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采用Western blotting的方法分析蚕蛹致敏原成份 被引量:3
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作者 赵绮华 李文 +2 位作者 陈丽金 王锡忠 刘永平 《广西医学》 CAS 2006年第1期43-45,共3页
目的 应用Western blotting的方法检测蚕蛹(silkworm chrysalis)浸出液中致敏原的成份,为蚕蛹致敏原的研究和临床诊断提供依据。方法取蚕蛹浸出液,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离,再转印到PVDF膜上,封闭后将血清与膜条共同孵育,后与... 目的 应用Western blotting的方法检测蚕蛹(silkworm chrysalis)浸出液中致敏原的成份,为蚕蛹致敏原的研究和临床诊断提供依据。方法取蚕蛹浸出液,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离,再转印到PVDF膜上,封闭后将血清与膜条共同孵育,后与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgE抗体反应,显色底物用对氨基联苯胺。结果SDS-PAGE显示蚕蛹可辨条带有12条,分子量在14~94kD之间,其中主带有8条,分子量依次为80kD、68kD、62kD、50kD、29kD、23KD、18kD、16kD。Western blotting结果表明,22例蚕蛹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有6条致敏条带,其中分子量68kD和29kD是主要致敏组份,阳性反应率均为100%。结论蚕蛹分子量68KD和29kD的组份为主要致敏组份,结果可为开发适舍我国特色的蚕蛹变应原提供依据。 展开更多
关键词 蚕蛹 致敏组份 十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹分析 致敏原
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类猪圆环病毒 P1转录的 Northern Blot 分析 被引量:2
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作者 温立斌 王凤芝 +10 位作者 何孔旺 倪艳秀 张雪寒 李彬 王小敏 郭容利 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 解建平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期160-163,共4页
为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RN... 为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RNA表达时间比ORF1的短,且丰度也大大低于ORF1。类猪圆环病毒P1至少存在ORF1和ORF3 2个转录本。 展开更多
关键词 类猪圆环病毒P1 转录分析 NORTHERN blot
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热带果树基因组DNA提取方法的改良及Southern blot分析 被引量:2
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作者 彭军 曾凡云 +2 位作者 龙海波 黄俊生 郭建荣 《热带生物学报》 2012年第3期252-257,共6页
以香蕉、番木瓜、龙眼为代表材料,建立一套适合热带果树基因组DNA提取的方法——改良CTAB法。将提取各基因组DNA经限制性内切酶完全消化后,分别以香蕉內源乙烯受体基因(AF113748)、番木瓜八氢番茄红素脱氢酶基因PDS(DQ779922)、龙眼开... 以香蕉、番木瓜、龙眼为代表材料,建立一套适合热带果树基因组DNA提取的方法——改良CTAB法。将提取各基因组DNA经限制性内切酶完全消化后,分别以香蕉內源乙烯受体基因(AF113748)、番木瓜八氢番茄红素脱氢酶基因PDS(DQ779922)、龙眼开花相关基因LEAFY(ADQ160214)为探针进行Southern blot杂交,3种植物的基因组DNA适宜上样量的60μg,杂交条带清晰,背景弱,说明采用改良CTAB法,能保证基因组DNA提取的浓度和纯度,符合Southern blot的要求。 展开更多
关键词 热带果树 DNA提取 CTAB Southern blot
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高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究 被引量:4
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作者 纪晓方 李丽英 常娜 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期616-620,共5页
目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组... 目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。 展开更多
关键词 高内涵分析 WESTERN blotTING 蛋白质核质分布
