水稻条纹病毒RNA4基因间隔区的分子变异

应用反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)和单链构象多态性 (single strandconformationpolymorphism ,SSCP)技术快速检测我国水稻条纹病毒 (RSV)RNA4基因间隔区 (intergenicregion ,IR)的分子变异 ,结果表明 ,我国RSVRNA4IR存在分子变异。供试的 7个分离物共有 4种泳动带型 ,其中YL、BS、JD、LY分离物完全一致 ,而SQ、PJ、JN各不相同。序列测定证实了PCR SSCP结果。各分离物RNA4IR序列均由 6 5 4个核苷酸组成 ,其中YL、BS、YL及JD 4个分离物序列完全一致 ;JN、PJ、SQ 3个分离物各不一样 ,序列之间的同源性均在 92 %～ 94%之间。IR序列内部具有两个重要的结构特征 :(1)有两处反向重复序列 ,可形成两个明显的发夹结构 ,其中一个序列比较保守 ,形成的发夹结构稳定 ;但另一个发夹结构由于碱基变异导致其稳定性在各个分离物中差异较大 ;(2 )具有插入序列 ,相对于日本M分离物 ,我国 7个分离物都有一段长 19bp的插入序列 ,这段插入序列比较保守 ,各分离物之间仅有 1～ 2个碱基的差异。

水稻条纹病毒RNA4基因间隔区序列分析——混合侵染及基因组变异证据

克隆和测定了我国水稻条纹病毒 (RSV) 2 2个分离物RNA4基因间隔区 (Intergenicre gion,IR)序列 ,序列比较结果表明 ,我国RSVRNA4IR在长度上存在 63 4bp、65 4bp及 73 2bp 3种不同的类型 ,其中 3种不同类型的序列在云南省均有存在 ,而在其它省份仅存在 65 4bp类型的序列 ,云南省还存在不同片段类型序列在同一分离物中混合侵染的现象。序列内部具有两个重要的结构特征 ,一是具有插入序列 ;二是有两处反向重复序列 ,可形成两个明显的发夹结构 ,其中一个序列比较保守 ,形成的发夹结构稳定 ;但另一个发夹结构由于碱基变异导致其稳定性在各个分离物中差异较大。本论文还讨论了插入片段特性。

水稻条纹病毒两个分离物RNA4基因间隔区的序列比较

通过RT PCR扩增了我国水稻条纹病毒 (RSV)山东济宁 (JN)、云南宜良 (YL)两个分离物RNA4基因间隔区 (intergenicregion ,IR)序列 ,并克隆于 pGEM Teasy载体上。序列分析结果表明 :JN、YL两分离物RNA4IR均由 6 5 4个核苷酸组成 ,两者之间的同源率为 92 %。JN、YL两个分离物RNA4IR在AU碱基富集处可形成两个明显的发夹结构 ,其中一个序列比较保守 ,形成的发夹结构稳定 ;但另一个由于碱基变异导致所形成的发夹结构的稳定性在各个分离物中差异较大。

