MicroRNA-599对静脉曲张中血管平滑肌细胞去分化的影响及其机制研究

目的研究micro RNA-599(miR-599)在曲张静脉中的表达,探讨miR-599是否通过下调血小板源性生长因子B(PDGF-BB),抑制曲张静脉中血管平滑肌细胞(VSMCs)去分化。方法收集大隐静脉移植术患者中曲张静脉和正常静脉标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测42例曲张静脉组织及39例正常静脉组织中miR-599、miR-200、miR-145、miR-146b、miR-155的表达;Western blot检测两组标本中SMactin、SM-22、SM-MCH、OPN的表达;在细胞实验中,转染miR-599mimic和miR-NC至离体培养的VSMCs中,Western blot检测VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH、OPN、PDGF-BB的表达,噻唑蓝法测细胞增殖、划痕实验观察细胞迁移,利用荧光素酶试验验证PDGF是miR-599的靶基因。结果相比于正常静脉组织,miR-599在曲张静脉中的表达降低(F=73.012,P=0.001)。两组miR-146b、miR-200、miR-30、miR-155的表达量比较,差异无统计学意义。相比于正常静脉组织,曲张静脉组织中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达降低(P<0.05),OPN的表达升高(F=56.414,P=0.009);在细胞实验中,相比于对照组,miR-599组VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达升高(P<0.05),OPN的表达降低(F=27.353,P=0.022),细胞增殖减少(F=37.824,P=0.016),迁移减少(F=69.365,P=0.001),PDGF表达量减少(F=55.345,P=0.004)。荧光素酶试验结果显示,miR-599能够降低PDGF-3'-UTR质粒的荧光素活性(F=21.429,P=0.036)。结论在曲张静脉组织中,miR-599低表达。在VSMCs中,miR-599可以通过下调PDGF-BB而抑制VSMCs去分化。

超声造影联合miR-599水平在原发性肝癌TACE预后评估中的价值

目的:探讨超声造影(CEUS)联合血清微小RNA-599(miR-599)评估原发性肝癌(PHC)经导管动脉栓塞(TACE)术后疗效的价值。方法:采用回顾性研究方法,选取接受TACE治疗的80例PHC患者进行研究分析。根据实体瘤疗效标准(RECIST)将患者分为有效组54例和无效组26例,分别于TACE后第7天、14天、1月、2月时采用CEUS检查患者的肿瘤病灶灭活率,于术前及术后第7天、14天、1月、2月时检查患者血清miR-599水平,以患者TACE术后2月时的数字减影血管造影检查结果作为金标准,计算CEUS评估疗效的价值,并采用单因素分析方法及多因素Logistic回归模型分析血清miR-599与PHC患者TACE治疗效果的关系。结果:80例接受TACE治疗的PHC患者,在接受治疗2月后进行评价,其中完全缓解9例、部分缓解45例、疾病稳定22例、疾病进展4例;有效组患者的年龄、体质量指数、TACE次数、Childpugh分级、HBsAg结果与无效组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);有效组患者与无效组患者的术前甲胎蛋白水平、病灶数目、最大病灶直径、病理学分期、是否使用索菲拉尼的情况比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);术后1月时有效组的病灶灭活率为66.67%,术后2月时有效组患者的病灶灭活率为94.44%,有效组在术后1月、2月时的病灶灭活率显著高于无效组患者(P<0.05);无效组患者在术前及术后第7天、14天、1月、2月的血清miR-599水平均显著低于有效组患者(P<0.05);Logistic回归模型显示:术前miR-599低水平、术前AFP≥400μg/L、病灶直径≥5.0 cm、病理学分期为ⅢA期是TACE治疗PHC患者疗效不佳的独立危险因素(P<0.05),使用索菲拉尼有利于提高TACE治疗PHC患者的效果(P<0.05)。结论:应用TACE治疗的PHC患者,采用CEUS动态观察病灶变化情况,能较为准确地评估其临床治疗效果,而血清miR-599水平越低的PHC患者TACE治疗效果越差,可将CEUS病灶观察结果与血清miR-599检测结合,对PHC患者TACE的治疗效果进行综合评价。