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The Use of the PCR-Based Dot-Blot Hybridization Assay to Detect Resistance Markers to Rifampicin and Streptomycin in Mycobacterium tuberculosis Isolates from the SW Region of Cameroon
5
作者 Irene Ane-Anyangwe Wilfred Fon Mbacham +7 位作者 Henry Dilonga Meriki Teyim Pride Theresa Nkuo-Akenji Veronique Mbeng Penlap Leopold Djomkam Tietcheu Damian Nota Anong Akindeh Mbuh Nji Vincent P. K. Titanji 《Journal of Tuberculosis Research》 2016年第2期72-79,共8页
Drug sensitivity testing to establish resistance to TB drugs takes many months to arrive at. Public health physicians have difficulties with such an approach due to long wait periods and cannot use it to establish com... Drug sensitivity testing to establish resistance to TB drugs takes many months to arrive at. Public health physicians have difficulties with such an approach due to long wait periods and cannot use it to establish community wide prevalence as a way to understand where resistance may be emerging faster and to limit its spread. The objective of this study was to use the dot-blot hybridization technique in the detection of resistance to rifamycin (RIF) and streptomycin (SM) in South- Western Cameroon and to compare the technique with the routine culture and drug susceptibility testing for detecting resistance in a resource poor country, Cameroon. A hospital-based study was conducted at the Regional hospitals of Buea and Limbe and Tiko Central Clinic. Tuberculosis (TB) patients aged 15 to 50 (mean age: 30.50 ± 8.33 standard deviation) were recruited for the study between December 2006 and April 2007. Cultures from 59 patients were tested for rifampicin and streptomycin sensitivity by the modified proportion method and mutational analysis for rpoB codon 516 and rrs codon 513 was performed by the dot-blot hybridization technique. Of the 59 sputum samples collected (36 were males and 23 were females) came from Buea 19 (32.2%), Limbe 20 (33.9%) and Tiko 20 (33.9%) towns respectively. Amplification for the gene showed that there was (59) 100% amplification with primers used for rpoB genes and 43 (72.9%) amplification with primers used for the rrs gene. Mutational analysis demonstrated that resistance to RIF was common in females (52.1%) than males (41.7%) while 6% of the samples were indeterminate. 