LncRNA SNHG4调控牙周膜干细胞成骨分化过程中的miR-152-3p

背景:研究表明长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因4(LncRNA SNHG4)参与了多种炎症性疾病的进展,而关于LncRNA SNHG4对牙周炎治疗过程中人牙周膜干细胞成骨分化的影响尚不明确。目的:探讨LncRNA SNHG4通过调节miR-152-3p对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:从因正畸需要而拔除的前磨牙牙周膜组织中分离出人牙周膜干细胞,将其进行成骨诱导分化0,7,14 d后,qRT-PCR检测Runt相关转录因子2、骨钙素、LncRNA SNHG4及miR-152-3p表达。取第3代人牙周膜干细胞,将其分为NC组、pcDNA组、pcDNA-SNHG4组、inhibitor NC组、miR-152-3p inhibitor组、pcDNA-SNHG4+mimic NC组、pcDNA-SNHG4+miR-152-3p mimic组,qRT-PCR检测各组人牙周膜干细胞中LncRNA SNHG4、miR-152-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖情况;比色法检测碱性磷酸酶活性;茜素红染色检测矿化结节形成情况;Western blot检测Runt相关转录因子2、骨钙素、碱性磷酸酶蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA SNHG4与miR-152-3p的关系。结果与结论:①与成骨诱导0 d比较,成骨诱导7,14 d后人牙周膜干细胞中Runt相关转录因子2、骨钙素、LncRNA SNHG4表达升高,miR-152-3p表达降低(P<0.05);②过表达LncRNA SNHG4或抑制miR-152-3p均可提高人牙周膜干细胞的增殖能力及碱性磷酸酶活性、矿化结节形成量和Runt相关转录因子2、骨钙素、碱性磷酸酶的蛋白表达(P<0.05);miR-152-3p mimic减弱了过表达LncRNA SNHG4对人牙周膜干细胞成骨分化的促进作用;LncRNA SNHG4与miR-152-3p存在靶向关系;③结果表明,过表达LncRNA SNHG4可能通过抑制miR-152-3p促进人牙周膜干细胞成骨分化。

脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7表达变化及其临床意义

目的探讨脑胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)乳腺癌抗雌激素耐药基因4(BCAR4)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择脑胶质瘤患者98例,取术中切除的脑胶质瘤组织及其瘤旁正常组织,采用RT-qPCR法检测lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达。比较脑胶质瘤组织与瘤旁正常组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达,分析脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达的关系及二者表达与临床病理特征和预后的关系。采用多因素Cox回归模型分析脑胶质瘤患者死亡的危险因素。结果脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA相对表达量均高于瘤旁正常组织(P均<0.01)。Pearson相关分析显示,脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4相对表达量与MMP-7 mRNA相对表达量呈正相关关系(r=0.810,P<0.05)。脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达与组织分化程度和WHO分级有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤最大径无关(P均>0.05)。以脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA相对表达量的均值为临界值,将患者分为lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA高表达者与低表达者。lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA高表达者平均生存时间均低于其低表达者(P均<0.01)。多因素Cox回归分析显示,组织分化程度低分化和WHO分级Ⅲ、Ⅳ级以及lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达升高为脑胶质瘤患者死亡的独立危险因素(P均<0.05)。结论脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达显著升高,二者表达变化与组织分化程度、WHO分级和预后密切相关。

Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

本研究旨在构建kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。针对已经筛选确定的kir2ds4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shkir2ds4慢病毒载体,应用PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用LV-shkir2ds4,包装系统质粒共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果表明,PCR和测序结果证实成功地构建了kir2ds4shRNA的慢病毒载体LV-shkir2ds4。293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml。结论:成功地构建了人kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。

INK4基因座中反义非编码RNA调控细胞增殖与凋亡影响动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是冠心病的重要病理基础,INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)位于与其相关性最强的遗传易感区段,即9号染色体短臂2区1带(Chr9p21)。ANRIL通过不同的转录剪接方式可产生线性、环状等多种转录本,可调控斑块内相关细胞的增殖和凋亡,与动脉粥样硬化斑块发生发展密切相关。线性ARNIL可通过调节染色质修饰过程调控斑块内血管平滑肌细胞增殖,也可从转录水平调控斑块内巨噬细胞增殖和凋亡;环状ANRIL可调控染色质修饰及干预核糖体RNA加工成熟,进而影响平滑肌细胞的增殖和凋亡。本文对ANRIL的进化特征、转录本的形成及结构、各转录本调节血管细胞增殖和凋亡进而参与动脉粥样硬化的机制进行了系统阐述,以期为深入理解动脉粥样硬化的发病机制,寻找动脉粥样硬化诊治靶点提供依据。

