基于Rho/Rock通路研究麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的机制研究

目的观察麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的作用及可能的作用机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和麝香心痛宁组。采用球囊损伤法制备大鼠腹主动脉血管损伤模型,造模后灌胃给予大鼠麝香心痛宁片(200 mg·kg^(-1)),14 d后将大鼠处死,取其血清及腹主动脉,主动脉血管进行HE染色,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,ELISA法检测大鼠血管组织一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,实时荧光定量PCR和Western blotting检测Rho、Rock1和Rock2 mRNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠腹主动脉血管组织内膜增生,腹主动脉血管部位弹力变弱且管壁增厚。麝香心痛宁治疗后血管内膜损伤程度减轻。与模型对照组相比,麝香心痛宁组大鼠血清SOD、GSH-Px活性升高,MCP-1、MDA活性降低(P<0.05);血管组织NO含量升高,ET-1、VEGF和IL-1β含量降低(P<0.05);Rho/Rock通路相关因子Rock1、Rock2、Rho的表达降低(P<0.05)。结论麝香心痛宁可抑制血管损伤后内膜增生,其作用机制可能与抑制Rho/Rock信号通路有关。

束缚应激通过激活Rho/ROCK通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤

目的探讨Rho/ROCK信号通路在束缚应激诱导大鼠杏仁核血脑屏障损伤过程中的作用及机制。方法选取60只SPF级雄性SD大鼠建立束缚应激模型,将大鼠分为4组:Control组(n=15,每日禁食水6 h);Stress组(n=15,每日束缚6 h);Stress+Fasudil组(n=15,每日束缚6 h,束缚前0.5 h给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液);Fasudil组(n=15,每日给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液)。用高架十字迷宫实验(EPM)检测各组大鼠行为学变化,ELISA检测血清CORT和S100B水平,检测脑组织伊文思蓝(EB)的渗漏情况以评估渗透性的改变,免疫荧光法和Western blotting方法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达变化,Pull-down实验和Western blotting检测Rho/ROCK通路的激活情况,透射电镜观察脑微血管内皮细胞超微结构的形态变化。结果与Control组相比,Stress组和Stress+Fasudil组大鼠表现出了明显的焦虑样行为;Stress组和Stress+Fasudil组血清CORT含量均显著高于Control组(P<0.001);与Control组和Stress+Fasudil组相比,Stress组EB渗漏含量和S100B含量均显著升高(P<0.05);Stress组紧密连接蛋白的表达显著低于Control组和Stress+Fasudil组(P<0.05);Pull-down实验和Western blot分析证实,Stress组RhoA-GTP(P<0.001)、ROCK2(P<0.001)、p-MLC2(P<0.05)的表达显著高于Control组和Stress+Fasudil组;脑微血管内皮细胞超微结构显示,Stress组呈现显著的形态学改变。结论束缚应激能够通过激活Rho/ROCK信号通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤小鼠RhoA/ROCK通路的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤小鼠小胶质细胞P2Y12受体介导的RhoA/ROCK炎症信号通路的影响。方法将C57BL/6J小鼠随机分为Sham组、MCAO组、BYHW-L(低剂量,6.5 g·kg-1)组、BYHW-H(高剂量,26 g·kg-1)组、BYHW-H+MRS2395组,构建大脑中动脉闭塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),通过Longa生物学评分、TTC染色评估小鼠神经功能损伤情况;通过免疫荧光双标染色法、qPCR方法检测小胶质细胞M1、M2表型极化情况;通过Western blot法检测P2Y12受体介导的RhoA/ROCK通路蛋白的表达情况。结果与MCAO组相比,补阳还五汤能改善脑缺血再灌注损伤小鼠的神经功能损伤(P<0.05)和减小梗死体积(P<0.05,P<0.01),增加小胶质细胞从M1型向M2型极化(P<0.05,P<0.01),抑制P2Y12受体蛋白表达(P<0.05,P<0.01),阻断P2Y12介导的RhoA/ROCK通路及通路下游的p38 MAPK磷酸化(P<0.05,P<0.01),抑制炎症损伤(P<0.05,P<0.01)。加入P2Y12受体抑制剂MRS2395未阻断补阳还五汤改善神经功能损伤及抗炎作用。结论补阳还五汤可通过P2Y12受体介导的RhoA/ROCK炎症信号通路改善小鼠脑缺血再灌注后的脑损伤,还可通过其他途径及通路发挥抗炎作用,但具体机制有待进一步探索。

