桔梗总皂苷对反流性食管炎大鼠食管黏膜损伤的修复作用及对TLR4/NF-κB通路的影响

目的:探讨桔梗总皂苷对反流性食管炎(RE)大鼠食管黏膜损伤的修复作用及其机制。方法:75只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组(兰索拉唑+莫沙必利)、桔梗总皂苷高剂量组和桔梗总皂苷低剂量组,每组15只。除正常对照组外,其余各组大鼠均建立RE模型。连续给药14 d后,采用苏木精-伊红(HE)染色观察食管黏膜病理组织学变化并进行损伤评分,ELISA法检测食管黏膜组织TNF-α、IL-6、MDA含量和SOD活力,Western blotting法和RT-PCR法检测TLR4/NF-κB信号通路蛋白及mRNA相对表达量。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量降低,死亡率增加,食管黏膜组织损伤明显,病理学评分升高,黏膜组织SOD活力降低,TNF-α、IL-6、MDA含量增加,TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白及mRNA相对表达量均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,桔梗总皂苷高、低剂量组大鼠体质量增加,死亡率降低,食管黏膜组织损伤减轻,病理学评分降低,黏膜组织SOD活力升高,TNF-α、IL-6、MDA含量降低,TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白及mRNA相对表达量均减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:桔梗总皂苷能够改善反流性食管炎大鼠食管黏膜损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。

烟酰胺核糖对EAE小鼠的外周抗炎作用及其机制研究

目的探讨烟酰胺核糖(NR)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的外周抗炎作用及机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35~55肽段(MOG35-55)诱导C57BL/6雌性小鼠制备EAE模型,随机分为EAE模型组和NR治疗组。EAE模型组每只小鼠按200μl/d剂量灌胃给予生理盐水,NR治疗组每只小鼠按500 mg/kg、200μl/d剂量灌胃给予NR,观察并记录各组小鼠临床评分和体质量。免疫后第28天处死小鼠,制备脾脏和脊髓冰冻切片,提取脊髓组织蛋白。HE染色检测外周炎性细胞浸润脊髓,免疫荧光染色检测小鼠脊髓CD4^(+)T细胞、CD68^(+)巨噬细胞数量,Western blot检测小鼠脊髓IFN-γ、IL-1β表达,免疫荧光染色检测小鼠脾脏ROCK-Ⅰ^(+)细胞、TLR4^(+)细胞、p-NF-κB^(+)细胞、TNF-α^(+)细胞、IL-1β^(+)细胞、IFN-γ^(+)细胞、IL-6^(+)细胞、IL-10^(+)细胞、IL-17^(+)细胞、i NOS^(+)细胞、Arg-1^(+)细胞数量。结果与EAE模型组相比,NR显著推迟EAE小鼠发病时间(P<0.05),降低临床评分(P<0.05或P<0.01),减轻体质量丢失,阻止外周炎性细胞浸润脊髓(P<0.01),减少脊髓CD4^(+)T细胞、CD68^(+)巨噬细胞数量(P<0.01),下调脊髓IFN-γ、IL-1β炎性因子表达(P<0.05),抑制小鼠脾脏ROCK-Ⅰ、TLR4、p-NF-κB表达(P<0.01),减少脾脏IFN-γ、i NOS、IL-6等促炎因子分泌(P<0.05或P<0.01),促进脾脏抗炎因子Arg-1、IL-10分泌(P<0.05或P<0.01)。结论NR能够有效缓解EAE小鼠临床症状,显著减轻外周和中枢神经系统炎症反应,其机制可能与抑制EAE小鼠脾脏Rho/ROCK信号通路和TLR4/NF-κB信号通路有关。