细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA在急性髓细胞性白血病中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)在急性髓细胞性白血病(AML)中的表达及与患者临床特征的关系。方法选取82例AML患者,作为观察组,依据患者病情分为初治组(n=53)、缓解组(n=19)和复发组(n=10),另选取31例非血液病健康者,作为对照组。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测各组受试者骨髓ANRIL m RNA的相对表达量,并分析其与AML患者临床特征的关系。结果观察组、初治组、缓解组、复发组患者骨髓ANRIL mRNA的相对表达量均明显高于对照组(P﹤0.01)。复发组患者骨髓ANRIL m RNA相对表达量明显高于缓解组和初治组(P﹤0.01),缓解组患者骨髓ANRIL mRNA的相对表达量明显低于初治组(P﹤0.01)。血小板计数﹤20×10^(9)/L、疾病进展、预后未缓解或缓解后再复发AML患者骨髓ANRIL mRNA相对表达量分别明显高于血小板计数≥20×10^(9)/L、疾病无进展、预后缓解患者(P﹤0.01)。结论ANRIL在AML患者中高表达,其表达水平能反映患者的疾病严重程度,可指导临床诊疗。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因4在胃癌中的表达及与预后的关系

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因4(SNHG4)在胃癌中的表达以及与预后的关系。方法选取2015年1月至2016年10月于河南大学第一附属医院肿瘤科行手术根治术切除的113例胃癌组织及82例癌旁正常胃黏膜组织为研究对象,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNASNHG4表达水平。对所有病人术后进行电话或门诊随访,统计胃癌病人生存时间,绘制Kaplan-Meier生存曲线,组间生存曲线差异用log-rank检验;多因素Cox回归分析影响胃癌病人预后不良的危险因素分析。结果癌症基因组图谱(TCGA)数据库显示,SNHG4基因在415例胃癌组织中的表达水平为(1.95±0.62),明显高于其在34例正常胃黏膜组织中的表达水平(0.43±0.12)(t=14.26,P<0.001);LncRNASNHG4在113例胃癌组织中的表达水平(1.67±0.64)明显高于其在82例癌旁正常胃黏膜组织中的表达水平(0.98±0.12)(t=9.63,P<0.001);LncRNASNHG4水平高低与胃癌病人临床分期、肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结是否转移有关(P<0.05);单因素分析显示,临床分期、肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移与终点事件发生有关(P<0.05);生存分析结果显示,LncRNASNHG4高表达组胃癌病人5年累积生存率为28.85%,中位生存时间16.0个月;LncRNASNHG4低表达组胃癌病人5年累积生存率为42.62%,中位生存时间27.0个月,log-rank检验差异有统计学意义(χ2=11.05,P<0.001);多因素Cox回归分析结果显示,临床分期Ⅲ~Ⅳ期、分化程度低、浸润深度T3~T4、淋巴结转移、LncRNASNHG4高表达是影响胃癌病人预后不良的独立预测因素(P<0.05)。结论LncRNASNHG4在胃癌组织中高表达,是影响胃癌病人预后不良的独立预测因素。

沉默INK4基因座中反义非编码RNA对人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响及其机制

目的观察沉默INK4基因座中反义非编码RNA(ANRILA)对人宫颈癌细胞株He La增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期He La细胞分为观察组和对照组,分别ANRIL-siRNA、对照siRNA乱序。转染24、48 h时采用CCK-8法观察两组细胞增殖情况(结果以OD450表示)。转染48 h时采用荧光定量PCR法检测两组细胞ANRIL、p21、周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)mRNA相对表达量,采用CHIP实验观察两组细胞p21基因H3K27位点三甲基化状态。结果转染24 h观察组、对照组OD450分别为0.55±0.08、0.84±0.11,转染72 h观察组、对照组OD450分别为1.21±0.12、1.82±0.14。转染24、72 h观察组OD450均低于对照组(P<0.05)。转染48 h观察组ANRIL及CDK6、CDK2 mRNA相对表达量低于对照组(P均<0.05),p21 mRNA相对表达量高于对照组(P均<0.05)。转染48 h两组细胞p21基因H3K27位点三甲基化水平观察组、对照组分别为1.19±0.08、5.62±0.21,观察组低于对照组(P<0.05)。结论沉默ANRIL可抑制宫颈癌He La细胞的增殖。其机制是沉默ANRIL可以降低宫颈癌He La细胞p21基因H3K27位点三甲基化水平,促进p21mRNA表达,抑制CDK6、CDK2 mRNA表达,从而抑制宫颈癌He La细胞增殖。

