临床分离株鲍曼不动杆菌耐药性与AdeABC及AdeIJK外排泵基因表达相关性研究

目的 分析鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii, A.baumannii)感染病人分离的A.baumannii外排泵相关基因的携带情况,探讨其与抗生素的耐药之间的关联,为医院感染防控及临床合理用药提供实验依据。方法 选择2022年1月—2023年9月本院收治的感染A.baumannii的住院患者作为研究对象,共分离A.baumannii菌株55株,采用real-time PCR技术对A.baumannii外排泵adeA、adeB、adeC、adeI、adeJ、adeK等基因表达水平进行检测;MIC法和K-B法检测各菌株的抗生素敏感性。按美国CLSI2023年版要求对各菌株进行抗生素敏感性判断。结果 与敏感组A.baumannii比较,不敏感组A.baumannii的adeA、adeB、adeC、adeJ基因表达较高,差异具有统计学意义(P<0.05);相对于敏感组,不敏感组adeB表达水平表达上调约3~30倍,差异具有统计学意义(P<0.05),adeJ表达水平表达上调约11~876倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 adeB和adeJ在本机构临床株鲍曼不动杆菌抗生素耐药中发挥一定的作用,但多种耐药机制可能参与调节鲍曼不动杆菌耐药,针对AdeABC和AdeIJK外排泵的深层次耐药机制以及其他耐药因素的分析仍需进一步探讨。

苦参碱逆转外排泵系统AcrAB-ToIC介导的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药性

目的评估苦参碱对由外排泵AcrAB-TolC介导的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素耐药的影响并探究其逆转耐药性的相关调控机制。方法使用棋盘稀释法,分别设置阴性对照组、阳性对照组、替加环素组、苦参碱组、联合用药组;培养24 h后,酶标仪测定吸光度,记录各药物组的最低抑菌浓度(MIC)、计算抑菌率和部分抑菌浓度指数(FIC);取各药物组MIC对应孔和阳性对照孔,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测AcrAB-TolC外排泵系统调控基因AcrB、MarA、RamA、AcrR的表达情况。结果与单用替加环素或苦参碱相比较,替加环素与苦参碱联合应用能更明显的抑制外排泵系统AcrAB-TolC介导的替加环素耐药的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的生长(P<0.05),替加环素与苦参碱的药理主要表现为协同或相加作用;联合用药下,替加环素与苦参碱的MIC值均明显降低,替加环素的MIC均能恢复至替加环素敏感MIC值;苦参碱单独或联合作用后,AcrAB-TolC外排泵RamA、AcrB表达明显降低(P<0.05),AcrR基因表达明显升高(P<0.05)。结论苦参碱能下调耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的AcrAB-Tolc外排泵调控蛋白RamA和AcrB基因的表达、及上调AcrR基因的表达,起到逆转替加环素耐药的作用。

多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵与外膜蛋白表达水平分析

目的分析鲍曼不动杆菌对常用抗生素的敏感性,检测外排泵基因和外膜蛋白基因的表达水平,探讨上述基因表达与抗生素耐药之间的关系。方法选择下呼吸道标本分离的鲍曼不动杆菌共213株,对其进行菌种鉴定、药敏试验;根据药敏试验将其分为不敏感组(NS组)与敏感组(S组),应用荧光定量PCR检测外排泵基因(adeB、adeJ、adeG、craA、abeM、amvA)、外膜蛋白基因(omp25、omp33-36、carO)的表达水平,比较上述基因在NS组与S组表达水平的差异。结果鲍曼不动杆菌对阿米卡星、亚胺培南不敏感率分别为89.2%、81.2%,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素等药物的不敏感率均超过92%。adeB基因相对表达量升高(RE≥1)在各抗生素(AMK、IPM、CFP、FEP、TZP、CAZ、SXT、CIP、SCF、CN)NS组的比例高于S组,差异有统计学意义(P<0.05)。外排泵adeB基因mRNA的RE值在上述各抗生素NS组和S组之间差异有统计学意义(P<0.05),NS组adeB基因的RE值平均水平较高。外排泵adeJ、adeG、craA、abeM、amvA基因平均RE水平无升高,且经比较分析差异无统计学意义(P>0.05)。外膜蛋白omp25、omp33-36、carO基因平均RE值均超过1.0,提示相对表达量升高。结论本院鲍曼不动杆菌对多种抗生素耐药率较高。外排泵基因adeB过度表达在本院鲍曼不动杆菌耐药中起着重要作用;其余外排泵基因adeJ、adeG、craA、abeM、amvA和外膜蛋白基因omp25、omp33-36、carO在本研究的多数菌株耐药机制中可能不起作用。