12 (20.3%) samples showed phenotypic and genotypic resistance to RIF compared to 34 samples (58.1%) for SM. Phenotypic resistance and genotypic susceptibility were found in 5 (8.5%) RIF and 3 (4.7%) SM compared to phenotypic susceptibility and genotypic resistance that were found in 2 (3.5%) RIF and 3(4.7%) SM. Double mutation on rpoB and rrs genes occurred in 8 (13.6%) DNA samples. Resistance to RIF and SM due to mutations on the rpoB and rrs genes respectively in the SW region was found to be high and comparable to the drug susceptibility testing by 92%, (95% CI: 75.7 - 99.1). The Dot-blot technique will be useful in rapidly assessing the effectiveness of national TB control programs in limiting the spread of resistance strains in Cameroon. 展开更多
关键词 PCR-Based DOT-blot analysis RIFAMYCIN STREPTOMYCIN SW Region
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万寿菊八氢番茄红素合成酶基因的克隆与表达分析
6
作者 邱雅琼 张恩启 +3 位作者 卢熠灿 田彬 鲁传富 牛向丽 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第11期1547-1552,共6页
八氢番茄红素合成酶(PSY)是植物类胡萝卜素生物合成途径中的主要限速酶,催化番茄红素的合成。万寿菊(Tagetes erecta L.)花中富含类胡萝卜素,提示其合成途径催化酶基因可能具有较高活性。文章利用转录组数据克隆获得编码万寿菊PSY的基因... 八氢番茄红素合成酶(PSY)是植物类胡萝卜素生物合成途径中的主要限速酶,催化番茄红素的合成。万寿菊(Tagetes erecta L.)花中富含类胡萝卜素,提示其合成途径催化酶基因可能具有较高活性。文章利用转录组数据克隆获得编码万寿菊PSY的基因TePSY,连接于克隆载体pEASY-Blunt。测序结果显示,TePSY全长读码框为1272 bp,编码相对分子质量约48 kDa的亲水性蛋白;进化分析表明,PSY基因在植物中保守存在,TePSY与同科植物向日葵同源基因相似性最高;实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)显示,TePSY在万寿菊花组织中表达,丰度先升高,至成熟时降低。将TePSY用于构建植物表达载体pBTEX-TePSY,进一步利用农杆菌介导法在烟草叶片中瞬时表达,并进行蛋白印迹(western blot,WB)检测,结果表明,在植物体内表达预期大小TePSY蛋白产物,可用于后续TePSY功能分析。 展开更多
关键词 万寿菊 八氢番茄红素合成酶(PSY) 基因克隆 表达分析 蛋白印迹(WB)
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疫木中松材线虫的免疫学检测方法的研究 被引量:5
7
作者 白钢 王玉嬿 +2 位作者 马洪周 李海燕 杨文博 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期91-95,共5页
以松材线虫的粉碎虫体免疫家兔制备抗血清 ,通过免疫印迹考察抗血清的特异性。利用固相松材线虫抗原和游离线虫抗原同线虫抗体相竞争 ,建立竞争型ELISA法用于疫木中松材线虫的分析。该方法可以直接检测出 10mg的木屑中 0 1μg微量的线... 以松材线虫的粉碎虫体免疫家兔制备抗血清 ,通过免疫印迹考察抗血清的特异性。利用固相松材线虫抗原和游离线虫抗原同线虫抗体相竞争 ,建立竞争型ELISA法用于疫木中松材线虫的分析。该方法可以直接检测出 10mg的木屑中 0 1μg微量的线虫蛋白 ,约 7条线虫的存在。利用该方法对 2 0个不同地区、树种及类型的松材样品进行检测 ,疫木中松材线虫的检出率为 10 0 % ,但拟松材线虫也呈现了一定的交叉反应。研究结果表明 ,以松材线虫抗原蛋白为指标的免疫学检测方法简便快速、灵敏度高 。 展开更多
关键词 检测方法 免疫学 ELISA法 拟松材线虫 免疫印迹 直接检测 交叉反应 研究结果 抗原蛋白 快速检疫 抗血清 特异性 检出率 灵敏度 竞争 家兔 虫体
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抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析 被引量:21
8
作者 陈颖 李强 +2 位作者 李玲 韩一凡 田颖川 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期274-276,共3页
抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析陈颖,李强,李玲,韩一凡,田颖川(中国林业科学研究院林业研究所北京100091)(中国科学院微生物研究所北京100080)关键词Bt.基因,转基因欧洲黑杨,Western印... 抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析陈颖,李强,李玲,韩一凡,田颖川(中国林业科学研究院林业研究所北京100091)(中国科学院微生物研究所北京100080)关键词Bt.基因,转基因欧洲黑杨,Western印迹法WESTERNBLOTANAL... 展开更多