长链非编码RNA aHIF和ANRIL在胃癌中的表达

目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)中的反义缺氧诱导因子(antisense hypoxia inducible factor,a HIF)和位于细胞周期激酶抑制因子4(INK4)基因座中反义非编码RNA(antisense noncoding RNA in the INK4 locus,ANRIL)在胃癌组织与血浆中的表达。方法:收集20例胃癌患者癌组织及对应的癌旁组织、33例胃癌患者和20例健康者血浆,采用实时荧光定量PCR测定胃癌组织和血浆中lncRNA a HIF和ANRIL的表达水平,分析lncRNA a HIF、ANRIL在血浆中的表达与胃癌组织表达的相关性。结果:胃癌组织中lncRNA a HIF和ANRIL的表达水平均明显高于癌旁组织(t分别为-4.463,-4.886,P均<0.01);胃癌患者血浆中lncRNA a HIF和ANRIL的表达水平均明显高于健康者(t分别为-4.232,-4.450,P<0.01),且与胃癌组织中的表达水平呈正相关(r分别为0.536,0.524,P<0.05)。结论:lncRNA a HIF和ANRIL在胃癌组织和患者血浆中均高表达,且血浆与组织中的表达水平呈正相关。

过敏性鼻炎患者外周血及鼻腔分泌物长链非编码RNA SNHG4基因表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因4(SNHG4)在过敏性鼻炎(AR)患者外周血及鼻腔分泌物中表达水平,并分析其临床意义。方法选取2019-06-01-2022-06-12南通大学第四附属医院耳鼻喉科收治的90例AR患者作为研究对象(AR组),另选取同院同期体检的90名健康志愿者为对照组。qRT-PCR法检测外周血及鼻腔分泌物中LncRNA SNHG4、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA、信号转导和转录活化因子6(STAT6)mRNA表达;流式荧光法检测并计算Th17/Treg细胞比例;所有AR患者行过敏性鼻炎评分量表(SFAR)评分。将AR患者分为轻度AR组(36例)、中-重度AR组(54例),ELISA法检测血清中白介素-17(IL-17)、免疫球蛋白(IgE)表达;Pearson法分析LncRNA SNHG4与SFAR、IL-17、IgE、ROR-γtmRNA、STAT6 mRNA、Th17/Treg细胞比例的相关性;ROC曲线分析LncRNA SNHG4对AR的诊断价值。结果GEO数据库发现,季节性AR患者鼻部上皮细胞下调的3个基因中包含LncRNA SNHG4。AR患者外周血单核细胞中LncRNA SNHG4表达为0.80±0.17,与对照组的1.00±0.10相比降低,t=9.620,P<0.001。AR患者鼻腔分泌物中LncRNA SNHG4表达为0.93±0.29,与对照组的1.01±0.30相比差异无统计学意义,t=1.819,P=0.071。对照组、轻度AR组、中-重度AR组患者的SFAR评分分别为(0.00±0.00)、(3.15±0.38)、(5.20±1.30)分,F=892.325,P<0.001;血清IL-17表达水平分别为(3.00±0.30)、(5.28±0.85)、(9.96±1.26)ng/L,F=1234.385,P<0.001;IgE表达水平分别为(200.00±65.00)、(253.63±50.85)、(406.96±80.52)kU/L,F=159.725,P<0.001;外周血单核细胞ROR-γt mRNA表达水平分别为1.00±0.36、1.40±0.30、2.00±0.55,F=166.055,P<0.001;Th17/Treg细胞比例分别为1.07±0.19、1.35±0.26、1.90±0.50,F=109.414,P<0.001;表达水平均依次升高,且差异有统计学意义。而LncRNA SNHG4表达水平分别为1.00±0.10、0.85±0.08、0.50±0.10,F=456.389,P<0.001;STAT6 mRNA表达水平分别为1.00±0.22、0.79±0.20、0.46±0.16,F=123.311,P<0.001;表达水平均依次降低,且差异亦有统计学意义。相关性分析结果显示,与LncRNA SNHG4表达呈负相关的为SFAR评分(r=-0.524,P<0.001)、IL-17(r=-0.601,P<0.001)、IgE(r=-0.654,P<0.001)、ROR-γt mRNA(r=-0.648,P<0.001)、Th17/Treg细胞比例(r=-0.706,P<0.001),呈正相关的为STAT6 mRNA(r=0.973,P<0.001)。LncRNA SNHG4诊断AR的ROC曲线下面积为0.773,灵敏度为84.44%;IgE诊断AR的ROC曲线下面积为0.849,灵敏度为85.6%;联合诊断AR的ROC曲线下面积为0.949,灵敏度为90.2%。结论LncRNA SNHG4在AR患者外周血单核细胞中表达降低,其表达变化与SFAR、IL-17、IgE表达及Th17/Treg细胞比例平衡存在相关性,且在AR的诊断及病情严重程度鉴别方面具有一定临床价值。

