重复利用淋巴瘤组织切片行荧光原位杂交的可行性分析

淋巴瘤的分类非常复杂,形态多样,鉴别诊断有时非常困难,需借助免疫组化及分子检测来进行分析。FISH检测在淋巴瘤的鉴别诊断中广泛使用^([1-3])。目前淋巴瘤石蜡组织较多来源于门诊小手术样本、B超引导下的粗针穿刺组织样本、胸腔镜和腹腔镜样本等,共同的缺点是组织较小,标本量少,且病变细胞不明确,组织易受挤压,形态欠佳,前期形态学检测项目多,所剩样本有时不足以进行相关FISH检测。

粗穗披碱草1H^(t)S染色体特异荧光原位杂交标记开发

小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL罗伯逊易位系高抗小麦条锈病和叶锈病,是小麦遗传改良的优异基因源。我们前期利用中国春ph1b基因突变体对该易位系进行诱导,获得了一批诱导后代材料,为了从中准确鉴定小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系,需要建立能够覆盖粗穗披碱草1H^(t)S染色体的荧光原位杂交(FISH)标记。本研究利用21个小麦及其近缘种探针、61个基于中国春基因组序列新开发的小麦1BS染色体探针以及40个根据简单三碱基重复序列新开发的探针对小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL易位系进行非变性FISH分析。结果显示,B74、B76和B77等36个探针(33个为新开发的)在1H^(t)S染色体上具有杂交信号,并且杂交信号可分为仅在染色体末端、仅在着丝粒处、同时在着丝粒处和近着丝粒处、覆盖1H^(t)S约3/4染色体臂、覆盖绝大部分1H^(t)S共五种类型。因此,部分探针单独使用或多个探针联合使用,其信号能覆盖1H^(t)S染色体,能够满足小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系鉴定,这可为小麦背景中粗穗披碱草染色质追踪提供新的检测手段。

观察全自动免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)评价胃癌HER2状态的效果

探讨荧光原位杂交(FISH)和全自动免疫组化(IHC)评价胃癌表皮生长因子受体2(HER2)状态的效果。方法 对我院胃食管交界处腺癌或手术切除原发性胃石蜡组织标本展开FISH和IHC检测,288例标本采集时间为2019.1.1-2023.12.31,对FISH和IHC检测的胃癌HER2蛋白与基因表达情况加以分析。结果 228例标本中,50例(21.93%)表达为IHC2+与3+,178例(78.07%)表达为0+与1+。FISH检测HER2基因扩增病理病例34例,其中31例IHC+1病例FISH检测有27例扩增,未扩增病例共2例,来源于17号染色体多体;FISH检测扩增病例共2例,来源于IHC2+的19例;在检测FISH下可检出HER2扩增34例,其中低度、中度以及高度扩增分别有15例(44.12%)、10例(29.41%)、9例(26.47%);扩增病理中17号染色体非整倍性者17例,其中亚二体性、低多体性、高多体性各有1例(5.88%)、11例(64.71%)、5例(29.41%);HER2蛋白表达与WHO分化程度与Lauren分级密切相关,P<0.05;HER2基因扩增、Lauren分级、肿瘤分化程度三者之间关系密切,P<0.05。结论 HER2基因扩增中17号染色体多倍体发生比例与分化程度相对更高,HER2阳性率偏高,以肠型多见,IHC虽能够用于胃癌HER2的筛查,但若遇到无法明确的病例,可借助FISH检测进一步确诊,能够有效提升临床诊断的准确性。

应用EBER-RNA探针原位杂交技术在鼻咽癌组织中EB病毒的检测效果

分析EBER-RNA探针原位杂交技术在鼻咽癌组织中EB病毒的检测效果。方法 选取2022年1月-2022年12月本院100例疑似鼻咽癌患者,所有患者经病理组织检查确诊,术中提取病灶组织,通过EBER-RNA探针原位杂交技术对不同组织中EB病毒进行检查,分析检查结果。结果 鼻咽癌患者病灶组织中EB检出率较非鼻咽癌患者组织检出率高(P<0.05)。鼻咽癌患者EB病毒检出率肿瘤类型及发病位置存在显著差异(P<0.05)。经多因素分析,鼻咽癌患者EB病毒检出率与肿瘤类型、发生部位及性别等有关。结论 鼻咽癌组织中EB病毒检测过程中,EBER-RNA探针原位杂交技术应用价值较高,其可以将病情严重程度清楚反映出来,为临床治疗提供参考,值得采纳。