关键词 转基因 黑杨 Western 印迹法 抗虫性
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副肿瘤性边缘叶脑炎的临床及免疫学研究 被引量:8
9
作者 陈齐鸣 李强 +4 位作者 钱伟东 汤其强 刘晓林 屈洪党 JeanYDelattre 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期459-466,共8页
Objective To probe into the pathogenic mechanisms of paraneoplastic limbic encephali- tis( PL E) in patients with small cell lung carcinoma( SCLC) .Methods The indirect im- munoperoxidase method and Western blotanalys... Objective To probe into the pathogenic mechanisms of paraneoplastic limbic encephali- tis( PL E) in patients with small cell lung carcinoma( SCLC) .Methods The indirect im- munoperoxidase method and Western blotanalysis were used for detecting anti- Hu antibodies in1 6 PLE patients associated with SCL C.Autopsy and pathological study were performed on two cases.Results Eight patients( 5 0 % ) had anti- Hu antibodies( anti- Hu+) whereas eight patients ( 5 0 % ) no detectable antineuronal antibodies ( anti- Hu- ) .The clinical and laboratory features of PLE and time to diagnosis of SCLC were similar in the anti- Hu+and anti- Hu- groups.Involvement of other areas of the nervous system in seven( 87.5 % ) patients of the anti- Hu+group but in only one ( 1 2 .5 ) % of the anti- Hu- group ( P=0 .0 1 2 ) . Conclusions The presence of this characteristic neurological disorder strongly suggested that with an ac- companying SCLC,existence of anti- Hu autoantibody was in favour of an autoimmune mech- anism participating in PLE. 展开更多
关键词 免疫学 边缘叶脑炎 PLE 神经系统副肿瘤 综合征
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从毕赤酵母中提取外源重组蛋白的超声破碎条件及优化 被引量:11
10
作者 戴佳锟 李燕 +5 位作者 马齐 关正君 张超 张艳婷 赵荣荣 尉亚辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期57-60,共4页
建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件... 建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件进行优化。结果表明:在外源人脂联素蛋白活性最高的情况下,超声破碎条件为超声破碎功率450W、时间25min、时间间隔(工作时间:间歇时间)10:10(s/s),此时细胞破碎率为(67.8±2.1)%。若在超声破碎时添加1mmol/L PMSF,虽对细胞破碎率并无显著影响,但外源人脂联素蛋白活性将会明显增高。 展开更多
关键词 毕赤酵母 超声破碎法 人脂联素蛋白 WESTERN blotting免疫印记技术
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利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子 被引量:19
11
作者 梅文倩 宋文强 +2 位作者 潘怡 巩威 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第3期358-364,共7页
随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体... 随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体和宿主没有依赖性。本文利用Gateway大规模克隆技术将16个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载pPTV和酵母表达载体pYTV中,酵母融合表达实验和West-ern-blot检测证明了该克隆途径的可行性,并且得到的His-Tag融合蛋白,为拟南芥转录因子的大规模蛋白质组学研究奠定了良好的基础,同时基因序列的聚类分析为将来进一步的功能研究提供了有利信息。 展开更多