血清CHI3L1、ANRIL联合检测对慢性乙型肝炎的诊断价值

目的探究血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)联合检测诊断慢性乙型肝炎(CHB)的临床价值。方法前瞻性选取2022年10月至2024年4月西安市第八医院收治的172例CHB患者作为研究组,另选取同期在本院体检的健康者172例作为对照组。检测并比较两组受检者的血清CHI3L1、ANRIL水平和肝功能[总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和白蛋白(ALB)]以及不同肝纤维化程度CHB患者的血清CHI3L1、ANRIL水平、肝功能和肝纤维化指标[层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)];采用Pearson相关性分析CHB患者血清CHI3L1、ANRIL及两者与肝功能、肝纤维化指标的相关性;采用多因素Logistic回归分析CHB的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析血清CHI3L1、ANRIL对CHB的诊断价值。结果研究组患者的血清CHI3L1、ANRIL、TBIL、AST、ALT水平分别为(74.56±5.54)ng/m L、2.52±0.50、(42.03±4.52)mol/L、(56.45±4.65)U/L、(59.66±5.77)U/L,明显高于对照组的(46.37±3.42)ng/m L、1.01±0.24、(16.53±3.02)mol/L、(25.05±3.54)U/L、(30.54±4.38)U/L,ALB为(34.77±8.22)g/L,明显低于对照组的(50.42±12.21)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。S0期、S1~S2期及S3~S4期患者的血清CHI3L1、ANRIL、TBIL、AST、ALT、LN、Ⅳ-C、HA和PC-Ⅲ水平依次升高,ALB依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清CHI3L1与ANRIL呈正相关(P<0.05),且两者与TBIL、AST、ALT、LN、Ⅳ-C、HA和PC-Ⅲ均呈正相关(P<0.05),但与ALB均呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,CHI3L1、ANRIL、TBIL、AST、ALT、LN、Ⅳ-C、HA和PC-Ⅲ均是影响CHB的危险因素(P<0.05),ALB为保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清CHI3L1、ANRIL检测诊断CHB的AUC分别为0.830、0.779,两者联合检测诊断CHB的AUC为0.897,两者联合优于各自单独诊断(P<0.05)。结论CHB患者的血清CHI3L1、ANRIL水平显著升高,两者与肝功能以及肝纤维化指标有关,两者联合检测可提高对CHB的诊断价值。

