慢性感染贫血组(n=80)、健康对照组(n=80)儿童血清miR-451表达水平;采用Pearson相关分析法探讨血清miR-451与红细胞相关参数[红细胞分布宽度(RDW)、红细胞(RBC)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞体积(MCV)]的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-451对小细胞性贫血、慢性感染贫血、贫血严重程度的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析探讨儿童发生小细胞性贫血、慢性感染贫血的影响因素。结果 小细胞性贫血组、慢性感染贫血组儿童血清miR-451表达水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-451与RDW呈负相关(r=-0.388,P<0.05),与Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV分别呈正相关(r=0.402、0.393、0.391、0.360、0.323,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-451诊断小细胞性贫血、慢性感染贫血的曲线下面积分别为0.718、0.735,诊断价值高于红细胞相关参数RDW、Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,体质量指数、RDW、Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV、miR-451均为儿童发生小细胞性贫血、慢性感染贫血的影响因素(P<0.05)。随着儿童贫血程度的加重,血清miR-451表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-451水平对儿童贫血严重程度具有较高的诊断价值。结论 miR-451在小细胞性贫血、慢性感染贫血儿童血清中表达降低,且其表达水平与红细胞相关参数水平存在相关性,血清miR-451对小细胞性贫血、慢性感染贫血和贫血严重程度均具有较高的诊断价值。

高血压合并焦虑病人血清微RNA-451a、胰岛素样生长因子-1受体表达水平与焦虑程度的关系

目的探讨高血压合并焦虑病人血清微RNA-451a(miR-451a)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF1R)表达水平与焦虑程度的关系。方法选取2020年2月至2022年1月在汉中市中心医院进行治疗的高血压病人160例,根据临床诊断和汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评估将病人分为高血压组60例、高血压合并轻度焦虑情绪组48例、高血压合并中度焦虑情绪组32例和高血压合并重度焦虑情绪组20例,收集整理所有病例的临床基础资料。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-451a表达水平、ELISA法检测血清IGF1R表达水平;比较分析高血压病人和高血压合并焦虑情绪病人的临床病理特征;采用Pearson法分析HAMA评分与血清miR-451a、IGF1R表达水平的相关性;采用logistic回归分析高血压合并焦虑的影响因素。结果高血压组、轻度焦虑、中度焦虑和重度焦虑组病人血清miR-451a水平依次降低(0.88±0.30,0.59±0.14,0.48±0.11,0.38±0.09),IGF1R水平依次升高[(2.14±0.60)μg/L,(2.66±0.62)μg/L,(3.08±0.66)μg/L,(3.51±0.74)μg/L];血清miR-451a水平与HAMA评分呈负相关(r=−0.50,P<0.05),血清IGF1R水平与HAMA评分呈正相关(r=0.43,P<0.05);高血压合并焦虑组收缩压[(142.26±18.51)mmHg,(135.29±17.84)mmHg]、舒张压[(84.25±11.30)mmHg,(78.23±10.25)mmHg]、C-反应蛋白[(4.47±0.96)mg/L,(4.16±0.91)mg/L]、IL-6水平[(36.95±6.31)μg/L,(27.48±5.49)μg/L]显著高于高血压组,IL-10水平[(12.34±3.26)ng/L,(16.24±3.91)ng/L]显著低于高血压组(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,收缩压[OR 95%CI=1.33(1.06,1.67)]、舒张压[OR 95%CI=1.20(1.00,1.45)]、IL-6[OR 95%CI=1.89(1.22,2.93)]、IL-10[OR 95%CI=0.38(0.17,2.93)]、miR-451a[OR 95%CI=0.01(0.00,0.47)]、IGF1R[OR 95%CI=7.62(1.21,48.03)]水平为高血压合并焦虑的影响因素(P<0.05)。结论高血压合并焦虑病人血清中miR-451a低表达,IGF1R高表达,且与病人焦虑程度密切相关。

