Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 观察Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌的表达变化及其与浸润性乳腺癌临床病理指标的相关性,探讨Slit2/Robo1信号通路对浸润性乳腺癌病理过程的调控作用。方法 应用免疫组织化学法观察Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织的表达;应用卡方检验或校正的卡方检验分析Slit2和Robo1在各组间阳性率差异;采用方差分析、Kruskal-Wallis或Mann-Whitney U检验分析Slit2和Robo1的免疫组织化学染色量差异;采用非参数Spearman等级相关分析检验Slit2和Robo1与浸润性乳腺癌临床病理指标相关性。结果 Slit2定位表达于细胞质;Robo1定位表达于细胞质和细胞核。Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌的表达率和表达量明显低于乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织。在浸润性乳腺癌中,Slit2和Robo1具有高度相关性,且Slit2与ER、PR、Her2呈正相关(P<0.05);Robo1与ER、PR呈正相关(P<0.05)。Slit2/Robo1与浸润性乳腺癌患者年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、病理分期和组织学分级无关(P>0.05)。结论 Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌低表达,且与其发生、发展和预后存在相关性,提示Slit2/Robo1信号通路可能参与浸润性乳腺癌的病理过程,发挥调控作用。

Slit2/Robo1信号通路蛋白在早期糖尿病肾病肾小球中的表达及临床意义

目的探讨早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾小球中Slit2和Robo1的表达与肾小球内皮细胞增生的关系及临床意义。方法收集符合Tervaert’s糖尿病肾病病理分型Ⅰ~Ⅱa期,患者24 h尿蛋白>30 mg且<500 mg,肾小球滤过率(estimate glomerular filtration rate,e GFR)>90 m L/(min·1.73 m2)等纳入标准的19例2型糖尿病DN标本,以及15例正常肾组织手术标本,采用HE染色、PAS染色和电镜观察DN肾小球组织形态结构的变化,免疫组化检测Slit2、Robo1和血管内皮细胞标记物CD31在肾小球中的表达,分析DN肾小球中Slit2和Robo1与CD31表达的相关性,以及Slit2、Robo1和CD31的表达与24 h尿蛋白以及e GFR的相关性。结果早期DN存在肾小球肥大、系膜基质轻度增多、基底膜增厚、毛细血管扩张、血管内皮细胞增大和增多等典型早期DN病理特征。Slit2表达于肾小球血管内皮、肾小管上皮和系膜细胞区域;Robo1表达于肾小球血管内皮、肾小管上皮和足细胞区域。与正常肾组织相比,早期DN肾小球中CD31的表达水平显著增高。早期DN肾小球中Slit2和Robo1的表达较正常肾组织也显著性增高(P<0.01)。相关性分析显示,早期DN肾小球中Slit2和Robo1的表达与CD31表达呈显著正相关(r=0.73,P<0.01;r=0.72,P<0.01);早期DN肾小球中Slit2、Robo1和CD31表达与e GFR呈显著正相关(r=0.78,P<0.01;r=0.81,P<0.01;r=0.57,P<0.05);早期DN肾小球中Slit2、Robo1和CD31表达与24 h尿蛋白也呈显著正相关(r=0.46,P<0.05;r=0.49,P<0.05;r=0.47,P<0.05)。结论 Slit2/Robo1信号通路可能通过参与早期DN肾小球内皮细胞增生促进病理性血管生成,从而加速蛋白尿的进展。

大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺后Slit2、Robo1的表达研究

目的探讨神经生长导向因子slit2及其受体robo1在氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)不同时间后大鼠皮质星形胶质细胞的表达变化及其意义。方法建立培养乳大鼠皮质星形胶质细胞OGD模型,并分为OGD 0h组(对照组)、2h组、4h组、6h组和12h组。相差显微镜观察各组的细胞形态,MTT法检测各组的细胞活力,RT-PCR法检测各组slit2mRNA和robo1 mRNA的相对表达情况。结果 (1)对照组、OGD 2h组、4h组、6h组和12h组的细胞活力(OD值)分别为0.756±0.013、0.681±0.016、0.563±0.033、0.404±0.024和0.222±0.026,细胞活力随着氧糖剥夺时间延长而下降,呈时间依赖性(P<0.01)。(2)氧糖剥夺后,统计结果显示不同组别星形胶质细胞slit2 mRNA和robo1 mRNA表达先逐渐升高,6h组达高峰(与对照组比,P<0.05),12h组明显下降(与6h组比,P<0.01)。结论 slit2/robo1信号通路可能参与缺血后抑制性微环境的形成,影响神经的再生修复过程。

