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应用^(31)PN MR研究RNase A水解核糖核酸的机制 被引量:1
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作者 汪猷 徐耀忠 +2 位作者 张伟君 姚胜根 黄永仁 《化学学报》 SCIE CAS 1988年第2期204-205,共2页
核糖核酸酶A(RNase A)水解核糖核酸的机制前人已有研究[1,2].Markham等和Brown等根据水解过程中有2′,3′-环核苷酸的生成提出了两步机制,即磷酰基转移和水解开环.
关键词 核糖核酸 PN MR rnase a
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RNase A及其链亲和素融合蛋白在pET系统中的表达
2
作者 刘喜朋 裴冬丽 刘建华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期52-55,共4页
在大肠杆菌中用pET28a表达载体表达重组RNase A。变性条件下,利用His-Resin亲和纯 化,得到60mg/L电泳纯的RNase A。纯化的RNase A复性后,利用含大量RNA分子的碱法抽提质 粒为底物,测定重组RNase A活性,与商品化的RNase A活性相当。同时... 在大肠杆菌中用pET28a表达载体表达重组RNase A。变性条件下,利用His-Resin亲和纯 化,得到60mg/L电泳纯的RNase A。纯化的RNase A复性后,利用含大量RNA分子的碱法抽提质 粒为底物,测定重组RNase A活性,与商品化的RNase A活性相当。同时在RNase A活性测定体 系中加入4 mol/L尿素会使RNA分子切割效率提高10倍左右。在此基础上,成功表达RNase A 与链亲和素(streptavidjn)的融合蛋白,经纯化复性后,该融合蛋白同时具有核酸酶、biotin结合活 性,在分子生物学中具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 rnase 融合蛋白 链亲和素 pET 系统 分子生物学 表达载体 大肠杆菌 亲和纯化 切割效率 测定体系 结合活性 应用价值 RNa 商品化 活性相 核酸酶 重组 复性 电泳 底物 质粒
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RNase A酶切分析方法——一种检测点突变的新方法
3
作者 白晓彬 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1990年第4期76-79,27,共5页
DNA是生命遗传的物质基础,自1927年美国科学家Muller发现了第一个环境中的诱变因子——X线以来,迄今已发现千百种物理的、化学的诱变因子可以引起核酸突变。恶性癌变以及遗传性疾病大多也由突变所引起。因此,准确地分析突变类型及突变... DNA是生命遗传的物质基础,自1927年美国科学家Muller发现了第一个环境中的诱变因子——X线以来,迄今已发现千百种物理的、化学的诱变因子可以引起核酸突变。恶性癌变以及遗传性疾病大多也由突变所引起。因此,准确地分析突变类型及突变部位在致癌、致畸、致突的研究中至关重要。分子生物学技术的发展使我们能直接分析核酸序列上的变化,也为突变的检测与定位、遗传性疾病的诊断及发病机制的分析。 展开更多
关键词 rnase a 点突变 酶切分析 人基因组 遗传性疾病 核酸序列 基因图谱 RNa MULLER 致畸
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奇蹄目核糖核酸酶基因超家族(RNASE A)的分子进化研究
4
作者 郎大田 刘松菊 郎启雄 《安徽大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2019年第1期94-102,共9页
为深入认识核糖核酸酶基因超家族(RNASEA),以奇蹄目的家马、驴、野马和白犀牛为研究对象,分析RNAsE A序列、鉴定真假基因、预测等电点及构建系统发育树.结果揭示每个物种的RNASE A序列数并不相同,RNnse4在该研究物种分歧之前发生1次基... 为深入认识核糖核酸酶基因超家族(RNASEA),以奇蹄目的家马、驴、野马和白犀牛为研究对象,分析RNAsE A序列、鉴定真假基因、预测等电点及构建系统发育树.结果揭示每个物种的RNASE A序列数并不相同,RNnse4在该研究物种分歧之前发生1次基因复制,其中1个拷贝保留功能,另外1个拷贝发生假基因化并在不同物种中有不同程度的保留或丢失,而RNnse2/3和RNnse7/8经历“基因分拣”进化模式.另外,典型的RNASE A序列特征在RNase9—13中发生变异,揭示RNase9—13可能丢失核糖核酸酶活性而具有其他新功能.总之,该研究系统探讨了奇蹄目RNASE A的分子进化,增加了该基因超家族研究的多样性,为更加深入开展RNASE A研究提供了基础. 展开更多
关键词 奇蹄目 rnase a 等电点 系统发育树 基因分拣 新功能
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鲸偶蹄目RNase11和RNase12的分子进化研究
5
作者 郎大田 李高银 +1 位作者 张毅 刘松菊 《安徽大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第1期72-84,共13页