基于RNAscope^(■)原位杂交技术对PRRSV感染组织样本的检测分析

为扩大RNAscope~?原位杂交技术(RNAscope~?ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术。经检测不同病毒感染的组织切片中的PRRSV表明该技术具有良好的特异性。采用该双重染色技术检测PRRSV感染的猪淋巴结组织切片中巨噬细胞感染PRRSV情况,结果显示PRRSV核酸主要存在于巨噬细胞胞浆中,在胞核中也有分布,但在一些非巨噬细胞中也散在PRRSV阳性信号,表明PRRSV不仅在猪淋巴结巨噬细胞中复制。利用该双重染色技术检测PRRSV感染后不同时间点猪胸腺组织切片中凋亡相关调节基因Bid、Bcl-xl表达水平,结果显示一段时间内Bid基因转录水平上调、Bcl-xl基因转录水平下调,与同条件下荧光定量PCR结果一致。综上,本研究建立的RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术结合了RNAscope~?ISH与IHC各自的优势,不仅能够检测病毒感染后在组织中的定位,还可以分析病毒感染后宿主内源性基因转录的变化趋势,实现了在同一组织切片中对核酸与蛋白的双重检测。经验证该检测方法适用于PRRSV实验室研究,为PRRSV的相关基础研究提供新的检测手段。

220例骨髓增生异常综合征患者的荧光原位杂交和染色体核型结果分析

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术和染色体核型分析(CCA)对骨髓异常综合征(MDS)的诊断及预后评估的价值。方法采集2016年1月至2021年1月南昌大学第一附属医院的220例MDS初诊患者骨髓标本,对其进行染色体核型分析和荧光原位杂交技术检测,并整理分析患者临床资料。结果世界卫生组织(WHO)分型的各亚型中,骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多Ⅰ型(MDS-EB-1)和骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多Ⅱ型(MDS-EB-2)组的FISH异常染色体检出率高于CCA法,差异有统计学意义(P<0.05),而两种检测方法对其他亚型的异常染色体检出率无统计学意义(P>0.05);同时,两种方法的联合诊断异常染色体总检出率高于CCA法,差异有统计学意义(P<0.05);进一步采用修订版国际预后积分系统(IPSS-R)进行等级评分,结果提示联合诊断风险等级显著高于单独CCA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FISH联合CCA法可显著提高MDS患者的染色体异常检出率,在MDS的诊断、分型甚至预后分层都具有显著指导意义。

烤片时间对淋巴瘤累及骨髓穿刺组织石蜡切片EBER原位杂交检测的影响

目的探讨淋巴瘤累及骨髓穿刺组织石蜡切片EBER原位杂交检测最佳烤片时间。方法选取苏州大学附属第一医院病理科EBER原位杂交检测结果为阳性的淋巴瘤累及骨髓穿刺组织20例。所有骨髓标本均经10%中性福尔马林固定、混合酸脱钙、石蜡包埋组织,每例标本连续切片6张,根据烤片时间不同随机分成6组,烤片后进行EBER原位杂交检测。结果烤片5 min和10 min组均出现脱片现象,烤片30 min及以上,则骨髓组织结构完整,无脱片现象发生。烤片30 min组EBER染色质量评分最高,随着烤片时间延长,EBER阳性信号着色强度逐渐减弱,阳性细胞核数量逐渐减少,EBER阳性率也降低。结论75℃烘箱中烤片30 min,骨髓石蜡切片EBER原位杂交检测效果最佳,无脱片现象发生、组织结构完整、阳性信号呈棕黄色定位于细胞核、背景干净,阳性率高。