Slit2/Robo1蛋白在直肠癌中的表达及与微血管密度的关系

目的研究直肠癌中Slit2/Robo1蛋白的表达,探讨两者与直肠癌微血管密度(MVD)及生物学行为的关系。方法免疫组化SP法检测65例直肠癌组织及相应43例对照组织中Slit2/Robo1蛋白的表达水平及MVD计数,研究在直肠癌中Slit2/Ro-bo1蛋白的表达强度与MVD关系,观察不同临床病理学行为下Slit2/Robo1蛋白的表达变化。结果(1)直肠癌组织中Slit2/Robo1蛋白阳性表达率分别为64.6%和78.5%,对照组织中的阳性表达率分别为4.7%和7.0%,两种组织中表达差异有统计学意义(P<0.01),直肠癌组织中MVD显著增高(t=32.09,P<0.01);(2)Slit2与Robo1阳性表达呈正相关(r=0.551,P<0.01),两者表达阳性的癌组织MVD计数明显大于表达阴性的癌组织(t=5.674,P<0.01,t=6.103,P<0.01);(3)Slit2/Robo1蛋白表达水平与肿瘤大小、浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移相关,统计学检验有显著性差异(P<0.05)。结论(1)Slit2/Robo1蛋白在直肠癌组织中表达较对照组明显增高,并与MVD密切相关,推测Slit2/Robo1蛋白在直肠癌血管生成中起着重要作用;(2)直肠癌组织中Slit2/Robo1蛋白及MVD与直肠癌的生长、侵袭及转移密切相关,临床通过检测Slit2/Robo1蛋白表达强度及MVD计数可作为直肠癌进展程度及预后情况的重要指标。

去泛素化酶USP33通过下调SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭和转移

目的探讨去泛素化酶USP33参与调节SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭转移的机制。方法采用q PCR、免疫组化的方法检查USP33在肺腺癌中的表达,利用A549、SPC-A-1细胞,以沉默USP33后作为沉默组,空白组作为对照,72 h后用q PCR与Western blot检测USP33的沉默效果,利用划痕实验、细胞迁移和侵袭基质胶法检测USP33沉默后对细胞侵袭转移的影响,利用Western blot检测USP33的沉默后SLIT2和ROBO1表达,IL6刺激后USP33的表达。结果 q PCR、免疫组化显示与肺腺癌癌组织相比,癌旁组织USP33表达量明显增加(P<0.05);与空白组相比,qPCR、Western blot结果显示沉默组USP33的表达量明显下降(P<0.05);划痕实验,Transwell迁移实验,Boyden侵袭实验提示USP33沉默后细胞迁移、侵袭转移率明显增加(P<0.05);抑制USP33后,SLIT2和ROBO1表达均下调;IL6刺激使USP33的表达增加(P<0.05)。结论 USP33抑制A549、SPC-A-1细胞迁移、侵袭转移,其侵袭转移的机制可能与炎症因子IL6、SLIT2/ROBO1信号通路存在交叉作用。

Slit2/Robo1与输卵管妊娠患者输卵管中滋养层细胞浸润程度及血管重塑的关系

目的研究Slit2蛋白、Robo1蛋白与输卵管妊娠中滋养层细胞浸润程度及血管重塑的关系。方法选取2018年5月至2019年3月在我院接受腹腔镜下患侧输卵管切除术治疗的74例输卵管壶腹部妊娠患者的输卵管样本为实验组,并根据滋养层细胞浸润输卵管壁的深度分为Ⅰ级组、Ⅱ级组和Ⅲ级组,同期接受手术切除治疗的20例子宫肌瘤或子宫内膜良性病变患者的输卵管样本为正常组。将输卵管样本切片并进行免疫组化法染色,检测各组样本中Slit2蛋白、Robo1蛋白的表达,另通过检测CD34的表达进行微血管密度(MVD)定量计数。结果实验组74例患者滋养层细胞浸润输卵管壁深度包括Ⅰ级27例,Ⅱ级29例,Ⅲ级18例。正常组输卵管组织中有1例Slit2阳性表达(5.0%),2例Robo1阳性表达(10.0%);实验组EP输卵管组织中Slit2阳性表达35例(47.3%),Robo1阳性表达41例(55.4%),且阳性表达率随着滋养层细胞浸润深度(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级亚组)递增(P<0.05)。正常组以及实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级亚组间MVD计数两两比较均有显著差异(P<0.05)。实验组中,Slit2蛋白与Robo1蛋白表达呈正相关性(r=0.603,P<0.001);Slit2表达阳性者MVD计数显著高于Slit2表达阴性者MVD计数(P<0.05);Robo1表达阳性者MVD计数显著高于Robo1表达阴性者MVD计数(P<0.05)。结论在输卵管妊娠组织中,Slit2蛋白、Robo1蛋白的表达随滋养层细胞浸润分级的升高而增加,并且可能具有促进血管新生的作用。