基于基因组学CRKP的RND外排泵分布及生物膜研究

目的探讨耐药结节细胞分化(RND)外排泵在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)中的分布情况及与生物膜形成的作用。方法收集该院临床分离的CRKP菌株,采用Whonet5.6软件分析其标本来源、科室分布等;采用生物膜形成试验观察不同培养时间生物膜形成情况;采用二代测序数据分析RND外排泵基因、耐药基因、分子分型等;采用PCR扩增RND外排泵基因。结果63株CRKP中87.3%来源于痰液,77.5%分离自重症监护室(ICU)。二代测序显示,多数菌株携带10余种耐药基因,55.6%菌株耐药基因与表型匹配;携带RND外排泵基因的61株菌株中,PCR扩增阳性23株(37.7%),荚膜血清型主要为KL64(95.7%);PCR扩增阴性38株(62.3%),荚膜血清型较分散,包括KL64(77.5%)、KL47(10.0%)、K50(7.5%)和K20(5.0%)这4种;24 h生物膜阳性31株(49.2%),36 h生物膜阳性48株(76.2%);RND阳性与阴性菌株的生物膜形成能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论CRKP主要分离自ICU老年患者,多数菌株存在RND外排泵基因但未表达,与生物膜形成无明显相关,其在多重耐药中的作用有待进一步探讨。

志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系

目的:研究志贺菌的耐药状况,检测临床分离志贺菌主动外排泵acrAB-tolC基因及调控基因marOR的突变情况,并探讨其与耐药性的关系。方法:对159株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明6种药物的药敏试验和有机溶剂耐受试验,对其acrAB-tolC基因和marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析。结果:159株临床分离的志贺菌属细菌筛选出4株敏感株、18株耐单药株和137株耐多药株,耐多药率为86.2%(137/159);159株中有122株对有机溶剂耐受,耐受率为76.7%(122/159);159株均扩增出acrAB-tolC基因和marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析,155株耐药菌株中,marOR基因的突变率为17.4%,acrA基因的突变率为5.8%,acrB基因的突变率为3.9%,tolC基因的突变率为2.6%;4株敏感株未发现marOR、acrA、acrB和tolC基因突变。结论:临床分离的志贺菌耐多药率和有机溶剂耐受率均较高,且存在较高的marOR基因突变率。

鲍曼不动杆菌adeB基因检测及外排泵抑制剂逆转亚胺培南耐药性的研究

目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵adeB基因表达量与亚胺培南耐药性的关系,探讨外排泵抑制剂对亚胺培南敏感性的影响,为外排泵及外排泵抑制剂在鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性中的作用提供理论依据。方法筛选临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌79株,采用PCR法检测adeB基因表达情况,RT-PCR方法对adeB基因进行转录水平测定,并比较亚胺培南敏感及耐药组基因转录表达量有无差异;采用微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂PAβN、奥美拉唑前后adeB阳性及阴性组多重耐药菌对亚胺培南MIC值的变化。结果 79株多重耐药鲍曼不动杆菌中,adeB基因在亚胺培南敏感组及耐药组表达量存在差异。PAβN对adeB阳性组亚胺培南耐药性降低有统计学意义,对adeB阴性组无明显影响;奥美拉唑对adeB阳性组及阴性组亚胺培南耐药性降低均无统计学意义。结论鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性与adeB基因高表达有关。PAβN降低adeB阳性组多重耐药鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性,提高亚胺培南敏感性,对adeB阴性组无明显影响;奥美拉唑对亚胺培南耐药性无明显影响。

