FoxA1及RNF6在宫颈鳞状细胞癌的表达及意义

目的探讨FoxA1及RNF6在宫颈鳞状细胞癌的表达及意义。方法回顾性分析164例宫颈鳞状细胞癌患者(PE组)及164例慢性宫颈炎患者(对照组)的临床资料及保存良好的病理组织标本。采用实时定量PCR技术及免疫组织化学方法检测2组患者病理组织FoxA1及RNF6蛋白、mRNA的表达情况。结果PE组FoxA1及RNF6蛋白、mRNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论FoxA1及RNF6可能通过调节基因表达及蛋白酶作用增强肿瘤细胞增殖、分化,在宫颈鳞状细胞癌生长中发挥重要作用。

结直肠侧向发育型肿瘤组织中RNF6蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠侧向发育型肿瘤(LST)组织中RNF6蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法LST患者33例、结直肠隆起型腺瘤(PA)患者37例、结直肠癌患者35例均接受手术治疗,手术过程中留取切除的肿瘤组织分别记为LST组、PA组、CRC组,留取结直肠癌患者的癌旁正常组织(距癌组织>5 cm)记为Control组。采用免疫组织化学染色法检测各组织中RNF6蛋白,采用半定量评分法评估蛋白表达情况,包括阳性表达率和阳性程度,并分析RNF6蛋白表达与LST患者临床病理参数的关系。结果癌旁正常组织多数不染色或染色颜色较浅、阳性面积小,而结直肠癌组织中RNF6蛋白染色较深,多数呈棕黄色颗粒沉积,PA组织及LST组织的染色程度介于癌旁正常组织及结直肠癌组织中间。Control组、PA组、LST组、CRC组RNF6蛋白阳性表达率分别为40%、51.4%、75.8%、91.4%,组间相比,P均<0.05。Control组、PA组、LST组、CRC组RNF6蛋白阳性强度呈递增趋势(P均<0.05)。RNF6蛋白表达与LST患者上皮内瘤变级别有关(P<0.05),上皮内瘤变级别越高的LST组织中RNF6蛋白阳性表达越强(Z=-2.456,P=0.014)。结论LST组织中RNF6蛋白的阳性表达率和阳性强度高于癌旁正常组织和PA组织,低于结直肠癌组织。上皮内瘤变级别越高的LST组织中RNF6蛋白阳性表达越强。

hRNF6基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到工具细胞HEK-293中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-RNF6在工具细胞CV-1和胃癌SGC-7901细胞内的定位。结果 hRNF6全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-his A和pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2058bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为78kDa。pEGFP-RNF6在CV-1细胞和胃癌SGC-7901细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功的构建了hRNF6全长基因真核表达载体,pEGFP-RNF6蛋白主要定位于胃癌细胞核内。

转染RNF6基因对肝癌细胞IRS-2表达的影响

构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并探讨其对胰岛素受体底物1(IRS-2)表达的影响。以人cDNA为模板,PCR扩增RNF6全长编码基因,并将其克隆至载体pcDNA3.1-CHA中,将重组质粒转染肝癌细胞株HepG2,利用Real time-PCR、Western blot检测细胞内IRS-2 mRNA水平及蛋白表达情况。携带RNF6目的基因的质粒转染HepG2细胞48 h后IRS-2的mRNA表达降低,为对照组的37%,显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。RNF6引起IRS-2的表达下调,这一过程可能由于泛素化导致胰岛素信号转导通路障碍。

环指蛋白6在肿瘤中的研究进展

环指蛋白6(ring finger protein 6,RNF6)是含有RING结构域的泛素连接酶E3,可作为骨架招募E2和靶蛋白,介导泛素由E2转移到底物特定位点。RNF6可通过泛素化修饰底物蛋白改变其表达水平,也可改变底物功能。RNF6参与SHP1/STAT3、Akt/mTOR、Wnt/β-catenin、ERα/Bcl-xL、MAPK/ERK、MAD1/c-myc等信号通路的调控,与多种恶性肿瘤的发生发展相关。靶向抑制RNF6表达或可作为抑制肿瘤发生发展的一种方法,但仍需大量研究。本文通过查阅近年来涉及泛素连接酶RNF6的文献,综述RNF6的发现历程、结构特征及其与恶性肿瘤的关系,旨在为后续深入研究RNF6对肿瘤的影响提供理论基础。