大鼠坐骨神经横断后背根节Robo1表达的时空模式

目的：观察周围神经损伤对脊神经节（DRG）Robo1表达的影响，初步了解Robo1在周围神经再生中的作用。方法：横断成年SD大鼠坐骨神经或脊神经后根，术后3、7、14、21、28d取其腰4-6DRG，用RT-PCR和免疫组织化学方法检测Robo1表达，免疫荧光双标法检测Robo1与Robo2有否共表达。结果：坐骨神经横断能上调DRG Robo1的表达，术后7-14d达高峰，而脊神经后根切断对其表达无影响；DRG感觉神经元不共表达Robo1和Robo2。结论：Robo1在DRG内的表达存在细胞特异性，周围突受损能上调Robo1在DRG中的表达，其表达模式与多数神经营养因子类似，提示Robo1可能参与感觉神经元再生过程。

Slit2-Robo1信号阻断抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化Slit2-Robo1信号阻断抗体(R5抗体)及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤3B2.3和CRL-1608细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化R5抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,R5抗体及对照抗体的质量浓度分别为0.986 mg/mL和3.57 mg/mL。结论应用层析法和Protein A亲和层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。

慢病毒介导的ROBO1沉默抑制乳腺癌细胞生长克隆及ATP合成

目的研究沉默ROBO1对乳腺癌细胞生长、克隆及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-231感染ROBO1 siRNA重组病毒和siRNA control重组病毒记为干扰组和阴性组,以不做处理的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot检测细胞中ROBO1 mRNA和蛋白水平,以MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,荧光素酶法检测细胞合成的ATP水平,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21蛋白水平。结果阴性组细胞中ROBO1 mRNA和蛋白水平、细胞OD值、克隆形成率、ATP水平、细胞周期比率及cyclin D1、p21蛋白水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。干扰组细胞中ROBO1mRNA和蛋白水平降低,细胞OD值也降低,克隆形成率及ATP水平下降,G_0/G_1期细胞比率升高,细胞中cyclin D1蛋白水平降低,p21蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默ROBO1抑制乳腺癌细胞的生长、克隆及ATP合成能力,并且能将细胞周期阻滞在G_0/G_1期。

siRNA靶向干扰ROBO1基因表达对食管癌细胞周期、增殖及相关蛋白的影响

目的研究siRNA靶向干扰轴突导向受体蛋白(ROBO)1基因表达对食管癌EC109细胞增殖、细胞周期的影响及可能作用机制。方法实验将食管癌EC109细胞随机分为空白组、对照组、siRNA-ROBO1组,采用脂质体将阴性siRNA和siRNAROBO1转染EC109细胞;Western印迹检测ROBO1、细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白的表达;CCK-8实验检测细胞的增殖活力;流式细胞仪检测EC109细胞周期的变化。结果干扰ROBO1表达后,EC109细胞中ROBO1蛋白的表达量较空白组显著降低(P<0.05),细胞增殖活性显著降低(P<0.05),G0/G1期细胞显著增加(P<0.05),G2/M期细胞显著降低(P<0.05),且siRNA-ROBO1组细胞中Ki-67、PCNA、Cyclin D1表达量较空白组明显降低(P<0.05)。结论ROBO1可能通过影响食管癌细胞增殖、周期相关蛋白水平使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制食管癌细胞增殖。