原位杂交结合半薄切片对石鳖贝壳发育相关细胞的观察研究

多板纲软体动物(石鳖)生有8片重复排列的贝壳,与其他类群如腹足类、双壳类等有显著的区别,这些差异蕴含着重要的发育和演化意义。前期研究发现,红条毛肤石鳖(Acanthochitona rubrolineata)幼虫贝壳发育组织的细胞排列欠规则,在普通显微镜下不易识别单个细胞结构。本研究首先利用整装原位杂交手段鉴定出一些参与贝壳发育的细胞群体,发现表达engrailed的细胞分布于贝壳发育区中央区域的突起部位(脊)和边缘区域,其中脊区域的表达呈条纹状,边缘区域的表达则与贝壳发育区的外周吻合,但是对这些细胞的形态和排列模式等细节无法开展深入观察。接下来对石鳖幼虫进行了半薄切片,发现可以识别出壳板发育区细胞及脊细胞的大致轮廓和分布模式,但分辨率仍然受限。为了进一步提升分辨能力,结合了整装原位杂交实验及半薄切片技术,对表达engrailed基因的贝壳发育相关细胞开展了观察研究。结果显示,对整装原位杂交后的幼虫进行半薄切片,组织细胞结构保持完整,细胞轮廓清晰,能够清楚区分engrailed阳性细胞。观察表明,这些细胞具有较高的核质比,总体呈V形排列,且贝壳发育区中央部位与边缘部位的engrailed阳性细胞在形态和排列上存在区别。这些结果证明,将原位杂交与半薄切片结合,可提升对细胞结构观察的分辨率,实现同时从分子和细胞学层面研究石鳖贝壳发育相关细胞。本研究对进一步从细胞水平研究石鳖的贝壳发育过程、解析相关贝壳发育相关基因的功能有重要的支撑作用。研究结果对揭示更多贝壳起源的信息,理解软体动物贝壳的起源和演化有重要意义。

豆伞滑刃线虫Bd-VAP-2基因的克隆及原位杂交分析

线虫食道腺的分泌物在植物线虫寄生过程中发挥着重要的作用。通过构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库与RACE技术相结合的方法克隆获得一个双结构域类毒液过敏原蛋白基因Bd-VAP-2,运用生物信息学方法对其编码蛋白进行分析,并通过原位杂交技术进行基因表达定位。结果显示:Bd-VAP-2基因开放阅读框序列大小为1269 bp,编码422个氨基酸。编码蛋白质含有2个典型且保守的CAP结构域,存在信号肽和无跨膜结构域,属于分泌型蛋白。RT-PCR结果显示,Bd-VAP-2基因在豆伞滑刃线虫各龄期均有表达,但在雌雄成虫期的表达量较高。原位杂交结果表明,Bd-VAP-2基因在豆伞滑刃线虫的食道腺细胞特异表达。初步推测其编码蛋白在食道腺细胞中合成和分泌,并可能在豆伞滑刃线虫与寄主互作过程中发挥作用。

无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用

目的探讨无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用价值。方法收集30例疑似膀胱癌患者尿脱落细胞,每例均随机平均分为A、B组,分别使用传统方法甲醇:乙酸=3:1配制固定液和无水乙醇:乙酸=3:1配制固定液,并使用膀胱癌染色体异常检测试剂盒进行荧光原位杂交检测,观察两组方法的染色一致性。结果两组方法均能获得良好制片效果,检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论在膀胱癌尿脱落细胞荧光原位杂交实验中,使用无水乙醇替代传统方法中的甲醇配制固定液能取得良好的制片效果及一致性的检测结果,在不影响结果和报告准确性的前提下,减少了职业危害的发生,为病理技术人员的健康提供更多的保障,是值得推广的试剂替代方法。

荧光原位杂交分离探针非典型信号研究进展

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分离探针因设计、判读相对简单而广泛应用于肿瘤的病理诊疗。目前针对FISH分离探针中出现的非典型信号类型及意义尚无系统研究。该文根据国内外相关研究,系统总结了FISH分离探针非典型信号的类型、意义、出现的可能原因及机制,为FISH分离探针非典型信号的判读及深入研究提供理论基础。