关键词 Gateway克隆技术 拟南芥 转录因子 聚类分析 功能基因组
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应用RAPD技术对大熊猫分类地位的探讨 被引量:17
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作者 林峰 杨玉华 +5 位作者 张义正 陈红卫 费立松 宋云芳 何光昕 张安居 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期161-164,77,共4页
采用PCR和Southern杂交等方法对大熊猫与小熊猫、马来熊、浣熊等共有的一条1.3kb的RAPD产物片段进行了初步分析。研究结果显示,来自于大熊猫的此共有片段可能为一重复序列,并且其内部含有多个随机引物AB1-0... 采用PCR和Southern杂交等方法对大熊猫与小熊猫、马来熊、浣熊等共有的一条1.3kb的RAPD产物片段进行了初步分析。研究结果显示,来自于大熊猫的此共有片段可能为一重复序列,并且其内部含有多个随机引物AB1-08的结合位点。以此来自于大熊猫的1.3kb片段为探针进行杂交,发现马来熊RAPD产物中的对应片段显示了很高的同源性,而小熊猫和浣熊RAPD产物则无相应的杂交带。这暗示,从分类地位上来看,大熊猫与熊科马来熊的亲缘关系应更近于与小熊猫和浣熊的亲缘关系,应与马来熊一样划分为熊科。 展开更多
关键词 大熊猫 RAPD分析 分类学 杂交
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油菜油体钙蛋白基因BnClo1的克隆和表达 被引量:12
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作者 丁勇 陈庆波 +2 位作者 徐春雷 常玮 甘莉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1921-1928,共8页
应用同源序列克隆法设计同源简并引物,结合RT-PCR和RACE-PCR技术,从甘蓝型油菜中分离克隆了编码28.1kD油体钙蛋白(caleosin)的基因BnClo1。其全长1058bp的BnClo1 mRNA(GenBank中序列号为AY966447)包含完整的开放阅读框和3′末端Poly(A)... 应用同源序列克隆法设计同源简并引物,结合RT-PCR和RACE-PCR技术,从甘蓝型油菜中分离克隆了编码28.1kD油体钙蛋白(caleosin)的基因BnClo1。其全长1058bp的BnClo1 mRNA(GenBank中序列号为AY966447)包含完整的开放阅读框和3′末端Poly(A)尾巴结构,染色体DNA结构上含6个外显子和5个内含子。Northern杂交结果表明,油菜中BnClo1在种子形成中期开始丰富表达,在种子形成后期,即种子开始脱水成熟时期,高量稳定地表达。半定量PCR结果显示,BnClo1在油菜种子吸水膨胀后前2d的茎中明显表达。证明在油菜种子发育期间,BnClo1对mRNA的转录表达是由胚胎发育来调控的,具有显著的时空特性,并与油体的形成和积累密切有关。推测的caleosin蛋白为245个氨基酸残基(GenBank中序列号为AAY40837)组成的两性蛋白质,主要含3个结构域即由N末端1~16位氨基酸残基组成的α-螺旋和17~61位氨基酸残基组成的强亲水性的随机卷曲构成的N-末端亲水性结构域;由80~120位氨基酸残基组成的中间疏水性结构域和C-末端亲水性结构域。N-末端亲水性结构域包含一个潜在的结合Ca2+的EF-手结构。中间疏水性结构域包含一个潜在的脯氨酸-结(proline-knot)模体,在92~114位氨基酸残基组成的α-螺旋跨膜区域,推测在caleosin蛋白与单层磷脂层和油体锚定结合上及增加种子油体的稳定性上起着重要的作用。 展开更多
关键词 油体钙蛋白 RACE 基因克隆 同源简并引物 序列分析 NORTHERN杂交
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针刺肝经腧穴对偏头痛大鼠脑干组织G蛋白含量的影响(英文) 被引量:8
14
作者 钟广伟 李炜 +2 位作者 王素娥 李臻琰 文玲波 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第17期29-33,36,共6页
目的研究针刺肝经腧穴对实验性偏头痛大鼠肝干组织G蛋白亚基(Gsa和Gia)含量的影响。方法通过皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg)建立实验性偏头痛大鼠模型,将动物随机分成正常对照组、生理盐水组、模型对照组和针刺治疗组,运用免疫印迹法(Weste... 目的研究针刺肝经腧穴对实验性偏头痛大鼠肝干组织G蛋白亚基(Gsa和Gia)含量的影响。方法通过皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg)建立实验性偏头痛大鼠模型,将动物随机分成正常对照组、生理盐水组、模型对照组和针刺治疗组,运用免疫印迹法(Western blot)检测脑干组织Gia和Gsa的含量。结果皮下注射硝酸甘油4h后脑干组织Gsa蛋白含量明显升高(P<0.01),Gia蛋白含量明显降低(P<0.01),Gsa/Gia蛋白比值升高;针刺治疗组与模型组比较,脑干组织中Gsa蛋白含量明显降低(P<0.01),Gia蛋白含量明显升高(P<0.01),Gsa/Gia蛋白比值降低。结论偏头痛发作可能与大鼠脑干组织G蛋白信号传导系统功能障碍有关,针刺介导的G蛋白信号通路可能是其防治偏头痛的重要机制之一。 展开更多