Slit2/Robo1信号对鸡胚早期神经管及体节发育的影响

目的:探讨Slit2/Robo1对鸡胚早期神经管和体节发育的影响。方法:显微注射法将质粒注射入HH10期胚胎神经管内,活体胚胎细胞电穿孔方法转染胚胎半侧神经管,以另一侧神经管为对照侧,原位杂交及免疫荧光方法观察转染10 h后神经管的发育和神经嵴细胞迁移至体节的情况。结果:下调Robo1侧神经管发育较正常对照侧异常,同时发现Slug表达和神经嵴细胞迁移至体节路线发生改变。结论:Slit2/Robo1信号可能通过影响Slug基因表达,对胚胎早期神经管闭合、神经嵴细胞正常产生及迁移方向以及体节分化有重要作用。

Robo1基因miR-218靶位点序列克隆及其突变体构建

目的克隆Robo1基因3'UTR的miR-218靶位点区域序列并构建"seed"区位点突变体,以便进一步研究miR-218对Robo1基因的调控作用。方法通过targetscan 6.2对Robo1 3'UTR进行分析找出miR-218靶位点,根据NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从人类细胞总RNA中对包含miR-218靶位点的序列进行克隆;并设计一对突变引物,通过重叠PCR法获得"seed"区点突变基因序列;通过双荧光报告基因检测miR-218对Robo1基因的调控。结果经测序验证,成功克隆了目的基因序列,并成功构建了"seed"区点突变体,并且通过报告基因检测发现miR-218对Robo1表达有显著抑制(P<0.05)。结论成功克隆了含有miR-218靶位点的Robo1 3'UTR基因序列及构建了"seed"区点突变体,并阐明miR-218直接作用于Robo1基因3'UTR区,为进一步研究miR-218对Robo1基因的转录后调控机制奠定了基础。

MiR-218通过抑制Robo1的表达影响肺癌细胞迁移侵袭

背景与目的本研究旨在探讨肺癌中miR-218的表达,研究miR-218在肺癌细胞中的功能及其可能的分子机制。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测15例肺癌组织和15例癌旁组织中miR-218的表达。在肺癌细胞A549中转染miR-218的抑制物(Anti-miR-218),在肺癌细胞HCC4006中转染miR-218的模拟物后,用Transwell实验检测细胞的迁移侵袭能力的变化。用Targetscan和MiRanda软件预测miR-218的可能靶点,转染miR-218的抑制物及模拟物后用qRT-PCR和Western blot检测Robo1的mRNA和蛋白表达水平。用双荧光素酶报告基因方法鉴定miR-218和Robo1的调控关系。用Anti-miR-218、miR-218模拟物或阴性对照与Si-Robo1或Si-NC同时转染细胞,应用Transwell实验检测转染后细胞的侵袭迁移能力的变化。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-218在肺癌组织中表达水平显著降低(P<0.01)。在A549细胞中转染miR-218的抑制物,能够显著降低miR-218的表达,促进了细胞的迁移侵袭。在HCC4006中转染miR-218的模拟物能够显著提高miR-218的表达,同时抑制了细胞的迁移侵袭能力。利用生物信息学预测出在Robo1的3′UTR区有miR-218的结合位点,双荧光素酶报告基因实验进一步证实miR-218能够调控Robo1的转录活性。抑制miR-218能够提高Robo1的表达;过表达miR-218显著降低Robo1的表达,且miR-218能够通过调控Robo1影响细胞的迁移侵袭。结论 MiR-218在肺癌组织中呈现低表达状态,miR-218可能是通过抑制Robo1的表达抑制肺癌细胞侵袭迁移。

肺癌相关的 Slit2－Robo1信号通路的研究进展

恶性肿瘤的生长和转移离不开新生血管的形成。 Slit2－Robo1信号通路最初是在神经系统中被发现，且在轴突导向生长和神经细胞迁移过程中发挥重要作用，血管系统和神经系统的结构和功能具有相似之处，近年来研究发现Slit2－Robo1信号通路在血管系统，特别是肿瘤血管中具有重要的作用，并在不同肿瘤中发挥的作用不同，已发现Slit2－Robo1可以抑制乳腺癌脑转移的扩散，同时，Slit2－Robo1也可以促进黑素瘤中的肿瘤生长。本文对与肺癌相关的Slit2－Robo1信号通路现状做一综述。