血清miR-599联合VEGF预测分化型甲状腺癌患者次全切除术后复发的价值

目的分析血清微RNA-599(miR-599)联合血管内皮生长因子(VEGF)水平对分化型甲状腺癌(DTC)患者全腔镜甲状腺次全切除术后复发的预测效能。方法选取铜川市人民医院2017年1月至2022年3月收治的行全腔镜甲状腺次全切除术的DTC患者135例。患者术前均检测血清miR-599和VEGF水平,并收集患者术前临床相关资料。术后对患者进行为期2年的随访,根据术后复发情况将其分为复发组(31例)和无复发组(104例)。复发组男12例,女19例,年龄(51.26±7.32)岁;无复发组男48例,女56例,年龄(49.57±7.08)岁。计数资料采用χ^(2)检验或Fisher精确概率检验;计量资料采用独立样本t检验。患者术后复发的影响因素用多因素逐步logistic回归模型进行分析;血清miR-599联合VEGF水平预测患者术后复发的效能用受试者操作特征曲线(ROC)下面积(AUC)进行分析。结果复发组miR-599水平低于无复发组[(0.81±0.09)比(1.05±0.12)],VEGF水平高于无复发组[(32.55±5.26)ng/L比(24.83±4.07)ng/L](t=10.295、8.639,均P<0.001)。复发组Ⅲ~Ⅳ期占比[67.74%(21/31)比28.85%(30/104)]、抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平[(251.86±27.98)IU/ml比(211.43±23.49)IU/ml]高于无复发组,术中淋巴结清扫占比[22.58%(7/31)比44.23%(46/104)]、术后放射碘治疗占比[32.26%(10/31)比53.85%(56/104)]低于无复发组(t=8.040,χ^(2)=4.694、4.454,均P<0.05)。多因素逐步logistic回归分析显示,miR-599水平(OR=0.251,95%CI 0.109~0.576)是患者术后复发的独立保护因素,VEGF水平(OR=2.163,95%CI 1.256~3.722)、临床分期(OR=4.287,95%CI 1.908~9.631)、TgAb水平(OR=4.612,95%CI 2.172~9.789)是患者术后复发的独立危险因素(均P<0.05)。ROC显示,miR-599、VEGF及二者联合预测患者术后复发的灵敏度分别为71.00%、74.20%、90.30%,特异度分别为76.90%、72.10%、88.50%,AUC分别为0.824、0.794、0.931(均P<0.05)。结论血清VEGF水平是DTC患者全腔镜甲状腺次全切除术后复发的独立危险因素,血清miR-599水平是患者术后复发的独立保护因素;二者联合检测可较好地预测患者术后复发风险。

微小RNA-599在膀胱癌组织的表达及其临床意义

目的检测膀胱癌患者组织和正常膀胱组织中微小RNA(miRNA,miR)-599的相对表达水平,及转染miR-599后对膀胱癌5637细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集2016年1月至2018年6月间泉州第一医院的40例膀胱癌患者的标本和40例正常膀胱组织标本,使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-599的相对表达水平,分析其与患者临床病理因素之间的相关性。实验分为miR-599模拟体(mimics)组和阴性对照组(NC)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验和侵袭小室(Transwell)观察过表达miR-599后,对5637细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。组间比较采用两独立样本t检验。患者临床病理特征的分析采用χ^2检验。结果与正常膀胱组织比较(1.068±0.451),膀胱癌组织miR-599相对表达水平(0.362±0.290,χ^2=14.040,P<0.05)明显下调,且与患者与肿瘤TNM分期明显相关(χ^2=4.177,P<0.05)。膀胱癌5637细胞系的miR-599相对表达量(0.313±0.087)明显低于正常膀胱上皮细胞,差异有统计学意义(1.096±0.164,P<0.05)。与NC组比较,5637细胞的相对增殖率为(51.2±4.5)%、迁移率为(32.4±6.2)%和侵袭率为(39.2±7.3)%,比例均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-599在膀胱癌组织中的表达呈低表达状态,且与膀胱癌患者肿瘤分期(TNM分期)明显相关。miR-599的表达水平与膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭有关,过表达miR-599能够明显抑制5637细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