装载miRNA-451a的外泌体对肝癌细胞株增殖的影响研究

目的探讨装载miRNA451a的外泌体对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721增殖的影响。方法正常肝组织上皮细胞株HL-7702来源的外泌体,通过与胆固醇基修饰的miRNA-451a模拟物直接孵育构建外泌体451a复合体。将构建的exo-miRNA-451a复合体、等量miRNA-451a模拟物、等量PBS分别接种于96孔板中处于对数生长期的HPG2和SMMC-7721细胞,作为实验组、对照组和空白对照组。采用激光共聚焦显微镜观察exo-miRNA-451a复合体进入细胞内的情况;CCK8法检测HPG2和SMMC-7721细胞增殖。结果构建的外泌体miRNA-451a复合体分别与HepG2和SMMC-7721细胞,共培养3h时,在共聚焦显微镜下,有PKH67标记的外泌体和Cy3标记的miRNA-451a在HepG2和SMMC-7721细胞中共定位,并且在随后的6h、12h观察时逐渐增多。CCK-8实验提示当外泌体451a复合体和miR-451a模拟物分别与肝癌细胞株共孵育6h,OD值差异不明显;共孵育12h实验组OD值低于对照组,共培养48h实验组OD值显著低于对照组。结论装载miRNA-451a的外泌体可抑制肝癌细胞株的增殖。

微小RNA-451a通过巨噬细胞迁移抑制因子/腺苷酸激活蛋白激酶信号通路改善脓毒症大鼠肺损伤的作用机制研究

目的 探讨微小RNA-451a(miR-451a)通过巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路改善脓毒症大鼠肺损伤的作用机制。方法 采用随机数表法选取40只大鼠为造模组,其余10只大鼠为假手术组。造模组大鼠采用结扎盲肠法制备脓毒症模型后,再随机分为模型组、miR-451a agomir组、agomir-NC组和MIF抑制剂(ISO-1)组,每组各10只。miR-451a agomir组、agomir-NC组、ISO-1组分别由尾静脉注射2 mg/kg miR-451a agomir、2 mg/kg agomir-NC、1 mg/kg ISO-1干预,假手术组、模型组大鼠均注射等体积的生理盐水,每4 h注射1次、连续干预48 h。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清和肺组织中miR-451a、MIF mRNA表达水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。采用HE染色观察肺组织病理学变化。采用TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况。采用Western blot检测肺组织MIF、AMPK、p-AMPK蛋白表达水平。采用双荧光素酶实验验证miR-451a与MIF的关系。结果 与假手术组相比,造模组大鼠血清中miR-451a表达水平降低,MIF mRNA表达水平升高(P<0.05)。模型组、agomir-NC组大鼠肺组织细胞凋亡率及TNF-α、IL-6水平均高于假手术组、miR-451a agomir组及ISO-1组(P<0.05)。模型组、agomir-NC组大鼠肺组织p-AMPK/AMPK、miR-451a蛋白表达水平均低于假手术组、miR-451a、agomir组及ISO-1组,MIF及MIF mRNA蛋白表达水平均高于假手术组、miR-451a agomir组及ISO-1组(P<0.05)。miR-451a mimics+MIF WT组细胞荧光素酶活性低于mimics-NC+MIF WT组(P<0.05)。结论 上调miR-451a的表达可减轻脓毒症大鼠病理损伤,改善炎性浸润及细胞凋亡状况,可能与靶向抑制MIF、激活AMPK通路有关。

CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨细胞角蛋白19抗原21-1(CYFRA21-1)、细胞周期蛋白E(CyclinE)、微小RNA-451(miRNA-451)在膀胱癌中的表达及意义。方法选取郑州大学附属郑州中心医院2021年1月至2023年1月收治的60例膀胱癌患者作为膀胱癌组,选取同期60例泌尿系良性疾病患者作为良性疾病组,60例健康体检者作为对照组。比较三组研究对象CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451水平,比较不同临床特征膀胱癌患者CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451水平,ROC曲线分析CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451单独及联合检测诊断膀胱癌的价值。结果膀胱癌组CYFRA21-1、CyclinE水平高于良性疾病组和对照组,良性疾病组高于对照组;膀胱癌组miRNA-451低于良性疾病组和对照组,良性疾病组低于对照组;不同肿瘤分期膀胱癌患者CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451联合检测诊断膀胱癌的AUC值高于单项检测,差异有统计学意义(ZCYFRA21-1~联合检测=3.400,ZCyclinE~联合检测=3.581,ZmiRNA-451~联合检测=3.279,P<0.05)。结论膀胱癌患者中CYFRA21-1、CyclinE呈高表达,miRNA-451呈低表达,其表达与肿瘤分期有关,CYFRA21-1、CyclinE、miRNA-451联合检测有助于早期诊断膀胱癌。

微小RNA-451对结肠癌细胞侵袭能力的影响

目的研究微小RNA-451(miR-451)对结肠癌细胞系SW480侵袭能力的影响。方法用荧光染料标记的siRNA片段转染,优化转染条件,观察转染效率;通过化学方法合成miR-451 mimics,以脂质体包裹转染SW480细胞,并设单独脂质体转染组、无关序列转染组、未处理组(对照组),采用细胞计数试剂盒-8检测miR-451对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-451对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-451对细胞侵袭能力的影响。结果化学合成的miR-451 mimics(100 nM)转染对结肠癌细胞系SW480的增殖和凋亡无明显影响,但对SW480的侵袭能力有抑制作用。结论转染miR-451 mimics能抑制结肠癌细胞系SW480的侵袭能力。

甲状腺乳头状癌病人血清微小RNA-451的检测及其诊断价值的研究

目的探讨甲状腺乳头状癌病人血清中微小RNA-451的表达及其对甲状腺乳头状癌的诊断意义。方法36例甲状腺乳头状癌病人为研究组,37例甲状腺良性肿瘤病人为对照组,实时荧光定量PCR检测两组病人血清中微小RNA-451的相对表达量,比较两组之间血清微小RNA-451的表达差异,分析甲状腺乳头状癌病人血清微小RNA-451的表达与不同临床病理特征之间的关系,通过ROC工作曲线分析血清微小RNA-451对甲状腺乳头状癌的诊断意义。结果甲状腺乳头状癌病人血清微小RNA-451的表达为(1.09±0.27),明显低于甲状腺良性肿瘤病人的(1.31±0.23);甲状腺乳头状癌淋巴结有转移病人的血清微小RNA-451表达为(0.92±0.17),明显低于淋巴结无转移病人的(1.28±0.22),差异均有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线分析,血清微小RNA-451诊断甲状腺乳头状癌的曲线下面积(AUC)为0.720;在判断其对淋巴结转移诊断作用时的AUC为0.873。结论甲状腺乳头状癌病人血清中的微小RNA-451呈低表达,尤其是在淋巴结有转移病人中的表达更低,提示其对甲状腺乳头状癌的术前诊断及淋巴结转移状态有一定的意义。

探讨微小RNA-451(miR-451)的表达与胃癌的临床病理特征及预后之间的关系

目的探讨微小RNA-451(mi R-451)的表达与胃癌的临床病理特征及预后之间的关系。方法选取该院于2014年6月—2016年8月期间收治的32例胃癌患者当作研究对象。收集这32例患者的胃癌组织标本与癌旁正常组织标本。应用原位杂交技术,对微小RNA-451(mi R-451)在胃癌组织、癌旁正常组织之中的表达情况。探讨分析胃癌组织中微小RNA-451(mi R-451)的表达水平,并分析胃癌的临床病理特征及预后之间的关系。结果微小RNA-451(mi R-451)在胃癌组织中的高表达率为36.11%,明显低于癌旁正常组织的77.78%;III^IV期胃癌患者的微小RNA-451(mi R-451)高表达率为47.62%,明显低于I^II期胃癌患者的86.67%;有淋巴结转移者的微小RNA-451(mi R-451)高表达率为47.06%,明显低于无淋巴结转移者的78.95%;微小RNA-451(mi R-451)高表达者的生存率为69.23%,明显高于微小RNA-451(mi R-451)低表达者的39.13%;上述差异有统计学意义(P<0.05)。结论微小RNA-451(mi R-451)与胃黏膜组织的恶性病变、胃癌组织浸润转移、预后具有明显的相关性,可能是胃癌的新治疗靶点。