脊椎动物特有的RNaseA超家族因频繁发生基因重复和功能分化,一直被认为是分子进化研究的经典模型.过去研究主要聚焦于RNaseA超家族中与食性相关的典型成员RNase1,而非典型成员的研究非常有限.笔者以鲸偶蹄目4个亚目21科92个物种为研究对... 脊椎动物特有的RNaseA超家族因频繁发生基因重复和功能分化,一直被认为是分子进化研究的经典模型.过去研究主要聚焦于RNaseA超家族中与食性相关的典型成员RNase1,而非典型成员的研究非常有限.笔者以鲸偶蹄目4个亚目21科92个物种为研究对象,基于系统发育树、等电点、选择压力分析、蛋白质结构等方法深入开展RNaseA超家族非典型成员RNase11和RNase12的分子进化研究,共获得69条RNase11和88条RNase12序列,其中RNase11在水生的河马形亚目27个物种中发生假基因化或基因丢失.RNase11和RNase12的平均等电点分别为8.58,8.25,揭示RNase11和RNase12在鲸偶蹄目中可能拥有与生殖相关的抗菌功能.系统发育树显示鲸偶蹄目的胼足亚目和猪形亚目形成姐妹群最先发生分歧,其次是河马形亚目,最后是反刍亚目.此外,选择压力分析揭示RNase11和RNase12在进化过程中分别有7个和9个位点受到正选择,揭示RNase11和RNase12生物学功能可能发生了改变.总之,通过系统开展鲸偶蹄目RNase11和RNase12的分子进化研究,为进一步认识RNaseA超家族非典型成员和鲸偶蹄目的进化奠定了一定的基础,丰富了RNaseA超家族分子进化研究的多样性. 展开更多
关键词 鲸偶蹄目 rnase11 rnase12 正选择 分子进化
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Rapid evolution of T2/S-RNase genes in Fragaria linked to multiple transitions from self-incompatibility to self-compatibility 被引量:1
6
作者 Wu Chen Hong Wan +4 位作者 Fang Liu Haiyuan Du Chengjun Zhang Weishu Fan Andan Zhu 《Plant Diversity》 SCIE CAS CSCD 2023年第2期219-228,共10页
The T2/RNase gene family is widespread in eukaryotes,and particular members of this family play critical roles in the gametophytic self-incompatibility(GSI) system in plants.Wild diploid strawberry(Fragaria)species ha... The T2/RNase gene family is widespread in eukaryotes,and particular members of this family play critical roles in the gametophytic self-incompatibility(GSI) system in plants.Wild diploid strawberry(Fragaria)species have diversified their sexual systems via self-incompatible and self-compatible traits,yet how these traits evolved in Fragaria remains elusive.By integrating the published and de novo assembled genomes and the newly generated RNA-seq data,members of the RNase T2 gene family were systematically identified in six Fragaria species,including three self-incompatible species(Fragaria nipponica,Fragaria nubicola,and Fragaria viridis) and three self-compatible species(Fragaria nilgerrensis,Fragaria vesca,and Fragaria iinumae).In total,115 RNase T2 genes were identified in the six Fragaria genomes and can be classified into three classes(Ⅰ-Ⅲ) according to phylogenetic analysis.The identified RNase T2 genes could be divided into 22 homologous gene sets according to amino acid sequence similarity and phylogenetic and syntenic relationships.We found that extensive gene loss and pseudogenization coupled with small-scale duplications mainly accounted for variations in the RNase T2 gene numbers in Fragaria.Multiple copies of homologous genes were mainly generated from tandem and segmental duplication events.Furthermore,we newly identified five S-RNase genes in three self-incompatible Fragaria genomes,including two in F.nipponica,two in F.viridis,and one in F.nubicola,which fit for typical features of a pistil determinant,including highly pistil-specific expression,highly polymorphic proteins and alkaline isoelectric point(pI),while no S-RNase genes were found in all three selfcompatible Fragaria species.Surprisingly,these T2/S-RNase genes contain at least one large intron(>10 kb).This study revealed that the rapid evolution of T2/S-RNase genes within the Fragaria genus could be associated with its sexual mode,and repeated evolution of the self-compatible traits in Fragaria was convergent via losses of S-RNase. 展开更多