电针对坐骨神经损伤模型大鼠再生修复 Robo1及SrGAP1蛋白的影响

目的观察电针对坐骨神经损伤大鼠再生修复Robo1及SrGAP1蛋白的影响,探讨其可能作用机制。方法将90只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、电针组,每组30只。模型组、电针组采取横断法建立坐骨神经损伤模型,造模后电针组取环跳、足三里行电针治疗,日1次,7 d为1个疗程,共治疗3个疗程。观察空白组、模型组及电针组治疗后大鼠的大体状态、腓肠肌湿质量(WWG)恢复率、坐骨神经形态学变化及大鼠第4~6腰椎(L4~L6)脊髓中Robo1、SrGAP1蛋白的表达情况。结果空白组大体状态未见明显异常;模型组足趾仍蜷曲,行走时仍为跛行状态;电针组大鼠足趾明显张开,大体可正常行走。与空白组比较,模型组、电针组WWG恢复率均降低(P<0.05);与模型组比较,电针组WWG恢复率升高(P<0.05)。大鼠坐骨神经形态学变化,光镜下模型组坐骨神经损伤处明显肿胀增粗,与周围血管、肌肉组织发生粘连,神经纤维排列紊乱;电针组大鼠坐骨神经损伤处无明显肿胀或缩窄现象,排列较完整,与空白组最为接近。大鼠L4~L6脊髓中Robo1、SrGAP1蛋白表达模型组、电针组与空白组比较增高(P<0.05),大鼠L4~L6脊髓中Robo1、SrGAP1蛋白表达电针组低于模型组(P<0.05)。结论电针可调整坐骨神经损伤大鼠相应脊髓(L4~L6)段中Robo1、SrGAP1蛋白表达水平,激活Slit2-Robo1-SrGAP1信号转导通路,这可能是电针治疗促进坐骨神经损伤再生修复和功能康复的机制之一。

尤瑞克林对局灶性脑梗死大鼠Slit2/Robo1表达的影响

目的:研究神经导向因子Slit2及其受体Robo1在大鼠脑梗死模型和尤瑞克林干预后的缺血脑组织中的表达变化。方法:54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和尤瑞克林组,再随机分为梗死后缺血1 d、3 d、7 d三个亚组,每组各6只。采用线栓法制备大鼠永久性大脑中动脉缺血(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型。尤瑞克林组给予尤瑞克林尾静脉注射,模型组给予等体积生理盐水。应用Westernblot方法检测不同时间点Slit2蛋白和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在缺血脑组织中的表达情况;RT-PCR方法检测不同时间点Robo1 mRNA的表达情况。结果:与假手术组相比,模型组和尤瑞克林组Slit2蛋白和eNOS蛋白的表达在各时间点均明显增高;尤瑞克林组与模型组相比,两蛋白在各时间点均呈现高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。且Slit2蛋白和eNOS蛋白的表达变化呈显著正相关(P<0.01)。Robo1在模型组和尤瑞克林组中表达较假手术组早期明显降低,在3 d开始上升,呈升高趋势,7 d仍未达到假手术组大鼠的表达水平(P<0.05)。结论:局灶性脑梗死后大鼠Slit2蛋白表达升高,且Slit2可能参与大鼠脑梗死后血管新生过程,尤瑞克林可能通过升高Slit2/Robo1促进大鼠脑梗死后的血管新生过程。

小鼠肾发育中Slit2及其受体Robo1的表达

目的观察并检测Slit2及其受体Robo1在小鼠肾发育中的表达变化。方法通过免疫组织化学技术系统观察小鼠肾脏Slit2和Robo1的表达和定位;应用蛋白印迹技术检测小鼠肾脏Slit2和Robo1表达的变化规律。结果 Slit2和Robo1在胚龄12 d小鼠肾脏生肾区开始表达;Slit2在小鼠输尿管芽及其周围的间充质聚集的部位阳性表达,Robo1在小鼠肾脏生肾区广泛表达,主要分布于生后肾组织和输尿管芽上皮细胞基底面;在肾单位发育过程中,Slit2定位表达于逗号小体阶段和S小体阶段,且表达较强,在Ⅲ期肾小体阶段、Ⅳ期肾小体阶段及成熟肾小体阶段有微弱表达;Robo1定位表达于逗号小体阶段、S小体阶段、Ⅲ和Ⅳ期肾小体阶段,且表达较强,在成熟肾小体阶段有微弱表达;Slit2及其受体Robo1在肾脏泌尿小管如近端小管、远端小管及集合管发育过程中均有表达。蛋白印迹检测从小鼠胚龄14 d开始,Slit2表达先递增,至胚龄16 d达峰值,而后逐渐递减。Robo1表达从小鼠胚龄14 d开始逐渐递减。结论 Slit2及其受体Robo1参与肾输尿管芽的萌出、输尿管芽与生后肾组织的诱导、肾小体发育及泌尿小管发育和成熟过程。