LncRNA SNHG15通过调控miRNA-451a促进乳腺癌细胞的上皮间质转化研究

目的:研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因15(LncRNA SNHG15)与miRNA-451a对乳腺癌细胞的生物学活性的影响。方法:qRT-PCR法检测SNHG15、miRNA-451a及趋化因子受体4(CXCR4)在乳腺癌耐药细胞SKBR3-PR中的表达情况;细胞划痕实验检测干扰SNHG15及miRNA-451a抑制剂对SKBR3-PR的细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测对细胞凋亡情况的影响;Western blotting实验检测CXCR4、上皮间质转化(EMT)相关蛋白Vimentin、Snail水平表达。结果:相比于亲本细胞,乳腺癌耐药细胞株中SNHG15表达量上调,但差异无统计学意义(P>0.05),miRNA-451a表达量下降(P<0.05),CXCR4表达量上调(P<0.01);划痕实验结果显示SNHG15促进细胞的迁移(P<0.01),miRNA-451a可抑制细胞迁移(P<0.01);细胞凋亡实验结果表明SNHG15抑制细胞凋亡(P<0.01),miRNA-451a促进细胞凋亡(P<0.01);Western blotting表明干扰SNHG15后,EMT相关蛋白Snail和CXCR4表达水平下降,miRNA-451a抑制剂组Snail和CXCR4表达水平上升(P<0.01),Vimentin表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA SNHG15可能通过调控miRNA-451a促进乳腺癌细胞的迁移、凋亡,并且潜在调控CXCR4诱导乳腺癌细胞的EMT。

血清微小RNA-451a表达对弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗效果的预测价值

目的探究血清微小RNA-451a(miR-451a)表达对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者化疗效果的预测价值。方法选取广东药科大学附属第一医院2017年2月至2019年2月收治的78例DLBCL患者,根据化疗效果分为化疗有效组(53例)和化疗无效组(25例)。同时选取53例相同年龄段体检健康者为对照组。分别收集DLBCL患者化疗前后的血清样本以及对照组的血清样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测血清中miR-451a的表达水平。采用受试者工作特征曲线评估miR-451a对DLBCL患者化疗效果的预测价值。结果DLBCL患者化疗前血清miR-451a表达量明显低于对照组[(0.69±0.27)比(1.86±0.65)](P<0.05)。化疗有效组DLBCL患者化疗后血清miR-451a表达量较化疗前明显上升[(1.46±0.63)比(0.81±0.36)](P<0.05)。DLBCL患者化疗前血清miR-451a表达与Ann Arbor分期和国际预后指数评分有关(均P<0.05)。血清miR-451a预测DLBCL患者化疗是否有效的曲线下面积为0.816,敏感度为83.0%、特异度为84.0%,最佳截断值为0.72。结论DLBCL患者血清中miR-451a表达下调,且与Ann Arbor分期和国际预后指数评分有关,在评估患者化疗效果方面有一定的应用价值。