多重耐药鲍曼不动杆菌的临床分布及其外排泵基因型分析

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌在不同临床科室的分布情况及其外排泵基因型。方法对分离的96株多重耐药鲍曼不动杆菌在不同临床科室的分布情况进行统计分析,采用PCR法对其外排泵基因进行检测。结果96株多重耐药鲍曼不动杆菌分布在ICU 52株、呼吸内科18株、烧伤科9株、肿瘤科6株、普外科4株、肾内科2株、心内科2株、儿科2株、精神科1株。96株多重耐药鲍曼不动杆菌检测到ade B、adeR、ade S、ade J、ade E、ade M基因者分别有33、32、33、33、0、33株;分布在ICU的52株多重耐药鲍曼不动杆菌检测到ade B、adeR、ade S、ade J、ade E、abe M基因者分别有18、16、18、18、0、18株;分布在呼吸内科的18株多重耐药鲍曼不动杆菌检测到ade B、adeR、ade S、ade J、ade E、abe M基因者分别有9、8、8、8、0、8株。结论多重耐药鲍曼不动杆菌主要分布在ICU和呼吸内科,其外排泵基因型主要为ade B、adeR、ade S、ade J、ade M,这是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素。

多重耐药鲍曼不动杆菌抗菌制剂外排泵基因研究

目的检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性、全面了解多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺类耐药机制,为耐药菌的抗菌药物选择提供依据;方法药敏试验为Kirby-Bauer法、PCR法对20株多药耐药鲍曼不动杆菌进行adeB、mdfA、qacE△1等3种抗菌制剂外排泵基因检测;结果β-内酰胺类药物中头孢菌素类耐药率达100%,亚胺培南耐药率达80%;氨基糖苷类药物耐药率100%;喹诺酮类药物(左氧氟沙星)耐药率95%。复方磺胺甲噁唑耐药率100%。20株MDR-ABA菌株adeB、mdfA、qacE△1基因均有检出。除1株来自ICU的外,本组菌株均携带3种外排泵基因。结论本组菌株均携带3种外排泵基因,可能是这些菌株高耐药的原因之一。

肺炎克雷伯菌外排泵基因研究与耐药性的关系

目的分析肺炎克雷伯菌外排泵基因研究与耐药性的关系,为细菌耐药管理提供依据。方法选取2016年1月至2018月12月在该院住院的儿科患儿,从粪便、痰液、血液、组织液等标本中分离获得鉴定肺炎克雷伯菌144株,对其进行耐药性分析、基因分析及相关性分析。结果耐药性分析结果显示,肺炎克雷伯菌对氨苄青霉素耐药率最高,对亚胺培南、美罗培南的敏感性较高。肺炎克雷伯菌的外排泵基因检出率为0.0%~86.8%,阳性率最高为AcrAB-TolC,最低为qepA。检出外排泵基因3~6个,检出耐药药物品种1~10个,耐药药物品种数与外排泵基因存在正相关性(r=0.412,P<0.05),qacE△1-sull的耐药药物品种数高于其他类型的基因,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎克雷伯菌外排泵基因与耐药性存在相关性,外排泵类型、数量都会增加耐药风险。

多重耐药鲍曼不动杆菌的主动外排泵基因对β-内酰胺类抗菌药物耐药性的影响

目的探讨对β-内酰胺类抗菌药物耐药的多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵基因在耐药机制中表达情况。方法多重耐药鲍曼不动杆菌96株,分析其对9种β-内酰胺类抗菌药物的耐药性。以加入泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)后最低抑菌浓度(MIC)降低至≤1/4为标准,筛选出34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌,用聚合酶联链反应(PCR)扩增法对其行外排泵蛋白基因ade B进行检测和分析。结果多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为92.3%,86.6%,83.0%,70.8%,68.3%;对氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦的耐药率分别为90.1%,77.5%,72.4%和67.3%。34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌检测到ade B基因有33株,检出阳性率97.06%。对33株鲍曼不动杆菌的外排泵基因ade B进行测序,经比对所测序列与Genebank中序列同源性为100.0%。结论主动外排泵基因是多重耐药鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的一个重要因素。