关键词 FRaGaRIa rnase T2 Self-(in)compatibility S-rnase
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RNase Z^(S1)加工Ub_(L40)mRNA控制水稻温敏雄性核不育 被引量:8
7
作者 周海 周明 +2 位作者 杨远柱 曹晓风 庄楚雄 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1274-1274,共1页
水稻(Oryza sativa L.)是最主要的粮食作物之一,全世界超过一半的人口以水稻为主食。随着人口的增长和可耕地面积的减少,粮食的供需变得越来越不平衡,增加粮食产量已成为解决粮食供需不平衡的关键措施之一。杂交水稻可以比常规水... 水稻(Oryza sativa L.)是最主要的粮食作物之一,全世界超过一半的人口以水稻为主食。随着人口的增长和可耕地面积的减少,粮食的供需变得越来越不平衡,增加粮食产量已成为解决粮食供需不平衡的关键措施之一。杂交水稻可以比常规水稻提高20%-30%的产量,是解决粮食短缺问题的重要方法。目前,我国杂交水稻的种植面积约占水稻种植总面积的60%,是我国水稻生产的主要方式。 展开更多
关键词 常规水稻 温敏雄性核不育 rnase MRNa 粮食作物 加工 控制 粮食产量
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Wallemiasebi的RNase活性和抗植物病原真菌活性的初步研究 被引量:5
8
作者 郭永霞 赵爽 +2 位作者 刘庆洪 王贺祥 王有智 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期30-33,共4页
Wallemia是中国的一新记录属,该属只有Wallemiasebi一个种。Wallemiasebi在PDA平板上对植物病原真菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)和大丽花轮枝孢(Verticilliumdahliae)有强抑制作用。YG培养基上培养的Wallemiasebi菌丝体有RNase活性,... Wallemia是中国的一新记录属,该属只有Wallemiasebi一个种。Wallemiasebi在PDA平板上对植物病原真菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)和大丽花轮枝孢(Verticilliumdahliae)有强抑制作用。YG培养基上培养的Wallemiasebi菌丝体有RNase活性,在0·1mol/LpH7·5的磷酸缓冲液中其活性最高,达322·0U/mg。 展开更多
关键词 Wallemia sebi 植物病原真菌 rnase
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用RNase保护法定量检测鲤鱼组织IGF-ImRNA的表达 被引量:4
9
作者 华益民 林浩然 钟翎 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期121-124,共4页
建立了定量分析mRNA表达的RNase保护法,并用于鲤鱼IGF-I的研究.结果表明鲤鱼IGF-ImRNA在肝组织的丰度为每微克DNA含50.45×10-17mol,在其他组织有少量IGF-ImRNA表达.
关键词 rnase保护法 IGF-ImRNa 鲤鱼 MRNa 表达
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猪瘟病毒E^(rns)基因RNase酶活性位点的定点突变对其原核表达的影响 被引量:3
10
作者 白霞 李润成 +2 位作者 余兴龙 丁建 黎满香 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期568-571,共4页
利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)Erns编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建成重组质粒pETmErns,并将此重组... 利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)Erns编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建成重组质粒pETmErns,并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mErns基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a(+)中未突变的Erns基因却不能表达,说明Erns基因的RNA酶活性是影响该基因在Escherichia coli中表达的因素之一. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^ms基因 定点突变 rnase酶活性 原核表达