宫颈鳞癌组织中miRNA-451、c-myc、E-cadherin、Vimentin的表达变化及其意义

目的观察宫颈鳞癌组织中微小RNA-451(miRNA-451)、c-myc及EMT分子标记物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]的表达变化,并探讨其意义。方法选取宫颈鳞癌组织61例份、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织30例份、正常宫颈组织20例份,采用原位杂交法检测miRNA-451,免疫组化法检测c-myc、E-cadherin、Vimentin,分析miRNA-451、c-myc、E-cadherin、Vimentin之间及其与宫颈鳞癌临床病理参数的关系。结果宫颈鳞癌、CIN、正常宫颈组织中miRNA-451阳性率分别为16.4%、36.7%、80.0%,c-myc阳性率分别为88.5%、60.0%、10.0%,E-cadherin阳性率分别为55.7%、70.0%、95.0%,Vimentin阳性率分别为67.2%、46.7%、20.0%,两两比较,P均<0.05。miRNA-451阳性表达与宫颈鳞癌病理分型、淋巴结转移有关,c-myc阳性表达与宫颈鳞癌临床分期、年龄有关,E-cadherin、Vimentin阳性表达均与宫颈鳞癌临床分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。宫颈鳞癌组织中,miRNA-451与E-cadherin表达呈正相关(r=0.305,P<0.05),与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.351,P<0.05);c-myc与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.321,P<0.05),与Vimentin表达呈正相关(r=0.406,P<0.05);miRNA-451与c-myc表达呈负相关(r=-0.257,P<0.05)。结论宫颈鳞癌组织中miRNA-451表达降低,c-myc表达升高,均与EMT进程有关,miRNA-451的丢失可能导致c-myc过表达,两者可能参与宫颈鳞癌的发生发展。

microRNA-451在肝癌患者血浆中的表达及意义

目的探讨micro RNA-451(mi R-451)在肝癌患者血浆中的表达水平及其临床意义。方法选择2015年3~10月在枣庄矿业集团中心医院住院治疗的42例肝癌患者和42例健康体检者作为研究对象,利用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血浆中mi R-451的表达水平,分析肝癌患者血浆中mi R-451表达水平与临床病理参数的关系。结果 mi R-451在肝癌患者血浆中表达水平(0.43±0.16)明显低于对照组(0.59±0.21),差异有高度统计学意义(P<0.01);肝癌患者血浆中mi R-451水平在不同性别、年龄、分化程度及甲胎蛋白水平间差异无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤大小、淋巴转移、静脉侵犯、肿瘤数量及TNM分期明显相关(P<0.05)。结论肝癌患者血浆中mi R-451表达水平降低,可能参与了肝癌的发病过程。

miR-451a在肺结核患者血清中的表达水平及临床意义

目的 探讨活动性肺结核(ATB)患者血清微小RNA(miR)-451a、Toll样受体4(TLR4)表达水平与其预后的关系。方法 将350例肺结核患者根据诊断情况分为ATB组(162例)与非ATB组(NATB组,188例),另选180例健康体检者纳入对照组。ATB组依据预后分为预后良好组(120例)与预后不良组(42例)。检测血清miR-451a、TLR4 mRNA水平,分析ATB患者预后影响因素,Pearson法分析miR-451a与TLR4 mRNA相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-451a、TLR4 mRNA预测ATB患者预后的效能。结果 对照组、NATB组、ATB组血清miR-451a水平依次降低、TLR4 mRNA水平依次升高(均P<0.05)。ATB组血清miR-451a与TLR4 mRNA水平呈负相关(r=-0.519,P<0.05),血清miR-451a与C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)呈负相关(r=-0.404、-0.377、-0.435、-0.391,P<0.05),血清TLR4 mRNA与CRP、ESR、IFN-γ、IL-12呈正相关(r=0.469、0.361、0.442、0.384,P<0.05)。预后不良组血清miR-451a水平低于预后良好组,血清TLR4 mRNA水平高于预后良好组(P<0.05)。回归分析显示,TLR4 mRNA、miR-451a是ATB患者预后影响因素(P=0.001、0.009)。血清miR-451a联合TLR4 mRNA预测ATB患者预后不良的ROC曲线下面积(AUC)为0.949,优于单独检测miR-451a、TLR4 mRNA的0.852、0.821(P<0.05)。结论 ATB患者血清miR-451a水平降低、TLR4 mRNA水平升高,与炎症反应及预后密切相关,miR-451联合TLR4 mRNA对预后预测价值较高。