多重耐药鲍曼不动杆菌临床分布及外排泵基因的检测

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌临床分布并检测其外排泵基因型。方法统计96株多重耐药鲍曼不动杆菌临床分布,用Kirby-Bauer法检测96株多重耐药鲍曼不动杆菌对15种抗菌药物的耐药情况,并用PCR扩增进行外排泵基因的检测。结果 96株多重耐药鲍曼不动杆菌主要分布在重症监护病房(54.2%)和呼吸内科(18.8%);对喹诺酮类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类抗菌药物的耐药率均在70%以上;分布在重症监护病房的52株多重耐药鲍曼不动杆菌中检测到ade B、ade R、ade S、ade J、ade E、abe M基因分别有18株(34.62%)、16株(30.77%)、18株(34.62%)、18株(34.62%)、0株、18株(34.62%);分布在呼吸内科的18株多重耐药鲍曼不动杆菌中检测到ade B、ade R、ade S、ade J、ade E、abe M基因分别有9株、8株、8株、8株、0株、8株。结论外排泵基因是分布在重症监护病房和呼吸内科的鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素。

多药耐药鲍曼不动杆菌抗菌剂外排泵基因研究

目的了解多药耐药鲍曼不动杆菌(MDR-ABA)抗菌剂外排泵基因存在状况与细菌耐药关系。方法采用PCR方法检测4种抗菌剂外排泵基因(adeB、mdfA、qacE△1、tehA),PCR阳性产物采用PCR直接全自动荧光法测序。结果 20株MDR-ABA有18株检出同时携带adeB、mdfA、qacE△1基因,阳性率为95%,且tehA均为阴性。结论连续分离的多药耐药鲍曼不动杆菌抗菌制剂外排泵基因检出率较高可能是MDR-ABA呈多重耐药的原因,其具有流行病学意义。

铜绿假单胞菌主要RND外排泵表达与β-内酰胺类抗生素耐药性的相关性研究

目的探讨铜绿假单胞菌4种主要RND外排泵的表达水平与β-内酰胺类抗生素耐药性间关系。方法采用药敏实验检测临床菌株β-内酰胺类抗生素耐药性;构建转录融合报告基因mexA-lacZ、mexC-lacZ、mexE-lacZ和mexX-lacZ,通过测定β-半乳糖苷酶活力,分析和比较4种RND外排泵表达水平的差异,及其表达水平与菌株抗生素耐药性的相关性。结果共检测151株临床菌株,对羧苄西林、替卡西林、氨曲南和头孢他啶的耐药性分别为19.87%、9.93%、2.65%和26.49%。选择耐2种及以上抗生素的菌株23株和对4种抗生素全部敏感的菌株19株,测定β-半乳糖苷酶活力。耐药菌株的mexA、mexC和mexX基因的表达水平与敏感菌株之间的差异有统计学意义(P均<0.05)。多元线性回归分析发现,mexA、mexC和mexX基因的表达水平分别与羧苄西林、替卡西林和氨曲南的抑菌圈直径存在高度或中度负相关性;贝塔权重数据显示mexA基因表达水平是影响羧苄西林(-0.595)、替卡西林(-0.483)和氨曲南(-0.553)3种抗菌素耐药性的主要因素。结论外排泵MexAB-OprM、MexCD-OprJ和MexXY-OprM的表达水平与β-内酰胺类抗生素耐药性存在显著相关性,MexAB-OprM对临床菌株β-内酰胺类抗生素耐药性具有主要影响。