抑制Rho/ROCK通路促进酒精干预星形胶质细胞内吞功能及相关基因Vps37c表达

目的分析酒精及Rho/ROCK路抑制对星形胶质细胞转录组的影响。方法本研究以CTX TNA2大鼠星形胶质细胞为研究对象,选用酒精及Rho/ROCK通路抑制剂法舒地尔进行干预,实验分为对照组、酒精组及法舒地尔组;各组样本干预后Trizol法提取样本总RNA,基于HiSeq平台进行Illumina转录组测序;利用KEGG数据库进行注释及富集分析;qRT-PCR对关键差异基因进行验证。结果酒精组与对照组相比较,获得差异基因14个,KEGG富集分析结果显示,氨基糖和核苷酸糖代谢通路及细胞内吞通路富集程度最高;法舒地尔组与酒精组相比较,获得差异基因149个,KEGG富集分析结果显示,细胞内吞通路排第6位;对照组与酒精组差异基因和酒精组与法舒地尔组差异基因进行差异分析,共获得共有差异基因5个,KEGG富集分析结果显示,细胞内吞通路通路富集程度最高;该通路涉及基因为Vps37c,对该基因进行qRT-PCR验证,结果显示,与对照组相比较,酒精干预后星形胶质细胞Vps37c mRNA表达降低;与酒精组相比较,法舒地尔干预后Vps37c mRNA表达升高。此结果与测序结果一致。结论酒精干预能够抑制星形胶质细胞内吞功能,抑制细胞内吞功能基因Vps37c表达;Rho/ROCK通路抑制能够促进星形胶质细胞内吞功能,促进细胞内吞功能基因Vps37c表达。

α受体介导的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞RhoA/ROCK通路的影响

目的:探讨17β-雌二醇(17β-estraial,E2)对大鼠结肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)RhoA/ROCK通路的影响。方法:体外分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠结肠SMCs。细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体(ER)α与α肌动蛋白(α-SMA)共表达。不同浓度和不同时间E2刺激后,以反转录实时荧光定量qRT-PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达。不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后,Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况。观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2(BSA-E2)、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用。构建ERα、ERβ的siRNA,观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响。结果:细胞免疫荧光示结肠SMC上ROCK1与α-SMA共表达。50 nmol/L E2刺激24 h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达(P<0.05)。Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白pMYPT1、p-CPI17、p-MLC表达。E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组(P<0.05)。ERαsiRNA组可上调RhoA、ROCK1表达(P<0.05)。结论:大鼠结肠SMC上存在ROCK1,E2可抑制RhoA/ROCK通路表达,该作用由雌激素α受体介导。

桃红四物汤对产后血瘀证大鼠Rho/ROCK通路RhoA、p-RhoA及PAI-1蛋白表达的影响

目的探讨桃红四物汤治疗产后血瘀证的作用机制。方法采用米非司酮(8.3mg/kg)和米索前列醇(0.1mg/kg)灌胃早孕鼠,复制血瘀证产后大鼠模型,将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组(法舒地尔,10mg/kg)及桃红四物汤组(9.0g/kg),并设立正常对照组;通过观察大鼠子宫形态及血液流变学指标变化评价桃红四物汤治疗产后血瘀证的疗效,采用免疫印迹法测定ras同源基因A(ras homolog gene,member A,RhoA)、磷酸化RhoA(phospho-RhoA,p-RhoA)蛋白及纤溶酶原激活剂抑制物(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的表达水平。结果桃红四物汤能够明显减轻模型大鼠子宫的炎性反应及红细胞的渗出和聚集,降低全血黏度和血浆黏度(P<0.05,或P<0.01),下调p-RhoA及PAI-1蛋白的表达水平(P<0.01)。结论桃红四物汤治疗产后血瘀证的机制与下调Rho/ROCK通路相关蛋白的表达水平有关。