lncRNA CRNDE通过调控miR-451对乳头状甲状腺癌细胞恶性行为的影响

目的探讨长链非编码RNA结直肠肿瘤差异表达基因(lncRNA CRNDE)对乳头状甲状腺癌(PTC)恶性进展中的生物学功能及其潜在调节机制。方法收集2019年7月至2021年1月在江苏大学附属人民医院行甲状腺切除手术的30例PTC患者的癌和癌旁组织标本,另外选择人甲状腺癌细胞系(TPC-1和BCPAP)和人甲状腺正常细胞(Nthy-ori 3-1)作为靶细胞。实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测PTC癌和癌旁组织及细胞系中lncRNA CRNDE和微小RNA(miR)-451的表达。将TPC-1和BCPAP细胞随机分为对照(Ctrl)组,lncRNA CRNDE过表达(lncRNA CRNDE-OE)组和lncRNA CRNDE敲除(lncRNA CRNDE-siRNA)组。CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell法检测细胞侵袭和迁移;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达;荧光素酶报告实验分析lncRNA CRNDE与miR-451基因的靶向关系。结果与癌旁组织相比,癌组织中lncRNA CRNDE表达增多,miR-451表达降低(P<0.001);与Nthy-ori 3-1细胞相比,TPC-1和BCPCP细胞中lncRNA CRNDE表达上调,miR-451表达下调(P<0.001)。与Ctrl组相比,lncRNA CRNDE-OE组BCPAP和TPC-1细胞存活率,侵袭率和迁移率均升高,细胞凋亡率降低,E-cadherin蛋白表达减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达升高,miR-451表达降低(P<0.01);而lncRNA CRNDE-siRNA组细胞存活率,侵袭率和迁移率均降低,细胞凋亡率升高,E-cadherin蛋白表达增多,N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P<0.01);双荧光素酶报告实验显示,lncRNA CRNDE与miR-451具有明显的靶向关系。结论PTC癌组织中lncRNA CRNDE高表达,可能通过靶向抑制miR-451表达促进PTC细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化发生,并抑制细胞凋亡。

lncRNA NEAT1促进miR-451a表达抑制AngⅡ诱导的高血压致血管重构

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)-核富集丰度转录物1(NEAT1)调控微小RNA-451a(miR-451a)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压致血管重构的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分作control组、model组、shRNA组、sh-NEAT1组、sh-NEAT1+inhibitor NC组、sh-NEAT1+miR-451a inhibitor组,15只/组;除control组外其余小鼠皮下埋入AngⅡ微量泵建立高血压模型,并于2周后尾静脉分别注射相应剂量shRNA、sh-NEAT1、inhibitor NC及miR-451a inhibitor慢病毒液,control组及model组注射等剂量PBS。检测小鼠血压;qRT-PCR检测胸主动脉组织lncRNA NEAT1及miR-451a表达;HE染色及Masson染色分别观察胸主动脉组织病理学及胶原纤维分布情况;免疫组化法观察胸主动脉组织Ki-67的表达;Western blot检测胸主动脉组织I型胶原蛋白(Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(Col3)表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1与miR-451a的靶向关系。结果:与control组比,model组小鼠收缩压(SBP)、胸主动脉组织lncRNA NEAT1表达、中膜厚度(MT)/主动脉管腔内径(LD)、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著增加,miR-451a表达显著减少(P<0.05);与shRNA组相比,sh-NEAT1组SBP、lncRNA NEAT1表达、MT/LD、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著降低,miR-451a表达显著增加(P<0.05);与sh-NEAT1+inhibitor NC组相比,sh-NEAT1+miR-451a inhibitor组SBP、MT/LD、胶原沉积、Ki-67阳性表达、Col1、Col3蛋白表达显著增加(P<0.05),miR-451a表达显著减少(P<0.05),lncRNA NEAT1表达无明显变化(P<0.05);lncRNA NEAT1与miR-451a间存在靶向关系。结论:lncRNA NEAT1沉默对AngⅡ所致高血压大鼠血管重构的改善可能与其促进miR-451a表达有关。