志贺菌外排泵cmr基因克隆及耐药作用

目的研究志贺菌外排泵cmr基因的耐药作用。方法以志贺菌临床多耐药株H24基因组为模板,扩增出含cmr基因的1620 bp DNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到大肠埃希菌DH5α中,酶切鉴定阳性克隆,对其进行序列测定并用琼脂平皿二倍稀释法对重组菌株进行药敏测试和泵抑制剂实验。结果含有志贺菌cmr基因的大肠埃希菌较不含有该大肠埃希菌对红霉素和四环素的耐药性提高1倍,并且这种耐药性提高可被质子泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)所抑制。结论cmr基因与志贺菌耐药株H24对红霉素和四环素的耐药性相关。

鲍曼不动杆菌8种RND外排泵介导替加环素耐药表型的研究

目的探讨鲍曼不动杆菌中8种RND外排泵基因的分布与替加环素耐药表型间的关系。方法微量肉汤稀释法检测120株鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药性,PCR扩增8种外排泵及调控基因。琼脂二倍稀释法测定替加环素耐药菌株对18种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),利用5种外排泵抑制判定外排泵表型。采用实时荧光定量PCR检测外排泵基因的表达水平。结果筛选出替加环素耐药菌8株,对18种抗菌药物耐药情况严重,其中6株为广泛耐药菌;3种外排泵抑制剂CCCP、PAβN及维拉帕米的表型阳性率分别为50%、37.5%和12.5%。耐替加环素菌株除ACICU_02904和ACICU_03412基因外均为阳性;替加环素敏感菌中外排泵(ade ABC-ade RS、ade FGH-ade L和ade IJK-ade N)基因检测率为38.4%,新近发现外排泵(ACICU_00143、ACICU_03066和ACICU_03646)基因检测率为50.9%,然而,ACICU_02904和ACICU_03412基因检出率为0.9%。在转录水平上,替加环素耐药组的ade B相对表达量是敏感组的23.5倍。结论鲍曼不动杆菌中ade B相对表达量伴随菌株对替加环素MIC值增加而升高,主动外排泵表达活性增加是替加环素耐药的一个重要机制。

多重耐药铜绿假单胞菌外排泵基因表达与耐药表型和耐药程度的关系

目的建立实时荧光定量PCR法检测多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的外排泵基因表达量,探讨不同类型外排泵基因表达与耐药表型和耐药程度的关系。方法收集临床分离的多重耐药Pa共80株,分析其耐药表型;用实时荧光定量PCR检测不同类型外排泵基因的表达量,用外排泵抑制剂CCCP及PAβN进行外排泵基因筛查,并比较其结果。结果 64株(80%)检出了不同类型外排泵基因,包括单独表达MexA 30株(37.5%),MexC 12株(15.0%),MexX 8株(10.0%),同时表达MexA和MexC者10株(12.5%),同时表达MexA和MexX者4株(5.0%)。外排泵抑制剂筛查试验总阳性率分别为CCCP抑制法73.8%,PAβN抑制法72.5%。MexA的表达主要增强对美罗培南、三代头孢菌素、氟喹诺酮类、大环内酯类的耐药,且随表达量的增加而增强。MexC型主要增强对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、三代头孢菌素、哌拉西林/他唑巴坦类的耐药性,且随表达量的增加而增强。MexX型外排泵的表达主要增强对氨基糖苷类、大环内酯类、氟喹诺酮类和氨曲南的耐药性。MexA和MexC型同时表达与MexA型一致,并增强了对氟喹诺酮类的耐药。MexA和MexX型同时表达与MexA型一致,并增强了对庆大霉素的耐药而降低了对氟喹诺酮类的耐药性。结论 Pa的外排泵基因的表达量与特定种类的药物耐药程度有关,外排泵基因的高表达参与并加剧了Pa的耐药性。