尿液基细胞荧光原位杂交检测对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

目的探讨尿液基细胞学(LBC)靶向的荧光原位杂交(FISH)对膀胱尿路上皮癌(BUC)的诊断价值。方法回顾性收集2020年10月—2022年10月于首都医科大学附属北京天坛医院泌尿外科行膀胱镜检查的128例患者的临床资料。所有患者在行膀胱镜检查前进行尿核基质蛋白22(NMP22)检测、尿LBC检测与尿LBC靶向的FISH检测,以术后病理结果为标准,分析3种检查方法的灵敏度和特异度。结果NMP22、尿LBC与LBC靶向的FISH的灵敏度分别为61.11%、79.17%、82.46%,特异度分别为57.14%、73.21%、86.67%;NMP22、尿LBC的灵敏度在检测高级别BUC时优于低级别,差异有统计学意义(P=0.01,P=0.03);3种方法对肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌检测的灵敏度比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论尿LBC靶向的FISH对BUC诊断的灵敏度和特异度较高,尤其是对于低级别BUC,可以作为BUC早期筛查、诊断的重要方法。

单分子荧光原位杂交(smFISH)技术及应用

单分子荧光原位杂交(single-molecule fluorescence in situ hybridization,smFISH)技术是一种通过用偶联荧光基团的寡核苷酸探针,对固定细胞或组织中单个mRNA分子进行成像的方法。smFISH可对RNA进行定位、定量,以此对目标转录本进行实时研究。sm FISH适用于细胞、组织切片等多种类型生物样本。近年来,多种基于基础smFISH的改进技术被发明,进一步促进了该技术的实际应用。smFISH良好的RNA单分子可视化能力,使得其在发育生物学、神经生物学及肿瘤生物学等基础生物学科中得到了广泛的应用。本文综述了smFISH技术基本原理、smFISH技术的局限性、smFISH衍生技术方法、smFISH在不同生物学科中的应用进展,并对smFISH技术的发展前景做出展望。

RNAscope原位杂交技术在肺结核病理诊断中的应用价值

目的探讨RNAscope原位杂交技术在肺结核病理诊断中的应用价值。方法收集72例肺结核临床资料,采用qRT-PCR法、RNAscope原位杂交技术进行检测,分析两种方法检测率的差异。结果qRT-PCR法检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为80.56%(58/72)、94.12%(32/34)、96.67%(58/60)、69.57%(32/46)和84.91%(90/106)。RNAscope原位杂交技术检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为70.83%(51/72)、100%(34/34)、100%(51/51)、61.82%(34/55)和80.19%(85/106)。RNAscope原位杂交技术检测肺结核分枝杆菌的特异度和阳性预测值高于qRT-PCR法,敏感度、阴性预测值和准确度则低于qRT-PCR法。统计学分析:两种检测方法差异均无统计学意义(P>0.05)。一致性分析:两者的一致性较好。结论RNAscope原位杂交技术在肺结核病理诊断中具有较高的敏感度和特异度,与qRT-PCR法一致性较高,且未破坏组织的完整性值得在临床中推广。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

免疫组化及荧光原位杂交检测人类表皮生长因子受体2的临床意义

目的:探讨结直肠癌中不同免疫组化评分标准下人类表皮生长因子受体2(HER2)蛋白表达情况及荧光原位杂交方法检测HER2基因扩增与临床病理特征之间的关系。方法:选择2019年1月-2021年12月结直肠癌根治术的石蜡组织标本100例,同时收集患者的临床和病理信息。采用三种不同评分标准对所有病例行全自动免疫组化(IHC)检测HER2蛋白和荧光原位杂交(FISH)检测HER2基因表达,分析其与临床病理特征的关系。结果:100例结直肠癌组织中,三种不同评分标准下HER2的蛋白阳性表达率分别为34%,27%和20%,差异无统计学意义(P>0.05)。IHC评分标准1下HER2蛋白表达3+,2+,1+,0+与基因扩增的一致性分别为50.0%,12.5%,2.9%和0。IHC评分标准2下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性分别为71.4%,15.0%,2.9%和0,IHC评分标准3下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性分别为100.0%,20.0%,2.9%和0,IHC评分标准3下HER2蛋白与基因扩增一致性最高。FISH检测HER2基因扩增9例(9.0%)。HER2基因扩增与年龄、性别、病理分期、浸润深度无相关性(P>0.05),与分化程度、淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论:三种评分标准检测HER2蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义,但评分标准3下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性最高。HER2基因扩增与分化程度和淋巴结转移有关。临床上应优先选用评分标准3进行HER2蛋白表达检测。

荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的影响因素

探究荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)在乳腺癌人类表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)基因状态检测中的影响因素。方法 选择40例2021年1月至2023年12月我院外科手术切除乳腺癌组织标本,使用FISH检测HER2基因状态,观察不同的酶消化时间、煮片的温度与时间、组织前期处理固定效果对FISH检测HER2基因扩增的影响。结果 酶消化11分钟癌细胞杂交成功率>75%,实验较为稳定;酶消化9分钟时提示消化时间不足;酶消化13分钟提示消化过度。煮片水温在92℃,时间在15~25分钟左右会出现荧光杂交信号弱量较少情况;温度在97℃,时间15分钟会出现荧光杂交信号弱量较少情况,时间在20~25分钟会出现荧光杂交信号强度不均匀情况;煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右最佳。在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定最佳,乳腺组织离体到固定时间间隔不超过1h,不宜用微波快速固定。结论 使用荧光原位杂交技术检测人类表皮生长因子受体2基因扩增时,在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定、酶消化11分钟、煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右具有较高的杂交成功率,同时可以保持实验的稳定性。

海岛棉原位杂交及核型比较

采用Ａ染色体组（Ａ ｇｅｎｏｍｅ）棉种亚洲棉基因组ＤＮＡ（ｇＤＮＡ）为探针，对海岛棉体细胞染色体进行了荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），结果发现５２条染色体中有杂交信号与否的刚好各一半，从而直观地证实了海岛棉异源双二倍体起源的理论，但是，染色体的长度Ａ亚组的并非全部大于Ｄ亚组的。海岛棉基于ＦＩＳＨ图像的核型公式为：２ｎ＝４ｘ＝５２＝３８ｍ＋１４ｓｍ（６ｓａｔ）。３对随体染色体序号分别是 Ａ亚组第 １１、 Ｄ亚组第 ２２和 ２５，均属于近中部着丝点（ｓｍ）类型，随体均在各自染色体的短臂上，而且与所在染色体均非同一亚组起源。Ａ亚组第５、６和９对染色体长臂发生了片段的易位，易位的片段较大，占所在染色体长度的百分率依次为１９．２１％、１７．６９％和１２．８８％。在Ｄ亚组１３对染色体中，最少５对的着丝点区或多或少地显示出与亚洲棉ｇＤＮＡ探针杂交的红色荧光信号，意味着有Ａ亚组染色体的交换。

荧光原位杂交技术分析栽培种甘薯(Ipomoea batatas cv.XushuNo.18)染色体

为了解栽培种甘薯(徐薯18,Ipomoea batatas cv.XushuNo.18)的染色体结构,文章利用45SrDNA荧光原位杂交、自身基因组荧光原位杂交和银染技术对栽培种甘薯进行分子细胞遗传学研究。银染结果显示,徐薯18间期核有6对、8对和9对银染点;45SrDNA荧光原位杂交结果显示,徐薯18染色体上有8对或9对强弱不一的45SrDNA信号;自身基因组荧光原位杂交结果表明,所有染色体的全长分布强烈而密集的杂交信号,着丝粒区、近着丝粒区和端粒区有增强的信号带。

荧光原位杂交检测尿脱落细胞染色体异常诊断膀胱肿瘤的研究

目的探讨通过荧光原位杂交(fluorescencein situhybridization,FISH)检测3、7、9、17号染色体数目畸变诊断国人膀胱尿路上皮癌的可行性和有效性。方法采用3、7、17号染色体着丝粒探针和9p21区带探针对140例患者尿液脱落细胞核行荧光原位杂交,并同时行经腹部超声和尿脱落细胞学检查,以膀胱镜病理检查确诊,比较分析各种方法的敏感性和特异性。结果肿瘤组80例膀胱尿路上皮癌全部经病理检查确诊,其中68例FISH结果阳性,26例尿脱落细胞学阳性,71例经腹部超声诊断为膀胱癌。②非肿瘤对照组30例,其中29例FISH结果阴性,1例假阳性;尿脱落细胞学检查全部阴性;经腹超声检查23例阴性,7例假阳性。FISH、尿脱落细胞学、经腹部超声的灵敏度分别为85.00%、32.50%、88.75%,特异度分别为96.67%、100.00%、76.67%。结论使用FISH技术检测尿脱落细胞3、7、9、17号染色体数目畸变具有敏感度高、特异性强的优点,并具无创性,对国人膀胱尿路上皮癌的诊断具有重要的临床应用价值。