超声定量技术联合血清微小RNA-599及半乳糖凝集素-3在甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移中的应用研究

目的探讨超声甲状腺影像学报告与数据系统(TI-RADS)评分、血清微小RNA(miR)-599、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)与甲状腺乳头状癌(PTC)颈部淋巴结转移的关系及联合评估效能。方法选取2019年3月至2021年3月华润医疗淮北矿工总医院收治的98例PTC患者,根据病理检查是否有颈部淋巴结转移分为转移组(48例)和无转移组(50例),比较两组基线资料、超声TI-RADS评分、血清miR-599、Galectin-3水平,采用多因素Logistic回归分析PTC患者颈部淋巴结转移的影响因素,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC)分析超声TI-RADS评分联合血清miR-599、Galectin-3评估PTC患者颈部淋巴结转移的价值。结果转移组超声TI-RADS评分、血清Galectin-3水平高于无转移组[(11.72±2.85)分比(8.15±2.60)分、(5.54±1.76)μg/L比(4.02±1.27)μg/L],血清miR-599水平低于无转移组(0.25±0.08比0.36±0.10),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,将临床分期控制后,超声TI-RADS评分、血清Galectin-3、miR-599是PTC患者颈部淋巴结转移的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,超声TI-RADS评分联合血清Galectin-3、miR-599评估颈部淋巴结转移的AUC最大(为0.889);超声TI-RADS评分、血清Galectin-3高水平患者颈部淋巴结转移率高于低水平患者,miR-599高水平患者颈部淋巴结转移率低于低水平患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论超声TI-RADS评分、血清Galectin-3、miR-599与PTC患者颈部淋巴结转移有关,联合检测有望成为评估颈部淋巴结转移的一个方案。

circ_0001879调控miR-599对脂多糖诱导HUVECs氧化应激损伤的影响

目的探讨circ_0001879调控微小RNA-599(miR-599)对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的影响。方法体外传代培养HUVECs。取传3代、对数生长期、生长状态良好的HUVECs,随机分为Control组与LPS组以及Control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-circ_0001879组,LPS+si-NC组、LPS+si-circ_0001879组经1μg/mL LPS处理24 h后分别予si-NC、si-circ_0001879转染,LPS组仅予LPS处理,Control组不予转染且未经LPS处理。收集细胞,采用RT-qPCR法检测circ_0001879、miR-599表达,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,按相关试剂盒说明检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等氧化应激损伤指标含量。通过CircInteractome网站预测circ_0001879与miR-599的靶向调控关系。WT-circ_0001879和MUT-circ_0001879分别与miR-NC和miR-599共转染HUVECs,按双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明检测荧光素酶活性。结果LPS组circ_0001879相对表达量显著高于Control组,miR-599相对表达量显著低于Control组(t分别为15.960、14.152,P均<0.01)。与Control组比较,LPS组和LPS+si-NC组circ_0001879相对表达量、细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量以及LDH、MDA含量均显著升高,而Bcl-2蛋白相对表达量以及SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05);与LPS组和LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ_0001879组circ_0001879相对表达量、细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量以及LDH、MDA含量均显著降低,而Bcl-2蛋白相对表达量以及SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05)。经CircInteractome网站预测,circ_0001879与miR-599存在互补的核苷酸序列;与转染miR-NC+WT-circ_0001879的HUVECs细胞比较,转染miR-599+WT-circ_0001879的HUVECs细胞荧光素酶活性显著降低(t=17.483,P<0.05),而转染miR-NC+MUTcirc_0001879、miR-599+MUT-circ_0001879的HUVECs细胞荧光素酶活性比较差异无统计学意义(t=0.246,P>0.05)。结论circ_0001879可能通过靶向调控miR-599缓解LPS诱导的HUVECs氧化应激损伤。