丹参酮ⅡA调控子宫炎性微环境改善着床障碍大鼠着床窗期子宫内膜容受性的研究

目的观察丹参酮ⅡA对着床障碍模型大鼠子宫炎症微环境和子宫内膜容受性的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法选择动情周期规律的健康6~7周龄SPF级SD大鼠共40只为研究对象,雌雄比为3∶1,进行雌雄鼠合笼后将妊娠成功的20只大鼠按照随机数字表随机分为4组:正常对照组、模型组、丹参酮ⅡA低剂量组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))、丹参酮ⅡA高剂量组(20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只。妊娠第1天,丹参酮ⅡA低剂量组、高剂量组大鼠分别进行相应剂量的丹参酮ⅡA灌胃,连续7 d;正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。除正常对照组外,其余各组在妊娠第4天行颈背部皮下注射米非司酮(5 mg/kg),构建胚胎着床障碍模型。各组大鼠均于妊娠第8天行颈椎脱臼法处死,取材后,采用扫描电镜观察子宫内膜胞饮突数量;Western blot检测子宫内膜植入位点组织中白血病抑制因子(LIF)、血管紧张素2(Ang-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB p65磷酸化蛋白[NF-κB(p-p65)]表达情况;免疫组化法检测大鼠子宫内膜植入位点组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)及p65蛋白表达水平;ELISA检测子宫内膜植入位点组织脂氧素A4(LXA4)、白介素(IL)-1α、IL-1β、IL-6、IL-4表达水平。结果扫描电镜下观察发现,模型组大鼠子宫内膜表面偶见较少数量的胞饮突,而丹参酮ⅡA低剂量组、高剂量组的子宫内膜胞饮突数量明显增加。Western blot检测显示,模型组中LIF、Ang-2和VEGF表达均显著低于正常对照组(P<0.01);丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组LIF、Ang-2和VEGF表达均显著高于模型组(P<0.05);模型组中TLR4、MyD88、p-p65表达水平均显著高于正常对照组(P<0.01);丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组中TLR4、MyD88、p-p65表达水平均显著低于模型组(P均<0.05)。免疫组化染色法显示,模型组中TGF-β1表达水平显著高于正常对照组(P<0.01);丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组中的TGF-β1表达水平均显著低于模型组(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与正常对照组相比,模型组中LXA4、IL-1α、IL-1β和IL-6水平显著增加(P<0.01),IL-4水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组中LXA4、IL-1α、IL-1β和IL-6水平均显著降低(P均<0.05),IL-4水平显著升高(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路进一步改善子宫炎性微环境,进而改善着床障碍模型大鼠着床窗期子宫内膜容受性。

清郁和降汤对反流性食管炎模型大鼠食管组织LPS/TLR4/NF-κB通路及食管黏膜屏障的影响

目的 探讨清郁和降汤治疗反流性食管炎(RE)的可能作用机制。方法 60只雄性SD大鼠中随机选择10只为假手术组,另外50只采用“前胃结扎+外置幽门部分结扎术”建立反流性食管炎模型。将造模成功的40只大鼠随机分成模型组、清郁和降汤组、雷贝拉唑+莫沙比利组和中西药联用组,每组10只。造模后假手术组及模型组分别予蒸馏水1 ml/100 g灌胃,清郁和降汤组予浓度为1.58 g/ml的清郁和降汤灌胃,雷贝拉唑+莫沙比利组予浓度为0.21 mg/ml的雷贝拉唑钠肠溶胶囊溶液和浓度为0.16 mg/ml的枸橼酸莫沙比利分散片溶液灌胃,中西药联用组予清郁和降汤、雷贝拉唑钠肠溶胶囊、枸橼酸莫沙比利分散片灌胃,剂量同上。各组灌胃量均为1 ml/100 g,持续14天。观察大鼠食管组织的病理学改变;检测大鼠血清中及食管组织中脂多糖(LPS)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素8 (IL-8)含量;检测食管组织中Toll样受体4 (TLR4)、核转录因子κB (NF-κB) p65、封闭蛋白1 (Cldn1)、封闭蛋白4 (Cldn4)mRNA及蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠食管黏膜损伤严重,肉眼观察可见充血、糜烂或溃疡,镜下可见食管鳞状上皮增厚并伴有基底细胞增生,黏膜固有层乳头延伸,大量炎性细胞浸润;与模型组比较,各给药组食管黏膜损伤明显减轻。与假手术组比较,模型组大鼠血清及食管组织LPS、IL-1β、IL-6、IL-8表达升高(P<0.01),食管组织TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达升高,Cldn1、Cldn4 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠血清及食管组织LPS、IL-1β、IL-6、IL-8表达降低(P<0.01),食管组织TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达降低,Cldn1、Cldn4 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。与中西药联用组比较,清郁和降汤组、雷贝拉唑+莫沙比利组大鼠血清及食管组织LPS、IL-1β、IL-6、IL-8表达明显升高,TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显升高,Cldn1、Cldn4 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);与雷贝拉唑+莫沙比利组比较,清郁和降汤组大鼠血清LPS表达明显降低,食管组织IL-8表达及TLR4蛋白表达明显升高,Cldn4蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论 清郁和降汤能够减轻RE大鼠食管黏膜损伤,与雷贝拉唑+莫沙比利联用具有协同作用,其机制可能与抑制食管组织LPS/TLR4/NF-κB通路,减轻食管炎症,增强食管上皮屏障功能有关。

