RNAi技术在植物功能基因组学中的研究进展

文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载体的构建方法以及该技术的优缺点。病毒介导的基因沉默技术方面包括病毒载体及宿主种类,病毒感染方法,试验对照的建立、环境因素的影响以及该技术的优缺点。

RNAi的技术研究进展

RNA干扰是一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。本文对RNA i的发现过程及作用机理进行了综述,本技术已经成为最近生物医学领域的焦点之一,将应用于基因功能和信号传导系统,上下游分子相互关系的研究可能为肿瘤基因治疗提供新的策略,在病毒性、寄生病原性、突变基因、癌基因和癌相关基因表达引起的疾病的基因治疗之中也有了新的突破。

昆虫RNAi技术及其应用

RNAi是近几年发展起来的抑制基因表达的新技术。部分昆虫存在RNAi信号的系统性传播现象,可以将dsRNA直接注射进昆虫的卵、血腔或局部组织,引发远距离靶基因的特异性沉默,建立起了Embryo RNAi,Larval RNAi,Adult RNAi,Parental RNAi,Feeding RNAi和基于转基因技术的可遗传RNAi等昆虫RNAi技术,使RNAi迅速成为了研究昆虫尤其是非模式昆虫基因功能的主要方法。文章拟就RNAi的系统性、昆虫RNAi技术及其应用进行综述。

RNA干扰作用(RNAi)研究进展

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径 。

RNAi作用机制研究进展及其应用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默机制(posttranscriptionalgenesilencing,PTGS)[1]。RNA干扰可以简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达,它不但是研究基因功能的一种有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。本文介绍了目前RNA干扰作用机制,与之相关的酶、蛋白、“扳机点”和调节因子,及RNA干扰在生物学方面的应用。

昆虫RNAi效率的影响因素研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA诱发的、导致mRNA特异性沉默的过程。简单总结昆虫RNAi的研究现状,从理论和实践两个方面重点介绍昆虫RNAi效率影响因素的研究进展,最后对昆虫RNAi应用于害虫防治的前景进行展望。

RNAi及其在植物遗传改良中的应用

RNAi(RNAinterfering)是由与靶基因同源的双链RNA引发的、在动植物中普遍存在的序列特异的转录后基因沉默。这种现象在动物、植物和真菌中广泛存在并被证实 ,因此可能是生物的发育调控及抗外源或内源侵染的一种普遍的生理机制。对RNAi的研究是目前生物学领域研究的热点之一 ,近几年来该技术已经在功能基因组学、遗传学和医学等诸学科得到大量应用。本文将就RNAi的机制研究及其在植物遗传改良中的应用进行综述。

RNAi介导SMV-P3基因沉默增强大豆对花叶病毒病的抗性

大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,将编码参与SMV运动和影响宿主域范围的P3蛋白基因RNAi片段导入栽培大豆品种,研究RNAi介导SMV-P3基因沉默对大豆抗SMV的影响。Southern杂交检测结果表明,外源RNAi片段以低拷贝的形式（1~4个）整合至大豆基因组中。对T_1~T_3代转基因大豆喷施除草剂和PCR鉴定结果表明,外源T_-DNA插入片段在转基因大豆不同代际间能够稳定遗传。对T_2和T_3代转基因大豆接种SMV鉴定结果表明,转基因大豆对我国大豆产区主要流行SMV株系SC-3较非转基因对照受体品种Williams 82和SN9的抗性水平显著提高,病情指数降低至4.37~18.51,且抗性能够稳定遗传。综上所述,RNAi介导SM-P3基因沉默能够显著提高转基因大豆对SMV的抗性水平。

RNAi及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是指在生物体细胞内 ,外源性或内源性的双链RNA (double strandedRNA ,dsRNA)引起与其同源mRNA特异性的降解 ,因而抑制其相应的基因表达过程 .由于它能够高度特异性、高效性地抑制基因的表达 ,因此在研究基因功能及表达调控、信号传导通路、药物靶点的鉴定和基因药物开发等方面具有良好的应用前景 .主要介绍RNAi可能的分子机制、分子生物学特性。

RNAi技术研究新进展

RNA干扰(RNAi)是指双链RNA在细胞内特异性地诱导同源互补的mRNA降解,从而阻断相应基因表达的现象。RNAi在生物界中广泛存在,其发生过程主要分为3个阶段:起始阶段、扩增阶段和效应阶段。它在维持基因组稳定、基因表达调控等方面发挥重要生物学作用。随着人们对RNAi研究的不断深入,目前RNA干扰技术作为基因沉默的一个工具,已被广泛用于基因功能研究、疾病的靶点治疗和寻找新的药物靶标等方面的研究。