RhoA/ROCK通路在2型糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用及法舒地尔的干预效果

目的研究RhoA/ROCK通路在2型糖尿病(T2MD)大鼠心肌纤维化形成中的作用及法舒地尔的干预效果。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、法舒地尔干预组,每组10只,除正常组外,其他组均给予高糖高脂饲料,并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,造模完成24 h后,法舒地尔干预组给予盐酸法舒地尔注射液10 mg/kg注射,1次/d,模型组和正常组大鼠给予等量生理盐水注射,持续4周,4周后处死大鼠,取心脏进行称量并计算心脏肥厚指数(HWI),用10%甲醛固定后,光镜及电镜下观察心肌纤维化情况;检测心肌中胶原含量及胶原面积;利用qRT-PCR检测心肌组织中I型前胶原、Rho激酶1(ROCK1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的相对表达水平;利用Western blot检测心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p-MYPT1)、细胞自噬相关蛋白(LC3-I、LC3-II、p62)表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠光、电镜可见心肌组织病理纤维化严重,同时HWI、胶原含量、胶原面积均升高,I型前胶原、ROCK1、TGF-β1的mRNA相对表达水平升高,LC3-II/LC3-I比例降低,p62蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔干预组大鼠光、电镜下心肌组织病理纤维化减轻,同时HWI、胶原含量、胶原面积均降低,I型前胶原、ROCK1、TGF-β1的mRNA相对表达水平降低,LC3-II/LC3-I比例升高,p62蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论T2MD通过激活RhoA/ROCK通路上调心肌细胞中促纤维化细胞因子表达及抑制心肌细胞自噬促进心肌纤维化,法舒地尔可以通过抑制RhoA/ROCK通路干预T2MD引起的心肌纤维化。

lncRNA HOTAIR靶向miR-126激活RhoA/ROCK通路促进喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT

目的:探讨长链非编码RNA-Hox转录反义RNA(long non-coding RNA Hox antisense intergenic RNA,lncRNA HOTAIR)对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及其上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测喉癌组织、癌旁组织和Hep-2细胞中lncRNA HOTAIR、微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)的表达量;下调lncRNA HOTAIR表达,分别通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞侵袭实验和蛋白质印迹法(Western blot)检测Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT能力。利用miRcode分析HOTAIR的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTAIR和miR-126之间的关系。同时上调lncRNA HOTAIR和miR-126的表达,检测lncRNA HOTAIR通过miR-126对Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调miR-126表达后,Western blot检测RhoA、ROCK蛋白的表达量。Y-27632作用细胞后,检测下调miR-126对Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果:在Hep-2细胞和喉癌组织中lncRNA HOTAIR的表达明显上调(P<0.01),miR-126表达明显下调(P<0.01)。下调lncRNA HOTAIR表达后,抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT;lncRNA HOTAIR与miR-126具有靶向和负调控关系;下调miR-126表达后,激活了Hep-2细胞内RhoA/ROCK通路,并且促进了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。结论:上调lncRNA HOTAIR通过靶向miR-126激活RhoA/ROCK通路促进喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT。

RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用研究

目的探讨Rho A/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用。方法选取清洁级雌性SD大鼠30只建立糖尿病大鼠模型,按随机数字表法分为法舒地尔组和模型组,分别给予盐酸法舒尔地尔注射液(10 mg/kg/d)和等体积生理盐水腹腔注射,再选择10只大鼠作为对照组予普通饲料喂养。24周末测量各组大鼠心脏重量、体重、心脏组织形态和心肌胶原沉积程度,测定各组心肌匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),采用Western blot法检测心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p MYPT1)。结果模型组体重低于对照组,而心脏重量和心脏重量/体重比明显高于对照组(P<0.05);法舒地尔组体重较模型组有所上升,而心脏体重和心脏重量/体重比下降(P<0.05);模型组大鼠心肌细胞排列混乱,结构不清晰,间质中成纤维细胞增多,法舒地尔组大鼠心肌间质中成纤维细胞较模型组减少;模型组心肌间质及血管周围胶原面积为(11.34±0.74)%,心肌胶原含量为3.55±0.13 g/mg,明显较对照组增高(P<0.05);法舒地尔组胶原面积和胶原含量分别为(3.32±0.32)%和(2.35±0.18)g/mg,均较模型组降低(P<0.05);模型组心肌MDA和p-MYPT1为(2.60±0.34)nmol/mgprot和0.933±0.021,明显高于对照组(P<0.05);法舒地尔组MDA和p-MYPT1分别为(1.30±0.41)nmol/mgprot和0.501±0.017,均较模型组降低(P<0.05);模型组SOD为(174.01±17.35)U/mgprot,明显低于对照组(P<0.05),而法舒地尔组SOD为(195.23±11.28)U/mgprot,较模型组有所升高(P<0.05)。结论 Rho A/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化中起了重要作用,ROCK抑制剂法舒地尔能有效抑制糖尿病心肌纤维化。

