肾纤康通过调节LncRNA5318介导的TGF-β/Smad信号通路抗肾纤维化作用机制研究

目的:基于LncRNA5318介导的TGF-β/Smad信号通路,探讨肾纤康对肾纤维化大鼠的保护作用及机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型。将25只大鼠随机分为5组,每组5只,即假手术组、模型组、贝那普利组、肾纤康低剂量组、高剂量组。各给药组给予相应药物灌胃,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续2周。HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,计算肾小管间质损伤指数及肾纤维化相对面积;Western blot法检测肾组织α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、Smad7蛋白的表达;qPCR法检测肾组织LncRNA5318的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾脏出现明显损伤及纤维化;与模型组相比,贝那普利和肾纤康治疗组肾小管间质损伤指数及肾纤维化相对面积明显下降(P<0.05)。Western blot检测提示与假手术组相比,模型组α-SMA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的表达均明显增强,而Smad7表达明显减弱(P<0.05);贝那普利和肾纤康治疗后α-SMA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的表达明显减少,Smad7的表达明显增多(P<0.05)。qPCR检测提示与假手术组相比,模型组LncRNA5318的表达明显增多(P<0.05);贝那普利和肾纤康治疗后LncRNA5318的表达明显减少(P<0.05)。结论:肾纤康可以延缓肾纤维化,疗效与贝那普利相当,作用机制可能与通过调节LncRNA 5318介导的TGF-β/Smad信号通路有关。

长链非编码RNA np-5318对大鼠肠道缺血再灌注损伤作用研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)np-5318在肠道缺血/再灌注(I/R)损伤中的表达及作用,并分析np-5318与表皮生长因子受体(EGFR)信号通路的相互作用。方法 选取20只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=10)与I/R组(n=10)。I/R组麻醉后沿腹部中线做1.0~1.5 cm切口,显露肠系膜上动脉(SMA),使用微动脉夹夹住SMA以阻断血流,45 min后经原切口入腹,取出动脉夹,恢复血供,构建大鼠肠道I/R损伤模型。假手术组仅分离SMA,但不夹闭SMA。I/R组再灌注后6 h处死大鼠,同时,处死假手术组大鼠,并立即取出肠道组织。计算假手术组与I/R组肠道干湿比(W/D)。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测np-5318在假手术组与I/R组肠道组织中的表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肠道转化生长因子-β(TGF-β)、γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17A(IL-17A)和环氧化酶-2(Cox-2)水平。取大鼠肠道上皮细胞分为对照组、I/R模型组与转染si-np-5318组。转染si-np-5318组与I/R模型组的大鼠肠道上皮细胞构建体外I/R模型,并分别转染si-np-5318抑制lncRNA np-5318表达和相应的对照(si-NC)。采用MTT比色法检测细胞活性,并通过qRT-PCR检测np-5318以及EGFR通路相关基因的表达量。结果 I/R组肠道组织W/D及炎症因子TGF-β、INF-γ、IL-4、IL-6、IL-17A、Cox-2表达水平均高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,I/R组np-5318表达水平为(2.07±0.14),高于假手术组的(1.02±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。MTT比色测定结果显示,I/R模型组细胞活性低于对照组,而转染si-np-5318组细胞活性高于I/R模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组与转染si-np-5318组细胞活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。I/R模型组EGFR信号通路基因HBEGF、CSK、HGS表达量较对照组显著下降,而转染si-np-5318组EGFR信号通路基因HBEGF、CSK、HGS表达量较I/R模型组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在肠道I/R中,lncRNA np-5318可抑制EGFR信号通路,可能是lncRNA np-5318加重肠道I/R损伤的潜在机制。