关键词 偏头痛 针刺疗法 G蛋白 大鼠 免疫印迹法
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水稻条叶枯病毒基因产物在水稻和昆虫体内的Western印迹分析 被引量:15
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作者 曲志才 沈大棱 +2 位作者 徐亚南 谈家桢 RogerHULL 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第5期512-517,共6页
将AStV基因组组分3编码的NS3和NC蛋白基因以及组分4编码的NCP和NSvc4蛋白基因分别克隆于大肠杆菌表达载体pGEX3X在IPTG诱导下,表达出4种融合蛋白。这些表达产物用于免疫动物产生多克隆抗血清。以制备的多克隆抗血清为探针,Western印... 将AStV基因组组分3编码的NS3和NC蛋白基因以及组分4编码的NCP和NSvc4蛋白基因分别克隆于大肠杆菌表达载体pGEX3X在IPTG诱导下,表达出4种融合蛋白。这些表达产物用于免疫动物产生多克隆抗血清。以制备的多克隆抗血清为探针,Western印迹分析了宿主植物和介体昆虫体内NS3、NC、NCP和NSvc4种基因表达的产物。NC蛋白的抗体可在病株和病毒粒子制备物中以及NCP抗血清仅在病株中检测到相应大小的产物,其余的均与预期值相停。 展开更多
关键词 融合蛋白 印迹分析 条叶枯病毒 水稻昆虫
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免疫印迹法检测梅毒患者血清中IgG抗体临床意义及方法学评价 被引量:10
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作者 谭爱国 何美懿 高德琴 《现代检验医学杂志》 CAS 2002年第3期19-21,共3页
目的 探讨免疫印迹法检测梅毒感染患者血清中 Ig G抗体检测的临床意义。方法 采用免疫印迹法对临床确诊为梅毒的患者血清标本 5 9例、正常献血员血清标本 2 5例及生物性假阳性标本 2 0例等进行了检测 ,并与梅毒特异性抗体检测的标准... 目的 探讨免疫印迹法检测梅毒感染患者血清中 Ig G抗体检测的临床意义。方法 采用免疫印迹法对临床确诊为梅毒的患者血清标本 5 9例、正常献血员血清标本 2 5例及生物性假阳性标本 2 0例等进行了检测 ,并与梅毒特异性抗体检测的标准方法荧光梅毒螺旋体抗体吸附实验 ( FTA- ABS)、酶联免疫吸附实验 ( ELISA)和梅毒螺旋体被动明胶颗粒凝集实验 ( TPPA)结果相比较。结果  44例未经治疗的梅毒患者和 1 5例经过治疗后的梅毒患者血清梅毒特异性抗体均为阳性 ,正常献血员和生物性假阳性患者结果均为阴性。 5 9例梅毒患者中 ,除 2例梅毒治疗后患者未检测出针对 1 7KD多肽抗原抗体外 ,均检测出针对分子量为 47KD,1 7KD和 1 4KD多肽抗原抗体。针对上述 3种多肽抗原抗体阳性率分别为1 0 0 % ,96.6%和 1 0 0 %。而针对 90 ,60 ,33,30 ,2 5 ,2 2 ,45 KD等多肽抗原抗体 ,在所有梅毒患者血清中亦检测出不同程度的阳性率。在 5 1例非梅毒患者中 ,均未检测出针对 47KD,1 7KD和 1 4KD多肽抗原抗体 ,5例分别检测出一种或多种针对分子量为 90 ,60 ,33,30 ,2 5 ,2 2 KD和 45 KD等多肽抗原抗体。四种方法检测治疗前后梅毒患者结果一致性分别为 1 0 0 %和 92 .8% ,四种方法检测梅毒的敏感度分别为 1 0 0 % ,98.3% ,98.3% 。 展开更多
关键词 IGG抗体 免疫印迹法 梅毒螺旋体 梅毒 抗体检测
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家蚕浓核病毒BmDNV-3(中国株)VD_1基因组结构与转录分析 被引量:7
17
作者 王永杰 姚勤 +1 位作者 陈克平 韩序 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期707-712,共6页
为了进一步认识家蚕浓核病毒BmDNV-3(中国株)VD1基因组的结构和功能,VD1被分离、纯化、克隆到pUC119载体上,完成了基因组全序列的测定。序列分析显示VD1基因组全长为6543个核苷酸,末端拥有224个核苷酸反向重复序列(ITRs)。VD1基因组正... 为了进一步认识家蚕浓核病毒BmDNV-3(中国株)VD1基因组的结构和功能,VD1被分离、纯化、克隆到pUC119载体上,完成了基因组全序列的测定。序列分析显示VD1基因组全长为6543个核苷酸,末端拥有224个核苷酸反向重复序列(ITRs)。VD1基因组正链含有3个大的开放阅读框(ORF1-3),负链含有1个大的开放阅读框(ORF4)。比较BmDNV-3的VD1和BmDNV-2(Yamanashiisolate)的VD1基因组全序列,两者同源性为98.4%,并且有107个碱基的替代和1个碱基插入,氨基酸突变集中在VD1ORF3和VD1ORF4。Northern杂交结果显示VD1的左边正链上有1.1kb和1.5kb两个转录本,右边的负链上有一个3.3kb转录本。3′和5′-RACE结果显示1.1kb转录本开始于nt290,结束于nt1437;1.5kb转录本开始于nt1423,结束于nt2931;3.3kb转录本开始于nt6287,结束于nt2922。正链上1.5kb转录本和负链上3.3kb转录本拥有10个核苷酸的3′端的共同序列。研究结果显示该病毒基因转录与已报道的其它浓核病毒存在较大的差异性。 展开更多