活血化瘀通络法对输卵管炎性不孕大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:从TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨活血化瘀通络法治疗输卵管炎性不孕模型大鼠的作用机制。方法:将43只SPF级雌性SD大鼠采用混合菌接种法建立输卵管炎性不孕大鼠模型,随机分为模型组、活血化瘀组、通络组及活血化瘀通络组。另取10只正常大鼠为空白组。空白组和模型组予10 mL·kg;·d;蒸馏水,活血化瘀组、通络组、活血化瘀通络组分别予14.4 g·kg;·d;血府逐瘀汤、通络药、血府逐瘀汤加减合通络药,1次/d,药物灌胃28 d后处死大鼠,腹主动脉采血后留取输卵管组织;ELISA法检测血浆中IL-1β、IL-6及TNF-α含量;RT-PCR和Western Blot法检测输卵管组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及相应蛋白的表达。结果:与模型组比较,活血化瘀组、通络组、活血化瘀通络组可显著降低血浆中IL-1β、IL-6及TNF-α表达量(P<0.05),显著降低输卵管组织中TLR4、MyD88 mRNA及蛋白表达(P<0.05);活血化瘀通络组各指标改善显著优于活血化瘀组和通络组(P<0.05)。结论:活血化瘀通络法可通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥抗炎功效,治疗输卵管炎,优于单用活血化瘀法或通络法。

五香血藤醇提物对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的改善作用

目的 观察五香血藤醇提物对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的改善作用。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性药物组(前列舒通胶囊水溶液354 mg/kg),五香血藤醇提物低、中、高剂量组(63、126、252 mg/kg),每组10只,注射消痔灵进行造模。RT-qPCR法检测miR-155表达,Western blot法检测NF-κB p65、TLR4表达,ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-8水平,比较各组大鼠前列腺组织病理评分,观察病理学改变。结果 与模型组比较,五香血藤醇提物各剂量组大鼠前列腺组织内TNF-α、IL-6、IL-8、NF-κB p65、TLR4、miR-155表达降低(P<0.05);五香血藤醇提物高剂量组与阳性药物组病理评分最低;五香血藤醇提物高剂量组大鼠前列腺组织慢性炎症细胞浸润、腺体增生、血管扩张充血等症状有改善。miR-155表达与NF-κB p65、TLR4、TNF-α、IL-6、IL-8表达呈正相关(P<0.01)。结论 五香血藤醇提物能够改善慢性非细菌性前列腺炎大鼠的炎症,其作用机制可能通过抑制miR-155表达,调控TLR4/NF-κB信号通路。