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油茶自交不亲和S-RNase基因鉴定与分子特征分析 被引量:4
11
作者 江南 谭晓风 +1 位作者 徐艳 周俊琴 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1521-1535,共15页
植物自交不亲和性(SI,self-incompatibility)中SSI和GSI主要受S位点控制。油茶属于后期自交不亲和(LSI,late-acting self-incompatibility)植物,油茶自交不亲和性已成为油茶产业发展的制约因素。为探究油茶自交不亲和分子机制,本研究以... 植物自交不亲和性(SI,self-incompatibility)中SSI和GSI主要受S位点控制。油茶属于后期自交不亲和(LSI,late-acting self-incompatibility)植物,油茶自交不亲和性已成为油茶产业发展的制约因素。为探究油茶自交不亲和分子机制,本研究以前期研究的油茶雌蕊转录组数据和已完成基因注释的油茶良种华硕全基因组数据中获得的5条S-RNase(CoSRNase)基因组序列为基础设计引物,从10个油茶品种的叶片DNA中扩增CoS-RNase外显子,结合雌蕊CoS-RNase的cDNA全长克隆预测CoS-RNase氨基酸多态性位点,共获得28条CoS-RNase等位基因。基因结构分析显示CoS-RNases基因包含4个外显子和3个内含子;cDNA全长1141 bp,ORF 717 bp,编码238个氨基酸,进化分析显示CoS-RNase与茶树CsS-RNase同源性最大;序列分析确定CoS-RNases具有T2 RNase蛋白家族的两个保守结构域和活性位点,同时有与苹果、梨等S-RNase相同的作用位点:降解RNA的组氨酸(His,119位)位点和解聚肌动蛋白的脯氨酸(Pro,156位)位点;体外重组蛋白实验表明CoS-RNase蛋白具有RNase活性,能抑制花粉管的生长;qRT-PCR分析CoS-RNase在油茶花粉中几乎不表达,其他各组织中均有表达,同时在自花授粉和异交授粉后花柱和子房中的表达模式与花粉管生长规律相吻合。以上结果说明CoS-RNase很可能直接参与了油茶的自交不亲和性反应,是调控油茶自交不亲和性反应的重要因子。本研究可为进一步探索油茶自交不亲和性反应的分子调控提供理论基础。 展开更多
关键词 油茶 后期自交不亲和性 CoS-rnase等位基因 rnase活性 基因表达
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古细菌RNase HⅡ与金属离子结合的热力学研究 被引量:2
12
作者 赖兵 李颖 +1 位作者 曹傲能 来鲁华 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期865-867,共3页
RNase H是一种专一性水解 RNA:DNA杂合链中 RNA链的核糖核酸酶,它广泛存在于从原核生物到人的生物体中.本文通过等温滴定量热技术研究了Mg2+,Mn2+和 Ca2+与一种古细菌 Methanococcus ja... RNase H是一种专一性水解 RNA:DNA杂合链中 RNA链的核糖核酸酶,它广泛存在于从原核生物到人的生物体中.本文通过等温滴定量热技术研究了Mg2+,Mn2+和 Ca2+与一种古细菌 Methanococcus jannaschii中的Ⅱ型 RNase H结合的热力学.首次用这种方法获得了这一结合过程的热力学参数.并证实了这些金属离子与RNase HII按1:1结合.为RNase HII酶反应机理和折叠研究提供了重要信息. 展开更多
关键词 rnase HⅡ 等温滴定量热 二价金属离子 核糖核酸酶 结合过程 热力学
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RNaseⅢ RncS对单核细胞增生李斯特菌毒力的调控作用研究 被引量:2
13
作者 王立霞 孟庆玲 +5 位作者 乔军 蔡扩军 王登峰 郭晶 伍晔晖 才学鹏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期1-7,共7页
核糖核酸酶RnaseⅢ是一种调控nc RNA水平的重要酶系。为了解核糖核酸酶RnaseⅢRncS在单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力中的调控作用,本研究在构建LM-ΔrncS基因缺失突变株的基础上,通过动物感染试验检测强毒株LM-SB5与缺失株LM-Δrnc S对... 核糖核酸酶RnaseⅢ是一种调控nc RNA水平的重要酶系。为了解核糖核酸酶RnaseⅢRncS在单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力中的调控作用,本研究在构建LM-ΔrncS基因缺失突变株的基础上,通过动物感染试验检测强毒株LM-SB5与缺失株LM-Δrnc S对昆明系小鼠的LD50、存活能力、脏器载菌量及病理组织学产生的影响;利用细胞侵染试验检测强毒株与缺失株对小鼠巨噬细胞RAW264.7的粘附率、侵袭率及其在胞内生存繁殖能力的影响,分析RnaseⅢRncS对LM毒力的影响。结果显示,LM-SB5强毒株和LM-Δrnc S缺失株对昆明系小鼠的LD50分别为105.60 CFU、106.90 CFU;与LM-SB5强毒株相比,LM-Δrnc S的LD50升高了1.30个对数数量级,小鼠的存活时间明显延长,表明毒力显著降低;第3~5 d肝脏、脾脏载菌量显著减少(P<0.05),其中第4 d差异极显著(P<0.01);LM-Δrnc S缺失株对肝脏、脾脏、肾脏的病理损伤降低;LM-Δrnc S缺失株对RAW264.7细胞的粘附率和侵袭率均显著低于LM-SB5强毒株(P<0.01),在2~6 h之间,LM-Δrnc S缺失株在细胞内的细菌量显著低于LM-SB5强毒株(P<0.05),证实LM-Δrnc S在细胞内的生存增殖能力显著降低,提示rnc S基因对LM毒力发挥有一定的调控作用。本研究为进一步揭示RnaseⅢ在LM毒力中的分子调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸酶rnase rncS基因 毒力