关键词 家蚕浓核病毒 序列分析 转录分析
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三株酵母的抗热激性与tps1基因表达的关系 被引量:3
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作者 马向东 郭永豪 +2 位作者 余华顺 张凡 李知洪 《郑州大学学报(理学版)》 CAS 2005年第1期30-33,共4页
海藻糖是酵母细胞重要的抗逆因子 ,三个生长特性各异的酵母菌株在不同的热激条件下 ,编码海藻糖 - 6 -磷酸合成酶的基因 tps1具有不同的表达丰度 .WFB和 FHS在经受温和热激的条件下 ,即大量表达 TPS1,YY则在4 8℃达到最高 .克隆其 tps1... 海藻糖是酵母细胞重要的抗逆因子 ,三个生长特性各异的酵母菌株在不同的热激条件下 ,编码海藻糖 - 6 -磷酸合成酶的基因 tps1具有不同的表达丰度 .WFB和 FHS在经受温和热激的条件下 ,即大量表达 TPS1,YY则在4 8℃达到最高 .克隆其 tps1后 ,比对基因序列的差异 ,分析相应蛋白序列的突变 ,研究 YY耐高温的可能机理 ,以此推断海藻糖对三个菌株抗逆性的影响 . 展开更多
关键词 表达 蛋白序列 量表 突变 基因序列 酵母细胞 关系 S1基因 抗热 抗逆性
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麻疯树水通道蛋白新基因JcPIP干旱胁迫下的功能分析 被引量:6
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作者 王云霄 张颖 +2 位作者 江璐玎 牛蓓 陈放 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期289-295,共7页
采用RT-PCR和RACE技术,从大戟科(Euphorbiaceae)耐旱植物麻疯树(Jatropha curcas)cDNA中克隆得到了一个麻疯树质膜内膜蛋白(PIP)新基因,命名为JcPIP。聚类分析表明,麻疯树PIP蛋白与蓖麻、葡萄和菠菜的PIP蛋白在进化上有最近的亲缘关系。... 采用RT-PCR和RACE技术,从大戟科(Euphorbiaceae)耐旱植物麻疯树(Jatropha curcas)cDNA中克隆得到了一个麻疯树质膜内膜蛋白(PIP)新基因,命名为JcPIP。聚类分析表明,麻疯树PIP蛋白与蓖麻、葡萄和菠菜的PIP蛋白在进化上有最近的亲缘关系。将JcPIP基因在非洲爪蟾卵母细胞(xenopus oocytes)中异源表达发现细胞膨胀率扩大了10倍,表明JcPIP基因编码的是一个水通道蛋白。合成亲水性、抗原性好的JcPIP保守序列多肽,制备并纯化JcPIP多克隆抗体。Western-blot检测显示JcPIP蛋白富集在29kDa区段,且在麻疯树各组织中均有大量表达。PEG-6000干旱胁迫下麻疯树叶片JcPIP蛋白丰度增加,复水后丰度开始下降,表明JcPIP与麻疯树的耐旱性相关。 展开更多
关键词 麻疯树 水通道蛋白 聚类分析 Western—blot 功能分析 干旱胁迫
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细胞色素P450 2C9药物代谢酶体外酶学活性检测新方法的建立 被引量:7
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作者 王双虎 戴大鹏 +3 位作者 胡利明 耿培武 蔡剑平 胡国新 《医学研究杂志》 2013年第2期23-26,共4页
目的建立一种基于COS-7细胞的细胞色素P450 2C9(CYP2C9)体外酶学活性检测的新方法。方法以野生型CYP2C9*1基因的全长cDNA为模板,通过定点诱变方法获得突变型CYP2C9*2、*3及*13的cDNA全长,分别与分泌型荧光素酶Gluc内参基因一起导入pIRE... 目的建立一种基于COS-7细胞的细胞色素P450 2C9(CYP2C9)体外酶学活性检测的新方法。方法以野生型CYP2C9*1基因的全长cDNA为模板,通过定点诱变方法获得突变型CYP2C9*2、*3及*13的cDNA全长,分别与分泌型荧光素酶Gluc内参基因一起导入pIRES载体的A、B多克隆位点,构建成双表达载体pIRES-Gluc-CYP2C9。利用Lipofectamine 2000瞬时转染COS-7细胞,48h后弃培养基,加入含100μmol/L Luciferin-H荧光底物的新鲜培养基,继续培养8h后利用Promega CYP2C9活性试剂盒及NEB Gluc检测试剂盒分别检测CYP2C9各型及内参Gluc的活性,用Western blot检测两种蛋白的表达量。结果本研究成功构建了pIRES-Gluc-CYP2C9*1及其突变体*2、*3、*13的表达载体,通过检测CYP2C9特异性荧光素底物Luciferin-H的分解产物的荧光信号与分泌型荧光素酶Gluc的内参荧光信号的比值作为CYP2C9的体外酶学活性值,研究结果显示突变体CYP2C9*2、*3、*13的体外酶学活性分别为野生型CYP2C9*1的43.12%、8.15%和1.49%。结论本研究成功建立了一种基于COS-7细胞的CYP2C9体外酶学活性检测的新方法,该方法操作简便、实验周期短,适于新突变体CYP2C9的快速活性检测及其代谢新药物或抑制剂的相关性研究。 展开更多
关键词 CYP2C9 Western blot 体外活性分析
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