多药耐药大肠埃希菌老年患者分离株抗菌制剂11种外排泵基因研究

目的了解多药耐药大肠埃希菌中外排泵基因的存在情况。方法微量稀释法检测耐药菌株的药敏结果,采用聚合酶链反应(PCR)扩增法,检测11种抗菌制剂外排泵基因:emrB、emrD、emrE、mdfA、sugE、mdtI、tehA、oqxA、qacE△1、qacEs、mr-2等11种抗菌制剂外排泵基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60%,对复方新诺明耐药率为95%,对第三代头孢菌素耐药率为100%(均为产ESBLs菌株),外排泵基因检出率分别为emrB 95.0%、emrD 75.0%e、mrE 50.0%、mdfA 80.0%、sugE 70.0%、mdtI 80.0%、qacE△1 80.0%、tehA 80.0%、oqxA 15.0%,qacE、smr-2基因均未检测到,最少者检出1种基因,最多1株检出9种基因。结论本组分离的大肠埃希菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、氯霉素等抗菌药物呈多重耐药,可能与细菌携带多种抗菌制剂(包括灭菌剂、消毒剂、抗菌药物等)外排泵基因相关。

四环素外排泵耐药基因tet40和tet42的研究进展

四环素类药物是发现于上个世纪40年代的一类广谱抗生素,从50年代开始应用于医学临床[1]。由于其具有抗菌谱广和毒性低等特点,因而在兽医临床上得到广泛应用,成为用于防治细菌性感染的常见药物。随着药物使用年限的增加,

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌adeB外排泵基因表达与多重耐药相关的研究

目的了解临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药情况,并探讨对碳青霉烯类药物耐药与AdeABC主动外排泵表达及碳青霉烯酶OXA-23存在的关系。方法采用琼脂二倍稀释法测110株临床分离菌对常用20种抗菌药物的MICs;用泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)检测分离菌的外排表型;用PCR技术扩增外排泵结构基因adeB、adeJ、abeM及碳青霉烯酶基因bla OXA-23;RT-PCR方法检测adeB的mRNA相对表达量。结果 32株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌除对多黏菌素B全部敏感外,对其他抗菌药物的耐药率均大于90%;96.9%(31/32)的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌含adeB、adeJ和bla OXA-23基因,93.8%(30/32)的含abeM基因。另78株敏感菌中,adeB、adeJ、abeM基因的检出率分别为78.2%、79.5%和80.8%;与耐药菌相比,敏感菌的adeB基因mRNA相对表达量显著较低。110株临床分离菌中,美罗培南加CCCP共筛出15株泵阳性菌。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对临床常用的多种抗菌药物耐药;外排泵机制和碳青霉烯酶OXA-23在介导鲍曼不动杆菌多重耐药中具有重要作用。

主动外排泵外膜蛋白编码基因hefA在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用

目的:研究幽门螺杆菌(Hpylori)分离株的多重耐药机制.方法:用氯霉素对临床分离株Hpylori和标准株Hpylori进行体外诱导,琼脂稀释法测定诱导后菌株对甲硝唑、四环素、琥乙红霉素、环丙沙星和青霉素G的耐药性,从而筛选出多重耐药株;实时定量PCR检测多重耐药株和敏感株中编码主动外排泵外膜蛋白的结构基因hefA的mRNA水平.通过构建hefA基因敲除株,测定敲除前后菌株对10种抗生素的敏感性.PCR扩增20株Hpylori临床分离株主动外排泵结构基因hefA和hefC.结果:经氯霉素诱导后,筛选出的耐药菌株均表现出相似的多重耐药性,6株多重耐药株hefA基因mRNA水平显著高于敏感株(5.8466±2.9370vs2.6356±1.7245,P=0.033);成功构建了hefA基因敲除株(△HpLZ1026),△HpLZ1026对4种抗生素的敏感性明显增加;所有20株临床分离株中均检测出hefA和hefC基因,未发现hefABC基因缺失株.结论:主动外排系统hefA基因高表达导致体外人工诱导Hpylori多重耐药的产生;hefABC基因在Hpylori中普遍存在,且在Hpylori多药耐药机制中起重要作用.