lncRNA ANRIL和VEGF在原因不明复发性流产绒毛中表达

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)和血管内皮生长因子(VEGF)在原因不明复发性流产(URSA)患者绒毛中的表达。方法:选取2017年8月-2019年6月在本院就诊的URSA患者62例(观察组),同期行人工流产术的正常早孕者62例(对照组)。观察组行清宫手术、对照组行人工流产术时采集新鲜胎盘绒毛组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测绒毛组织中lncRNA ANRIL、VEGF mRNA表达水平;Pearson法分析URSA患者绒毛组织中lncRNA ANRIL和VEGF mRNA表达水平的相关性;采用多因素logistic回归分析影响URSA发生的因素。结果:观察组绒毛组织中lncRNA ANRIL(0.74±0.20)、VEGF mRNA(0.30±0.09)表达水平均低于对照组(1.00±0.25、1.00±0.18)(P<0.05),lncRNA ANRIL与VEGF mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.484,P<0.05),lncRNA ANRIL、VEGF mRNA表达水平均为影响URSA发生的保护因素(P<0.05)。结论:URSA患者绒毛组织中lncRNA ANRIL和VEGF表达水平均显著下调且密切相关,可能共同影响疾病发生。

LncRNA ANRIL对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞焦亡及NLRP3炎性体通路的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)的INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)对缺氧/复氧(A/R)诱导的H9c2心肌细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体通路的影响。方法qRT-PCR检测LncRNA ANRIL在A/R诱导的H9c2细胞中的表达;通过慢病毒转染构建抑制LncRNA ANRIL的H9c2心肌细胞系,分组为:空白组、si-NC组、si-ANRIL组,转染24 h后,利用荧光显微镜观察荧光变化;qRT-PCR检测LncRNA ANRIL表达以验证转染结果;将慢病毒转染成功的H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6 h处理,并分组为,正常对照组(Ctrl组,细胞正常培养,未经任何处理)、A/R组、si-NC+A/R组、si-ANRIL+A/R组,免疫荧光法检测各组细胞中caspase-1蛋白表达;ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量;Western blot检测各组细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达。结果 LncRNA ANRIL在A/R诱导的H9c2细胞中的表达水平显著高于正常细胞;荧光显微镜可观察到转染慢病毒的H9c2细胞呈现出绿色荧光,且si-ANRIL组H9c2细胞中ANRIL表达水平显著低于空白组和si-NC组(P<0.05),成功构建抑制ANRIL的H9c2心肌细胞系;与Ctrl组比较,A/R组H9c2细胞中IL-1β和IL-18含量、caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与A/R组和si-NC+A/R组比较,siANRIL+A/R组H9c2细胞中IL-1β和IL-18含量、caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论沉默LncRNA ANRIL可能通过抑制NLRP3炎性体通路来改善A/R诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

长链非编码RNA反义非编码RNA的剪接变异体INK4基因在胃癌患者血清中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）反义非编码RNA的剪接变异体INK4基因（ANRIL）在胃癌患者血清样本中的表达水平及临床意义。方法选择90例胃癌患者及90例健康者提取两组的血清总RNA，然后应用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测胃癌组和健康志愿者组的ANRIL表达水平。分析ANRIL在胃癌患者和健康志愿者血清中表达的差异及ANRIL在胃癌患者血清中表达水平与临床病理特征之间的关系。结果健康志愿者组与胃癌组血清ANRIL表达水平分别为2.15±1.48、4.60±2.30（P＝0.000）。ANRIL的受试者工作特征曲线显示，血清中的ANRIL对胃癌诊断具有良好的敏感性和特异性（曲线下面积为0.83）。在有淋巴转移、有远处转移的患者及Ⅲ-Ⅳ期患者中，ANRIL的表达水平较高，且差异有统计学意义（P值分别为0.028、0.001和0.035）。但血清ANRIL的表达水平与胃癌患者的性别、年龄、直径大小、组织分化、癌胚抗原（CEA）等无明显相关（P值分别为0.514、0.763、0.691、0.617和0.076）。结论血清中lncRNA ANRIL检测可有助于诊断胃癌。