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Expression of a Wheat S-like RNase (WRN1) cDNA During Natural-and Dark-induced Senescence 被引量:2
14
作者 常胜合 英加 +5 位作者 张吉军 苏俊英 曾雅娟 童依平 李滨 李振声 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第9期1071-1075,共5页
An S-like RNase cDNA had been isolated from common wheat (Triticum aestivum L). The transcription of WRN1 mRNA was down-regulated by natural- and dark-induced senescence. But it was not senile-tissue-specific. As the ... An S-like RNase cDNA had been isolated from common wheat (Triticum aestivum L). The transcription of WRN1 mRNA was down-regulated by natural- and dark-induced senescence. But it was not senile-tissue-specific. As the two key histidine residues were replaced, WRN1 may not be active as RNase. Southern blotting analysis showed that WRN1 exists as one of a small gene family in common wheat genome. 展开更多
关键词 wheat S-like rnase (WRN1) leaf senescence common wheat
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新疆杏品种自交不亲和S-RNase基因特异PCR扩增引物的筛选 被引量:1
15
作者 姜新 冯建荣 +2 位作者 姜俊卿 王大江 刘月霞 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1061-1065,共5页
【目的】筛选鉴定新疆杏自交不亲和相关S-RNase基因的有效引物。【方法】以新疆30个杏品种为试材,选用已报道的蔷薇科李属通用的5对引物组合进行S-RNase基因特异PCR扩增,并依据扩增系数和扩增成功率两个指标对扩增效果进行评价。【结果... 【目的】筛选鉴定新疆杏自交不亲和相关S-RNase基因的有效引物。【方法】以新疆30个杏品种为试材,选用已报道的蔷薇科李属通用的5对引物组合进行S-RNase基因特异PCR扩增,并依据扩增系数和扩增成功率两个指标对扩增效果进行评价。【结果】(1)5对引物组合对30个杏品种均扩出了条带,除了洛浦2号只扩出1条带之外,其余的29个品种都扩增出了两条带;(2)5对引物组合对新疆主栽杏的扩增效果差异较大,其中EM-PC2consFD+EM-PC3consRD的扩增成功率和扩增系数均为最高(86.67%,95.00%),扩增出两条带的品种有25个;其次,引物组合PaConsⅡ-F+PaConsⅡ-R的扩增成功率达66.67%,扩增系数达83.33%,扩出两条带的品种有20个。【结论】5对引物中EM-PC2consFD+EM-PC3consRD对新疆杏品种S-RNase基因的鉴定效果最好。 展开更多
关键词 自交不亲和 S—rnase基因 引物筛选
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RNase A超家族多样性的产生及宿主防御 被引量:2
16
作者 李宁 李建远 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第5期989-991,共3页
胰核糖核酸酶家族也被称为RNase A家族,包含了与牛胰核糖核酸酶同源的所有脊椎核糖核酸酶。从20世纪初,RNase A超家族就成为生物化学、结构生物学、酶学、进化学等领域的研究热点。最新的进化研究显示,脊椎动物RNase A家族起源于宿主防... 胰核糖核酸酶家族也被称为RNase A家族,包含了与牛胰核糖核酸酶同源的所有脊椎核糖核酸酶。从20世纪初,RNase A超家族就成为生物化学、结构生物学、酶学、进化学等领域的研究热点。最新的进化研究显示,脊椎动物RNase A家族起源于宿主防御功能,本文就RNaseA超家族多样性的产生及其宿主防御功能进行综述。 展开更多
关键词 rnase a家族 基因多样性 宿主防御 抗菌rnase a
原文传递
GS介导RNase P对人巨细胞病毒ul54基因mRNA的切割作用 被引量:1
17
作者 李弘剑 黎景光 +5 位作者 苏运贞 陈浩军 李月琴 叶飞舟 张欣 周天鸿 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期275-281,共7页
引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1G... 引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1GS核酶。通过对ul54基因D片段转录产物体外切割实验和将T7-M1GS构建在含有U6启动子的逆转录病毒载体,与构建在真核载体pEGFP-N1的ul54基因D片段共转染人宫颈癌细胞系HeLa的体内切割实验,证实该核酶具备对ul54基因D片段mRNA的特异切割能力,为利用核酶治疗HCMV感染提供实验基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒HCMV μ/54基因 rnase P 引导序列(GSs) 荧光定量PCR