肝硬化门静脉高压症患者肠系膜微动脉收缩反应变化及RhoA/ROCK通路的研究

目的研究肝硬化门静脉高压症(PHT)患者肠系膜微动脉对去甲肾上腺素收缩反应性的变化,探讨PHT内脏血管低反应的机制,以及RhoA/ROCK通路改变所产生的作用机制。方法取2010年1月至2011年6月在我院普外科或肝移植科手术治疗的患者,PHT组7例,非PHT组8例。术中测门静脉压力,取空肠旁第三级肠系膜血管,利用血管灌流系统测定肠系膜微动脉对去甲肾上腺素的反应,运用Western blotting法测定RhoA/ROCK通路中相关蛋白量的表达以及活性的改变。结果 PHT患者的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线右移,EC50高于非PHT患者(P<0.01);与非PHT患者相比较,肝硬化PHT患者的肠系膜动脉RhoA蛋白量无明显变化(P>0.05),但是ROCK-1蛋白量和活性却明显降低(P<0.01)。结论肝硬化PHT患者肠系膜动脉对缩血管物质的反应性降低,RhoA/ROCK信号通路受损参与了该反应。

过度激活的Rho/ROCK通路介导的心肌缺血再灌注损伤及贝那普利的改善作用

目的该研究探索过度激活的Rho/ROCK信号通路在缺血再灌注损伤中的参与机制及贝那普利的改善作用。方法 SD大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、Y27632组和贝那普利组。采用大鼠冠状动脉左前降支结扎法复制心肌缺血再灌注模型,Y27632组和贝那普利组分别给予对应药物灌胃治疗。分析各组血清中MDA、SOD、GSHpx、Rho/ROCK、MMP2/9及Bax/Bcl2和Caspase3/9的表达。结果模型组血清MDA水平明显增高(15.6→24.1μg/mL)而SOD(83.1→34.6 U/mL)水平明显降低,Rho/ROCK(0.18→0.64;0.19→0.69;0.16→0.65)、MMP2/9(0.28→0.60;0.27→0.63)、Caspase9表达明显增强(0.25→0.68)。Y27632和贝那普利组大鼠的上述异常得到显著的改善。结论贝那普利通过抑制过度激活的Rho/ROCK、激活的细胞凋亡信号通路、改善细胞外基质降解与重构发挥保护缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用。

基于Rho/Rock通路当归红芪多糖对H9C2细胞放射性心肌损伤的影响

目的基于Rho/Rock通路观察当归红芪多糖对H9C2细胞放射性损伤的影响,探讨其干预放射性心肌损伤作用机制。方法将细胞随机分为空白组(不干预)、模型组(2GyX线照射并予生理盐水干预)、阳性对照组(2 Gy X线照射并予阳性药干预)和中药低、中、高剂量组(2 Gy X线照射并予当归红芪多糖干预),ELISA检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的表达,RT-PCR检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、Rhoa、Rock mRNA的表达,Western blot检测细胞诱导型iNOS、eNOS、Rhoa、Rock蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与空白组比较,模型组细胞SOD、GSH、eNOS蛋白及eNOS mRNA表达下调,MDA、iNOS、RhoA、Rock蛋白及iNOS、RhoA、Rock mRNA表达上调,细胞发生凋亡;与模型组比较,药物干预组细胞SOD、GSH、eNOS蛋白及eNOS mRNA表达上调,MDA、iNOS、RhoA、Rock蛋白及iNOS、RhoA、Rock mRNA表达下调,细胞凋亡减少。结论当归红芪多糖可通过抑制氧化应激、Rho/Rock通路活化、细胞凋亡等干预放射性心肌损伤。