LncRNA SNHG4表达与结直肠癌预后的关系

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因4(SNHG4)在结直肠癌患者肿瘤组织和癌旁对照组织中的相对表达水平差异和患者临床病理特征及预后之间的关系。方法收集2016年6月至2020年12月淮安市第二人民医院80例结直肠癌手术患者的临床病理特征及预后信息。采用实时荧光定量PCR方法,检测肿瘤组织和癌旁对照组织标本中LncRNA SNHG4的相对表达量。结果80例结直肠癌患者中有66例患者的癌组织中LncRNA SNHG4表达高于癌旁对照组织,高表达率为82.50%。癌组织中LncRNA SNHG4相对表达量是癌旁对照组织的3.774倍,差异有统计学意义(t=8.643,P<0.01)。根据LncRNA SNHG4相对表达量中位数值将患者分为高表达组和低表达组,每组各40例。LncRNA SNHG4表达水平与患者的肿瘤T分期、淋巴结转移状态、TNM分期、血浆癌胚抗原水平、组织分化程度高度相关。生存分析结果表明LncRNA SNHG4高表达组5年OS显著低于低表达组患者(χ^(2)=4.876,P=0.027)。COX模型单因素变量分析显示TNM分期、肿瘤浸润层次、LncRNA SNHG4表达水平、肿瘤组织分化程度与结直肠癌患者的OS密切相关。COX多因素分析显示肿瘤TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期vsⅠ/Ⅱ期)(HR=3.702,95%CI1.096~12.502,P=0.035)是结直肠癌患者总生存期的独立影响因子。结论结直肠癌患者LncRNA SNHG4表达增加,并且LncRNA SNHG4与恶性病理特征有关。LncRNA SNHG4可促进结直肠癌的进展和转移,影响生存和预后,可作为监测结直肠癌进展和预后的生物学标志物。

小核仁RNA宿主基因4在胃癌中的预后价值及潜在作用机制

目的旨在探讨小核仁RNA宿主基因4(SNHG4)在胃癌组织中的表达、预后价值及可能作用机制。方法运用UALCAN数据库分析SNHG4在胃癌中的表达情况;Kaplan-Meier Plotter数据库分析SNHG4与胃癌预后的关系;StarBase、Targetscan、microT-CDS数据库及Cytoscape软件构建SNHG4-miRNA-mRNA调控网络;DAVID数据库对SNHG4相关miRNA的靶基因进行生物学功能及通路分析。结果SNHG4在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P=8.882E-16)。生存分析发现SNHG4高表达的胃癌患者总体生存时间少于低表达组(P=8.900E-05)。通过RNA调控网络的构建,发现在胃癌中hsa-let-7a-5p(P=1.02E-03)、hsa-miR-152-3p(P=4.51E-06)、hsa-miR-204-5p(P=6.68E-04)和hsa-miR-363-3p(P=8.06E-03)可作为SNHG4的结合位点。SNHG4作用于这4种miRNA进一步调控250个靶基因。对靶基因的GO注释及KEGG富集分析,发现这些靶基因在蛋白质磷酸化的调节、转录负调控、RNA聚合酶II启动子的转录等生物过程中发挥作用,且通过阻断或激活Wnt等信号通路参与胃癌的发生及发展。结论SNHG4可作为胃癌潜在的诊断性肿瘤标志物,判断胃癌预后情况,通过构建SNHG4-miRNA-mRNA调控网络,从分子水平研究胃癌的发病机制,为实验研究及临床研究提供明确方向。