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单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响 被引量:1
18
作者 王立霞 孟庆玲 +5 位作者 乔军 蔡扩军 王登峰 伍晔晖 郭晶 才学鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期110-116,共7页
为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其... 为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响。结构域分析结果显示,LM-Rnase Ⅲ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应。体外酶活实验表明,Rnase Ⅲ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS的降解活性有所降低(P<0.001);第122位谷氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS降解活性极显著下降(P<0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM Rnase Ⅲ RncS酶活性的关键位点。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸酶rnase rncS基因 降解活性
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单核细胞增生李斯特菌核糖核酸酶RNaseⅢ RncS的表达及其生物学活性研究 被引量:1
19
作者 王立霞 孟庆玲 +6 位作者 蔡扩军 王登峰 伍晔晖 王熙凤 郭晶 乔军 才学鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期581-585,共5页
为了解单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶RNaseⅢRncS的生物学活性,本研究通过PCR方法对该菌LM-SB5野毒株中编码RNaseⅢ的rncS基因进行扩增、克隆及测序并对其进行生物信息学分析;将rncS基因克隆至表达载体p ET-32a(+),转化至大肠杆菌中进行... 为了解单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶RNaseⅢRncS的生物学活性,本研究通过PCR方法对该菌LM-SB5野毒株中编码RNaseⅢ的rncS基因进行扩增、克隆及测序并对其进行生物信息学分析;将rncS基因克隆至表达载体p ET-32a(+),转化至大肠杆菌中进行诱导表达。通过体外酶活实验研究目的蛋白对RNA的降解活性。序列分析结果显示,rncS基因全长690 bp,编码229个氨基酸;生物信息学分析结果显示,该基因编码的蛋白含有由9个保守氨基酸(ERLEFLGDA)组成的基序,2个N-酰基化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶C磷酸化位点,提示该酶蛋白活性受磷酸化的调控。同源性分析显示,LM-SB5 rncS基因编码的蛋白氨基酸序列与LM标准株CAC99883.1的同源性为99.13%。SDS-PAGE检测结果显示,表达的RncS蛋白相对分子量约为42.5 ku,与理论值相符;western blot分析表明重组RncS蛋白具有较强的反应原性。体外酶活实验表明,RncS是一种依赖于二价金属离子的核酸酶,且二价金属离子浓度不同其RNaseⅢ的切割活性则不同。本研究为进一步研究RncS在LM中调控ncRNAs的分子机制奠定前期基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸酶rnase rncS基因 原核表达 生物学活性
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甘薯褪绿矮化病毒RNase3蛋白的原核表达及抗血清制备
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作者 秦艳红 乔奇 +4 位作者 王爽 张德胜 王永江 田雨婷 张振臣 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期138-141,共4页
以本实验室保存的重组质粒为模板,利用PCR方法扩增获得了甘薯褪绿矮化病毒SPCSV的RNase3基因,RNase3基因由690个核苷酸组成,编码229个氨基酸。将RNase3基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对诱导产物进... 以本实验室保存的重组质粒为模板,利用PCR方法扩增获得了甘薯褪绿矮化病毒SPCSV的RNase3基因,RNase3基因由690个核苷酸组成,编码229个氨基酸。将RNase3基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对诱导产物进行SDS-PAGE分析。结果表明,RNase3在大肠杆菌中能高效表达,融合蛋白分子量约为26.5kD。以表达的融合蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPCSV-RNase3的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清对RNase3融合蛋白的效价达10万倍。 展开更多
关键词 甘薯褪绿矮化病毒 rnase3基因 原核表达 抗血清
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