人脑胶质瘤miR-218和Robo1的表达及意义

目的研究人脑胶质瘤微小核糖核苷酸-218(mi R-218)和Robo1的表达及意义。方法选取Ⅰ和Ⅱ级胶质瘤患者的脑组织10例,行颅内减压的正常脑组织10例、Ⅲ级胶质瘤脑组织10例、Ⅳ级肿瘤脑组织10例,使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测微小RNA218的表达量,采用免疫组织化学和WB的方法检测组织中Slit2蛋白和Robo1蛋白的表达水平,分析mi R-218与Slit2-Robo1通路的关系。结果从正常组织、低级别胶质瘤到高级别胶质瘤,其微小RNA218、Slit2联合Robo1的表达量依次降低,Robo1的表达逐渐升高。结论当肿瘤组织中微小RNA218的表达减少时,Slit2蛋白的表达也同时降低,而Robo1蛋白的表达则异常增高,3种物质的水平与肿瘤的良恶程度有重要关系。

人脑膜瘤组织Slit2、Robo1的表达与术后复发的关系

目的 探讨人脑膜瘤Slit、Robo的表达与术后复发的关系。方法 收集2016年1月至2021年4月手术切除的脑膜瘤104例,另选取颅脑损伤内减压术切除的非肿瘤脑组织50例(对照组),用免疫组织化学染色法检测Slit2、Robo1的表达水平。术后随访1年,判断肿瘤复发情况。结果 104例中,术后1年复发22例,复发率为21.15%。脑膜瘤组织Slit2低表达率[37.50%(39/104)]明显低于对照组[70.00%(35/50);P<0.05]。脑膜瘤组织Robo1高表达率[59.61%(62/104)]明显高于对照组[34.00%(17/50);P<0.05]。多因素logsitic回归分析显示,Slit2低表达、Robo1高表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论 脑膜瘤组织Slit2呈低表达,而Robo1呈高表达,二者均与术后复发有关。

微小RNA-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选取郑州大学第一附属医院2017年1月到2021年12月手术切除的59例胆囊癌及其癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-146b-5p表达水平;采用免疫组织化学分析两种组织Robo1蛋白表达水平。采用转染试剂转染miRNA对照和miR-146b-5p抑制剂至人胆囊癌细胞系GBC-SD,分别命名为miRNA对照组和miR-146b-5p KD组,采用噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验分析两组细胞活力和增殖能力;采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力;采用生物信息学和荧光素酶报告基因分析miR-146b-5p的靶基因;采用Western blot分析靶基因表达水平。计量数据比较采用t检验。结果胆囊癌组织miR-146b-5p表达水平(1.01±0.16)明显低于癌旁组织(1.94±0.30),差异有统计学意义(t=20.860,P<0.05)。miRNA对照组细胞吸光度值高于miR-146b-5p KD组(2.22±0.10比1.76±0.06,t=9.294,P<0.05),miRNA对照组细胞克隆形成率高于miR-146b-5p KD组[(85.75±5.16)%比(63.20±5.66)%,t=7.210,P<0.05],miRNA对照组细胞划痕愈合率高于miR-146b-5p KD组[(72.85±5.91)%比(55.56±6.53)%,t=4.806,P<0.05],miRNA对照组细胞迁移数量多于miR-146b-5p KD组[(110.83±16.18)个比(75.66±11.70)个,t=4.313,P<0.05],miRNA对照组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平低于miR-146b-5p KD组(0.94±0.06比1.30±0.17,t=5.081,P<0.05),miRNA对照组细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和SNAIL蛋白表达水平高于miR-146b-5p KD组(1.28±0.10、0.91±0.09比0.84±0.08、0.52±0.10,t=8.436、7.256,P<0.05),差异均有统计学意义。Robo1是miR-146b-5p的靶基因。miRNA对照组细胞Robo1蛋白表达水平(1.19±0.16)明显高于miR-146b-5p KD组(0.64±0.11),差异有统计学意义(t=6.881,P<0.05)。胆囊癌组织Robo1蛋白表达水平(1.06±0.13)明显高于癌旁组织(0.60±0.11),差异有统计学意义(t=21.000,P<0.05)。结论miR-146b-5p参与胆囊癌细胞的增殖和凋亡,主要通过靶向Robo1蛋白来实现的。