长链非编码RNA中INK4基因座中反义非编码RNA在糖尿病视网膜病变中的研究现状

糖尿病视网膜病变(DR)发病机制复杂。长链非编码RNA(lncRNA)中INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)与细胞增生、分化及个体发育过程密切相关,在视网膜血管内皮细胞的异常增生中起重要作用,是DR发病机制研究中的新领域。现有研究发现,ANRIL可能通过核因子-κB、ROS/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶信号通路以及与p300、miR-200b、EZH2协同调节VEGF在DR中的表达和功能,发挥其在DR发生发展中的作用。特异性阻断ANRIL及其相关通路,可能成为未来DR临床治疗中的新靶点。

lncRNA SNHG4与miR-148a在肝癌患者中的表达及其对预后的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小RNA宿主基因4(small nucleolar RNA host gene 4,SNHG4)与微小核糖核酸-148a(miR-148a)在肝癌患者中的表达量,并分析二者与预后的关系。方法 选取2016年9月—2019年4月河北省秦皇岛市第一医院收治的161例肝癌患者为研究对象,取肝癌组织、癌旁组织检测lncRNA SNG4、miR-148a表达水平,观察二者与肝癌病理特征的关系。随访24个月,记录患者的累积生存情况,并分成生存组与死亡组,比较两组lncRNA SNHG4、miR-148a表达水平,利用Pearson线性相关分析二者相关性,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析二者评估肝癌预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)。结果 患者肝癌组织中lncRNA SNHG4相对表达量高于癌旁组织[(7.93±2.15)vs(2.01±0.76),t=32.940,P<0.01]。肝癌组织中miR-148a相对表达量低于癌旁组织[(0.64±0.27)vs(1.37±0.31),t=22.532,P<0.01]。同lncRNA SNHG4低表达(lncRNA SNHG4<7.93)组比较,lncRNA SNHG4高表达(lncRNA SNHG4≥7.93)组肿瘤≥5 cm(56.82%vs 34.25%,χ^(2)=8.170,P=0.004)、肝内转移(32.95%vs 10.96%,χ^(2)=10.906,P=0.001)、临床分期Ⅲ期(42.04%vs 13.70%,χ^(2)=19.412,P<0.01)、低分化(39.68%vs 6.85%,χ^(2)=14.231,P<0.01)、多发肿瘤(56.82%vs 26.03%,χ^(2)=15.447,P<0.01)、微血管侵犯(32.95%vs 12.33%,χ^(2)=9.414,P=0.002)所占比例均高于lncRNA SNHG4低表达组。同miR-148a高表达(miR-148a≥0.64)组比较,miR-148a低表达(miR-148a<0.64)组肿瘤最大径≥5 cm(58.44%vs 35.71%,χ^(2)=8.339,P=0.004)、肝内转移(35.06%vs 11.90%,χ^(2)=12.175,P<0.01)、临床分期Ⅲ期(40.26%vs 19.05%,χ^(2)=16.284,P<0.01)、低分化(27.27%vs 13.10%,χ^(2)=5.071,P=0.024)、多发肿瘤(58.44%vs 28.57%,χ^(2)=14.636,P<0.01)、微血管侵犯(33.77%vs 14.29%,χ^(2)=8.455,P=0.004)所占比例均高于miR-148a高表达组。随访24个月内,死亡30例,占18.63%,生存组lncRNA SNHG4相对表达量低于死亡组[(7.53±0.95)vs(9.68±0.40),t=12.128,P<0.01]。生存组miR-148a相对表达量高于死亡组[(0.68±0.23)vs(0.45±0.08),t=5.392,P<0.01]。Pearson相关分析提示肝癌患者lncRNA SNHG4与miR-148a表达成负相关(r=-0.746,P<0.01)。肝癌组织中lncRNA SNHG4、miR-148a表达量单独与联合评估肝癌预后的AUC分别为0.784、0.770、0.888。结论 肝癌组织中lncRNA SNHG4呈过表达,miR-148a表达则降低,二者表达成负相关,且均对预后评估有一定价值。