应用RNAi沉默STAT3基因促裸鼠移植瘤细胞凋亡及对Bax/Bcl-2基因表达的影响

目的应用RNAi技术沉默信号转导子与转录活化子3(STAT3)基因,探讨其对人乳腺癌裸鼠移植瘤的细胞凋亡及其对Bax/Bcl2基因表达的影响。方法于雌裸鼠皮下种植MCF7细胞,肿瘤长至一定大小时,随机分为盐水对照(A)组、空质粒对照(B)组及实验(C)组。于肿瘤局部分别注射盐水、psilencer1.0U6空质粒和psilencer1.0U6STAT3siRNA重组质粒。当A组肿瘤长至足够大时处死全部动物,取肿瘤,测其大小及重量,行HE及免疫组化染色,同时用Westernblot检测STAT3,Bax,Bcl2基因的表达水平。结果C组肿瘤瘤块的体积和重量明显小于A,B组(P<0.01)。免疫组化及HE显示C组肿瘤中心区出现大面积细胞坏死及细胞凋亡征象,STAT3免疫组化呈阴性,而A,B组无此现象。Westernblot显示C组STAT3的表达明显低于A,B组(P<0.01),而Bax的表达明显高于A,B组(P<0.05),各组Bcl2的表达水平差异无显著性(P<0.05)。结论应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人乳腺癌裸鼠移植瘤中STAT3的表达,同时引起Bax基因的表达上调,导致细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。

RNAi在植物功能基因组中的应用

植物生物学后基因组时代的主要目标就是确定植物基因组中所有基因所具有的功能。解决这个问题的一个最直接的方法就是还原或者敲除某个在正常条件下其功能能表达出一定的可观察到的表型的特殊基因。对于这方面的研究,插入突变技术就是一个可用的工具,但是基因的随机性,致死敲除,无标记的突变体都大大地限制了这种技术的利用。RNAi技术可以克服以上那些难题。它已经被广泛地应用在线虫的功能基因组上,并且所获得的有效资源还被广泛地用于植物功能基因组的分析。

基因干预治疗的新星——RNAi

快速发展的RNAi(RNA interference)技术为选择性抑制特异性基因的表达提供了有利的工具。RNAi是外源的dsRNA(double strand RNA,>19bp)进入细胞后,激活细胞内自然存在的加工活性,引起对侵入的外源dsRNA及具有同源序列的单链RNA降解(包括内源性的mRNA)的现象。RNAi技术目前多作为基因功能研究的有利工具,随着RNAi分子机制研究的不断深入,相信它将成为最有潜力的基因干预治疗方法。

RNAi机制研究的最新进展

RNAi即RNA干涉,是近几年才发现的一种由双链RNA引起的基因沉默的现象.从无脊椎动物到脊椎动物,从低等真菌到高等植物都普遍存在RNAi.RNAi的机制也成为人们关注的焦点,出现了许多有关RNAi机制的报道.从基因组甲基化,转录后水平以及转译水平三个层次对近两年来关于RNAi机制研究的最新进展结合我们的工作作一较为详细的综述.

RNAi及其抑制目的基因表达的机制

系统介绍了RNAi的研究历史、作用机制、设计方法及其对目的基因表达的抑制效果、生物学意义,展望了RNAi在人类疾病预防和治疗中的应用前景。

RNAi技术的研究进展和发展前景

生物体内导入双链RNA后会引起体内同源基因特异性的沉默,这种现象称为RNA干涉。文章主要介绍RNAi的特征、作用机制及应用等方面的情况。

RNAi导致基因沉默的机制和应用进展

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21～23nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的;RNAi需要多种蛋白质因子以及ATP参与,而且具有生物催化反应特征;RNAi具有高效性和高度特异性,作为一种关闭特定基因的新技术,为基因功能研究提供了一个快速、简便的方法,在后基因组时代应用前景广阔。

干扰RNA(RNAi)作用机理及其在植物细胞工程中的应用进展

随着RNAi调控目的基因表达机理研究的深入,RNAi技术也发展为一种强有力的实验工具,用来控制目的基因的表达以获取预期的生物表型。目前在植物中至少发现存在三种不同的RNAi途径,这些途径中基因沉默信号可以放大、传递和自我调控。为了建立高效、经济的RNAi技术体系,必须解决以下几个问题:即RNAi的有效传递,稳定性的提高,非目标效应出现的减小以及目标RNA敏感位点的确定等。综述了RNAi作用机制及其在植物细胞工程中的最新应用进展,并详细探讨了其技术体系。

RNAi介导ObR基因沉默对人乳头状甲状腺癌K1细胞增殖与侵袭能力的影响

目的探讨用RNAi介导瘦素受体基因(ObR)沉默人乳头状甲状腺癌K1细胞(K1细胞)增殖与侵袭能力的影响。方法使用siRNA干扰技术瞬时转染构建siRNA-ObR。瞬时转染后,Real-time PCR和Western blotting在mRNA水平和蛋白水平检测siRNA-ObR是否有效抑制K1细胞内靶基因的表达;MTT实验研究ObR沉默后K1细胞的增殖能力;Transwell实验检测ObR沉默后K1细胞的侵袭能力。结果 Realtime PCR实验结果显示,ObR基因沉默后K1细胞ObR mRNA表达显著降低;Western blotting实验结果显示,ObR基因沉默后K1细胞ObR蛋白表达显著降低;MTT实验结果显示ObR对K1细胞的增殖没有意义;Transwell实验结果显示ObR沉默后K1细胞侵袭能力显著下降。结论 ObR基因沉默能有效抑制K1细胞ObR基因的表达,降低K1细胞的侵袭能力。

RNAi技术及其应用综述

Ribonucleic Acid interference简称RNAi,是双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)分子在mRNA水平上关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程。介绍了RNAi技术的定义及特征、发现历史、作用机制及其在植物基因功能研究与品质改良方面的应用。