糖肾宁对高糖诱导的足细胞损伤模型Rho/ROCK通路的影响

目的:基于Rho/ROCK信号通路研究中药糖肾宁对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。方法:高糖培养足细胞,以不同药物分组干预足细胞24 h,用罗丹明染色的鬼笔环肽法检测足细胞骨架,细胞免疫荧光检测足细胞标志蛋白Nephrin,Western Blotting检测RhoA、ROCK1、Nephrin蛋白的表达。比较不同药物或药物浓度对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。结果:糖肾宁可改善足细胞骨架结构,下调高糖诱导的足细胞损伤模型中异常升高的RhoA和ROCK1蛋白表达,上调Nephrin表达。结论:中药糖肾宁可抑制高糖诱导的足细胞损伤模型RhoA/ROCK1信号通路,减轻足细胞骨架重构,改善足细胞损伤。

Y-27632通过抑制ROCK通路降低内皮细胞中基质金属蛋白酶2和9表达

目的:探讨ROCK通路抑制剂Y-27632对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)基质金属蛋白酶2和9(matrix metalloproteinase 2 and 9,MMP2,MMP9)的表达与活性的影响。方法:体外培养原代HUVEC,分别予以TNF-α(25 ng/m L)、TNF-α+Y-27632(10μmol/L)处理24 h。Real-time PCR检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、MMP2和MMP9 m RNA的表达水平;明胶酶谱检测MMP2和MMP9蛋白活性的改变情况。结果:与对照组相比,TNF-α明显上调ICAM-1,VACAM-1,MMP2,MMP9 m RNA的表达(P<0.01)和MMP2,MMP9的蛋白活性(P<0.05);与TNF-α处理组相比,Y-27632可显著抑制ICAM-1,VCAM-1,MMP2和MMP9 m RNA的表达(P<0.01),下调MMP2和MMP9的蛋白活性(P<0.05)。结论:Y-27632可以抑制TNF-α诱导的HUVEC炎症反应和MMP2,MMP9 m RNA和蛋白活性水平。

Lingo-1介导Rho-ROCK通路调控神经干细胞的分化

背景:Lingo-1在神经元轴突再生、髓鞘形成等过程中具有重要作用,但其是否参与对神经干细胞分化的调控以及具体机制尚无定论。目的:观察干预神经干细胞Lingo-1表达水平对其分化方向的影响,并探索其可能机制。方法:从新生大鼠脑组织分离培养神经干细胞,经神经干细胞标志物检测鉴定后分别使用Lingo-1 shRNA慢病毒载体及阴性对照病毒转染神经干细胞,再用成神经元诱导分化培养基培养7 d,随后运用免疫荧光、免疫RhoA印迹技术检测神经元相关标志物表达,并检测、ROCK1蛋白表达水平。结果与结论:(1)从新生大鼠脑组织所分离培养的神经干细胞呈浮球状生长,高表达神经干细胞特异性标志物Nestin、Sox2与Pax6,符合神经干细胞特征;(2)慢病毒载体转染可在mRNA及蛋白质水平实现对神经干细胞Lingo-1的干扰,经诱导培养7 d后Lingo-1敲低的神经干细胞分化为神经元的比例显著增加,且伴随着RhoA、ROCK1蛋白表达水平的下降;(3)结果表明,Lingo-1参与对神经干细胞分化方向的调控,抑制Lingo-1可促进其向神经元方向分化,该过程可能与调控Rho-ROCK通路有关。

基于Rho/Rock通路探讨当归红芪多糖对辐射诱导大鼠H9C2心肌细胞的作用机制

目的基于Ras同源基因(Rho)/Rho激酶信号通路对放射性心肌纤维化发病机制及当归红芪多糖的干预作用进行探索。方法首先建立放射剂量梯度,通过筛选放射性心肌损伤的最佳浓度,建立放射性心肌损伤模型。通过法舒地尔、不同浓度当归红芪多糖溶液进行干预,同时采用Western Blot、QT-PCR、流式细胞术3种实验手段检测Rho/Rock及其下游通路的活化、心肌细胞周期、心肌纤维化的改变。结果当归红芪多糖干预后Rho/Rock及其下游通路的活化明显抑制,细胞周期阻滞明减轻,心肌纤维化被逆转。结论当归红芪多糖可能通过抑制Rho/Rock及其下游通路的活化、减轻细胞周期阻滞等逆转放射性心肌纤维化。