微小RNA-451靶向调节钙结合蛋白39对MSCs成骨分化的促进效应

目的探讨微小RNA-451(micro RNA-451,miRNA-451)靶向调节钙结合蛋白39(calcium binding protein 39,CAB39)表达,促进MSCs向成骨细胞分化的效应。方法选择pMIR-report质粒及pRL-TK质粒,通过双荧光素酶基因报告系统,鉴定CAB39是否为miRNA-451的靶基因。将pre-miRNA-451(A组)及anti-miRNA-451(C组)分别转染到C3H10T1/2细胞中,同时设置相应的pre-miRNA阴性对照组(B组)和anti-miRNA阴性对照组(D组);成骨诱导培养7、14 d,采用实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP mRNA相对表达量;诱导培养14 d,采用Western blot检测细胞中CAB39蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况。结果经鉴定,CAB39是miRNA-451的靶基因。实时荧光定量PCR检测示,成骨诱导培养7、14 d,A组Runx2、ALP mRNA相对表达量显著高于B组,C组显著低于D组,差异均有统计学意义(P<0.05)。成骨诱导培养14 d,Western blot检测示A组CAB39蛋白表达量为0.55±0.05,较B组1.00±0.07明显降低;而C组为1.21±0.05,较D组1.00±0.04明显增高;差异均有统计学意义(P<0.05)。茜素红染色示A组细胞外钙基质沉积较B组明显增多,而C组细胞外钙基质沉积较D组明显减少。结论 miRNA-451可通过抑制CAB39表达,促进MSCs成骨分化。

微小RNA-451靶向巨噬细胞游走抑制因子调控甲状腺癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨微小RAN（miR）-451靶向巨噬细胞游走抑制因子（MIF）对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法反转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测甲状腺癌组织及滤泡状（PTC-133）、乳头状（K1）及未分化（8505C）甲状腺癌细胞株中miR-451的mRNA表达；miR—NC、miR-451模拟物（mimics）、miR-451抑制物（inhibitor）转染K1甲状腺癌细胞，Western blot检测MIF蛋白表达，3组共转染组miR-NC＋miR-451、Wt—MIF＋miR-451mimics、Mut-MIF＋miR-451mimics转染K1甲状腺癌细胞，检测荧光素酶活性，以此证实MIF是否为miR-451靶基因；后续实验分为miR—NC、miR-451mimics、miR-451mimics＋pcDNA3．1-MIF及miR—NC＋pcDNA3．1-MIF4组，各组细胞培养48h后，细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3）、磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达。结果甲状腺癌组织中miR-451的mRNA表达（0．889±0．367）显著低于癌旁组织（6．214±0．884）（t=28．883，P=0．004），甲状腺癌细胞中K1细胞的表达最低，选择作为后续研究；MIF是miR-451的靶基因；与miR-NC组比较P13K（0．562±0．051）；p-Akt（0．134±．022）；CleavedCaspase-3（0．052±0．014）；细胞凋亡率（5．16±0．77）％，miR-451mimics和nliR-451mimics＋pcDNA3．1-MIF组P13K（0．133±0．021、0．223±0．026）、p—Akt（0．034±0．011、0．062±0．013）蛋白表达显著降低（与miR-451mimics组比较：tPI3K=30．157，P=0．003；tp-Akt=46．626，P=0．001。结论MIF是miR-451的靶基因，miR-451可通过靶向MIF抑制P13K／Akt信号通路抑制K1甲状腺癌细胞增殖及促进细胞凋亡。