壮药金母颗粒对盆腔炎性疾病后遗症大鼠的抗炎作用

目的 探讨壮药金母颗粒对盆腔炎性疾病后遗症大鼠的抗炎作用。方法 将70只SD雌性大鼠随机分为空白组,模型组,花红颗粒组,醋酸地塞米松组,壮药金母颗粒高、中、低剂量组,通过金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的混合菌液加机械损伤法建立盆腔炎性疾病后遗症大鼠模型。给药14 d后,各组大鼠取血并解剖,子宫组织行HE染色并进行评分,采用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-10水平,RT-qPCR法及Western blot法检测大鼠子宫匀浆中TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠子宫组织病理评分、血清IL-1β水平和TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),IL-10水平降低(P<0.05);与模型组比较,壮药金母颗粒高剂量组大鼠子宫组织病理评分降低(P<0.05),血清IL-10水平升高(P<0.05),壮药金母颗粒各剂量组大鼠血清IL-1β水平和子宫组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 壮药金母颗粒对盆腔炎性疾病后遗症大鼠具有抗炎作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的表达有关。

旋覆代赭汤对反流性食管炎大鼠模型TLR4/NF-κB的影响

目的观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜与脂多糖(LPS)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、旋覆代赭汤组(简称中药组,9.89 g/kg)、西药(奥美拉唑+莫沙比利,2.58 mg/kg)组,每组15只。除正常对照组外大鼠采用“4.2 mm幽门夹+2/3胃底结扎术”制备酸碱混合反流RE大鼠模型。术后第7天予相应药物干预,持续干预14天。利用光学显微镜观察大鼠食管下段黏膜组织形态学变化;应用ELISA法检测定外周血中LPS含量;采用Western Blot法与RT-PCR法检测食管黏膜组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠食管黏膜镜下损伤最为严重,食管黏膜呈炎性改变,可见急慢性炎细胞浸润,病理积分和外周血中LPS含量升高(P<0.05),食管组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组、西药组病理积分和外周血中LPS含量降低(P<0.05),食管组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达亦明显降低(P<0.05)。结论旋覆代赭汤能够减轻RE模型大鼠食管黏膜的损伤,抑制TLR4、NF-κB的表达,促进食管黏膜损伤的恢复。

补阳还五汤对EAE小鼠免疫调节的作用

目的:探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎的抗炎治疗效果和免疫调节机制。方法:雌性C57BL/6小鼠采用MOG35-55多肽诱导建立EAE模型后,随机分为生理盐水组、补阳还五汤组,每组13只。造模的第3天给药,生理盐水组给予生理盐水25 ml/kg灌胃,补阳还五汤组给予补阳还五汤生药量50 g/kg灌胃,共治疗25 d。每天记录临床症状评分和体重变化。HE染色检测脊髓组织炎细胞浸润,髓鞘染色观察髓鞘脱失情况,免疫荧光技术检测脾脏ROCKⅡ表达。流式细胞术检测脾脏CD4^+T细胞亚群变化。Western blot法检测脊髓TLR4、Myd88、NF-κB、COX-2、ROCKⅡ和脑ROCKⅡ的表达。结果:与生理盐水组比较,补阳还五汤治疗后明显降低EAE小鼠神经功能评分(P<0.001),抑制中枢神经系统炎细胞浸润(P<0.05),减轻髓鞘脱失(P<0.05),增加CD25^+(P<0.05)、IL-10^+(P<0.05)、TGF-β^+(P<0.01)、IFN-γ^+(P<0.05)CD4^+T细胞的比例;抑制外周和中枢ROCKⅡ的表达(P<0.05);减少脊髓TLR4、Myd88、NF-κB、COX-2的表达(P<0.05)。结论:补阳还五汤可以通过抑制ROCKⅡ/TLR4/NF-κB炎性通路和调节外周T细胞亚群比例发挥其抗炎和免疫调节作用。