Rho/ROCK通路抑制剂在青光眼中的研究进展

Rho/ROCK通路在细胞骨架的调节方面起到重要作用。Rho/ROCK抑制剂可以通过调节小梁网中肌动蛋白细胞骨架、细胞外基质以及Schlemm's管内皮细胞功能,从而降低眼压。同时,抑制Rho/ROCK途径,可增加视乳头血流量、维持视网膜神经节细胞生存、促进轴突再生,甚至发现在抗青光眼滤过术后能抗瘢痕化。考虑到其眼压调节、抗瘢痕作用和视神经保护特性,Rho/ROCK信号通路是抗青光眼治疗的重要目标,在不久的将来它将用于青光眼的推荐治疗方案。

腺苷蛋氨酸对过度激活的Rho-ROCK通路介导的糖尿病肝损伤的改善作用

目的 探讨腺苷蛋氨酸对过度激活的Rho-ROCK通路介导的糖尿病肝损伤的改善作用。方法 40只清洁级Wistar大鼠依据随机数字表法为4组：对照组、2型糖尿病组、Y27632干预组及腺苷蛋氨酸干预组,各10只。对照组大鼠给予正常饲粮,自由饮水;糖尿病组、Y27632干预组及腺苷蛋氨酸干预组大鼠每日给予高糖高脂饲料,自由饮水,并于第35日时一次性腹腔注射链脲佐菌素（35 mg/kg,腹膜内）;Y27632干预组于第9-12周给予Y27632 10 mg/kg进行治疗。腺苷蛋氨酸干预组于第9-12周给予腺苷蛋氨酸10 mg/kg进行治疗。分析各组大鼠胰岛素抵抗系数、血脂水平及Rho A、ROCK1/2和基质金属蛋白酶的表达变化。同时分析各组大鼠肝脏组织细胞凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（caspase）-3及caspase-9的表达变化。结果 糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的胰岛素抵抗指数稳态模型、血糖、低密度脂蛋白胆固醇较对照组明显升高（P〈0.01）;糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的总胆固醇高于对照组（P〈0.01）;糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的高密度脂蛋白胆固醇低于对照组（P〈0.01）;糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的羟脯氨酸高于对照组（P〈0.01）。糖尿病组大鼠肝脏组织的Rho及ROCK1/2蛋白的表达、MMP-2及MMP-9的表达及促凋亡蛋白相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达较对照组明显升高（P〈0.01）,而Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组上述异常表达得到一定的恢复（P〈0.01）。结论 腺苷蛋氨酸通过抑制肝脏组织中过度激活的Rho/ROCK信号转导通路改善小剂量SZT合并高糖高脂饮食复制的2型糖尿病大鼠肝脏组织损伤。

基于Rho/ROCK通路观察盐酸小檗碱干预心肌肥厚作用机制研究

目的基于Rho/ROCK通路观察盐酸小檗碱干预心肌肥厚作用机制。方法40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、较低剂量组、较高剂量组各10只,模型组、较低剂量组、较高剂量组大鼠建立心肌肥厚模型,建模成功后分别给予较低剂量组、较高剂量组5 mg/kg、10 mg/kg盐酸小檗碱灌胃,正常对照组、模型组给予等量生理盐水灌胃,每天1次,连续干预2周后观察大鼠变化。每只大鼠在基线、建模后以及灌胃2周后采集左室短轴二维超声图像,观察各组大鼠心肌细胞形态及心肌间质纤维化改变,并检测组织中Rho/ROCK信号通路因子表达量。结果与正常对照组相比,心肌肥厚大鼠舒张末期心室间隔(IVS)厚度、左心室后壁厚度(LVPW)值显著升高,使用较高剂量盐酸小檗碱干预后大鼠IVS、LVPW值降低(P<0.05)。病理结果显示模型组大鼠心肌改变主要为心肌细胞增大、炎细胞浸润、心肌间质纤维化;在较低剂量组和较高剂量组中上述心肌病理改变可减轻。对于正常对照组,其余三组大鼠心肌RhoA、ROCK、TGF-β1表达量显著升高,P-PTEN表达量显著降低;与模型组相比,较低剂量组和较高剂量组RhoA、ROCK以及TGF-β1表达量显著降低,P-PTEN表达量显著升高,以较高剂量组为著(P<0.05)。结论盐酸小檗碱可抑制心肌肥厚、抑制心肌纤维化,其作用机制可能与Rho/ROCK信号通路失活,调控TGF-β1、P-PTEN表达量相关。