微小RNA-451表达和胃癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨微小RNA-451（miR-451）的表达与胃癌的临床病理特征及预后之间的关系。方法收集107例胃癌患者的病理及随访资料，应用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）方法检测肿瘤标本及癌旁组织的miR-451的表达量。然后分析miR-451的表达量和胃癌患者的各项病理特征，及预后之间的关系。结果与癌旁组织比较，胃癌组织内miR-451表达量降低（0．010±0．007比0．014±0．008，P〈0．05）；与无淋巴结转移的胃癌患者比较，淋巴结转移者癌组织miR-451表达量降低（0．008±0．006比0．013±0．006，P〈0．05）；与miR-451表达上调的胃癌患者比较，miR-451表达下调者生存时间缩短（中位生存时间45个月比60个月，P〈0．05）。多因素分析表明，miR-451的低表达与胃癌患者淋巴结转移及不良预后相关。结论miR-451的低表达与胃癌患者淋巴结转移及不良预后相关。

微小RNA-451抑制胶质瘤细胞侵袭能力的实验研究

目的研究微小RNA-451（miR-451）通过调控基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的表达对LN229胶质瘤细胞株侵袭能力的影响。方法体内、外实验均设立3组，分别为空白对照组、无义序列组和miR451 mimics组。合成寡核苷酸miR451 mimics转染LN229胶质瘤细胞以上调miR451的表达，采用实时定量PCR检测转染后miR-451的表达，以Western blot方法检测各组MMP-2和MMP-9蛋白的表达，通过Transwell实验评估各组LN229胶质瘤细胞的侵袭能力。同时建立LN229细胞荷瘤裸鼠模型，绘制肿瘤生长曲线，并采用免疫组化方法检测各组肿瘤内MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果PCR检测结果提示，与空白对照组、无义序列组相比，miR451 mimics组miR451的表达明显升高（均P〈0．05）。Western blot结果显示，miR451 mimics组MMP-2的相对表达量（0．26±0．03）均低于空白对照组（0．67±0．07）和无义序列组（0．65±0．04）（均P〈0．05）；miR-451 mimics组MMP-9的相对表达量（0．25±0．02）亦低于空白对照组（0．71±0．04）和无义序列组（0．73±0．01）（均P〈0．05）。Transwell实验结果显示，miR-451 mimics组穿过Transwell小室的细胞数为（41．0±2．9）个，低于空白对照组[（79．0±2．7）个]和无义序列组[（73．0±3．4）个]（均P〈0．05）。体内实验结果表明，miR-451mimics组的肿瘤体积[（697．31±65．25）mm^3]明显小于空白对照组[（1753．69±76．52）mm^3]和无义序列组[（1532．64±65．31）mm^3]（均P〈0．05）；免疫组化结果表明，与空白对照组和无义序列组相比，miR451 mimics组肿瘤组织MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低（均P〈0．05）。结论miR-451通过调控MMP-2和MMP-9的表达抑制LN229胶质瘤细胞的侵袭性生长能力，可能为潜在的人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

微小RNA-451a体外抑制胃癌细胞的迁移及侵袭研究

目的观察体外微小RNA-45la（miR-451a）对胃癌细胞迁移能力以及侵袭能力的影响。方法以人胃癌细胞株BGC-823、MKN-d5为研究对象，慢病毒LV．hsa—miR-d51a感染癌细胞（Microup组），然后实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）法检测感染细胞miR-451a基因表达水平，噻唑蓝（MTr）法检测细胞增殖能力无显著变化后，最后检测其迁移及侵袭能力：细胞迁移应用Transwell小室实验，细胞侵袭应用覆盖Matrigel基质的Transwell小室实验。设置两个阴性对照组：未感染任何病毒的癌细胞组（CON组），以及阴性对照病毒感染的细胞组（NC组）。结果比较CON组及NC组，Microup组感染细胞miR-45la基因表达水平显著增高（25．887±3．272和1．921±0．194，25．887±3．272和1．010±0．166，P〈0．05）；但其迁移率降低（0．863±0．026和1．107±0．032，0．863±0．026和1．060±0．054，P〈0．05），侵袭率降低（1．040±0．055和1．522±0．001，1．040±0．055和1．696±0．078，P〈0．05）。结论miR451a在体外抑制了胃癌细胞的迁移、侵袭能力。