PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物物理性能和转染C17.2神经干细胞效率的研究

目的探索PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的物理性能及转染C17.2神经干细胞的效率。方法设计合成PEG-PEI共聚物基因载体,与ROCK-Ⅱ-siRNA进行复合;用凝胶阻滞电泳实验、粒径与电位的测定观察PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的复合效果;采用透射电镜观察PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的形态学;通过流式细胞仪技术定量检测复合物对C17.2神经干细胞的转染效果。结果 PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物在N/P=10时完全复合。随着N/P比的增大,复合物的粒径变小而电位增大。在N/P=50时,透射电镜观察到复合物为球形,很好的分散性,平均粒径约为100 nm。PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物在N/P=50时转染C17.2神经干细胞的转染效率最高,为(70.24±5.21)%。结论 PEG-PEI基因载体可以很好的与ROCK-Ⅱ-siRNA复合。PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物对于C17.2神经干细胞具有良好的转染效率。

Rock-Ⅱ与妊高症

近年来,对Rho/Rock信号传导通路的研究有了很大的进展,据报道,在恶性肿瘤、肝细胞纤维化、瘢痕组织形成、不稳定性膀胱及滋养细胞浸润等方面也取得令人欣喜的成果。尽管对Rho/Rock上调和下调信号的许多方面还存有很多疑问,但学者们普遍认为Rho/Rock信号传导通路与平滑肌张力增加或高反应性有关的许多疾病有密切关系。

盐酸法舒地尔对EAE小鼠脑中ROCK-Ⅱ表达的影响

目的:探讨盐酸法舒地尔(Fasudil hydrochloride)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑中Rho激酶-Ⅱ(ROCK-Ⅱ)表达的影响。方法:雌性C57BL/6小鼠,分为EAE组、治疗组和佐剂组。用MOG35-55多肽诱导EAE模型。治疗组于d6p.i.开始腹腔注射盐酸法舒地尔液,连续14天。观察和比较各组临床表现,于d18-20p.i.取脊髓和脑,行HE染色、Westernblot法检测各组ROCK-II的表达。结果:盐酸法舒地尔能够显著改善EAE的症状,减轻中枢神经系统(CNS)炎性浸润等病理变化。各组小鼠脑中均有ROCK-Ⅱ的表达,EAE组ROCK-Ⅱ表达量较佐剂组要高(P<0.05),治疗组与EAE组相比显著减低(P<0.05)。结论:盐酸法舒地尔可以有效抑制小鼠EAE,这种抑制可能与其抑制ROCK-II的活化有关。

针康法对局灶性脑梗死大鼠神经功能缺损及梗死灶周边区RhoA、ROCK-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:探讨针康法对局灶性脑梗死大鼠神经功能缺损及梗死灶周边区Rho A、ROCK-II蛋白表达的影响。方法:将90只清洁级SD雄性大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、针刺组、康复组及针康组,各组于3天、7天、14天时间点再分成3个亚组(n=6)。采用改良的Zea Longa线栓法制备局灶性脑梗死大鼠模型。假手术组与模型组大鼠不予任何治疗,针刺组给予头穴丛刺治疗,康复组给予运动康复训练,针康组给予头穴丛刺结合运动康复训练。术后3天、7天、14天采用改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS)评估各组大鼠神经功能,免疫组化法检测大鼠梗死灶周边区Rho A、ROCK-Ⅱ蛋白的表达。结果:术后7天、14天,与模型组比较,各干预组大鼠神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05);与针刺组、康复组比较,针康组大鼠评分有所降低(P<0.05)。术后各时间点,与模型组比较,各干预组梗死灶周边区Rho A、ROCK-Ⅱ阳性细胞数均明显减少(P<0.05);与针刺组、康复组比较,针康组大鼠梗死灶周边区Rho A、ROCK-Ⅱ阳性细胞数目有所减少(P<0.05)。结论:头穴丛刺疗法、运动康复训练、针康法均能有效改善局灶性脑梗死大鼠神经功能缺损,下调梗死灶周边区Rho A、ROCK-Ⅱ蛋白表达,且针康法优于单纯头穴丛刺或运动康复训练。

RhoA和Rock-Ⅱ在Lewis大鼠EAE模型中的表达

目的研究RhoA和Rock-Ⅱ在Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中的表达,探索其在EAE模型中的作用。方法把36只Lewis大鼠随机分为两组:A组(空白对照组),B组(EAE模型组)。以豚鼠全脊髓为抗原混合福氏完全佐剂(CFA),诱导Lewis大鼠EAE模型,观察实验动物神经功能损害的情况;采用免疫组织化学染色法观察实验动物各组脑、脊髓组织中RhoA、Rock-Ⅱ的表达。结果成功建立Lewis大鼠EAE模型,RhoA和Rock-Ⅱ在EAE模型组的表达较空白对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 RhoA和Rock-Ⅱ在EAE模型中过量表达,可能在EAE模型的发病过程中起关键作用。

参芎化瘀胶囊对全脑缺血大鼠海马CA1区RHOA和ROCK-Ⅱ表达的影响

目的探讨参芎化瘀胶囊预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区重组蛋白A（small GTP binding protein A,RHOA）和RHO激酶2（RHO associated protein kinase-2,ROCK-Ⅱ）表达的影响。方法 96只SD雄性大鼠分3组,每组32只,造模前7d开始灌胃,至处死日早晨结束。正常对照组（生理盐水灌胃）、全脑缺血模型组（生理盐水灌胃）和参芎化瘀胶囊＋全脑缺血组（参芎化瘀胶囊0.048g/kg体质量,溶于0.5mL双蒸水中,每日1次,灌胃0.3mL/100g体质量）。后两组采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型,分别在造模成功后1、3、7、14d四个时间点采用水迷宫行为学检测评价学习记忆能力,处死大鼠后取脑组织HE染色观察组织病理学的变化,免疫组化法观察RHOA和ROCK-Ⅱ表达,蛋白印迹分析检测RHOA和ROCK-Ⅱ蛋白含量。结果和正常对照组比较,模型组大鼠各个时间点逃避潜伏期时间延长（P〈0.05）,参芎化瘀胶囊治疗后大鼠逃避潜伏期时间缩短（P〈0.05）,但仍长于正常对照组（P〈0.05）。HE染色显示,与正常组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元1~14d存活神经元逐渐减少;参芎化瘀胶囊治疗后各个时间点存活神经元增加（P〈0.05）,但仍少于正常组（P〈0.05）;免疫组化和蛋白印迹分析显示,正常对照组RHOA和ROCK-Ⅱ表达不明显,模型组先升高后下降。参芎化瘀胶囊组所有时间RHOA和ROCK-Ⅱ表达均较模型组降低（P〈0.05）,但仍高于正常组（P〈0.05）。结论参芎化瘀胶囊改善全脑缺血引起的神经元损伤,降低海马CA1区RHOA和ROCK-Ⅱ的表达。

RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化

目的血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用。通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用。方法AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24hROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响。结果AngⅡ刺激使AFRhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加。刺激30min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12hMYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍。dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管AFα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75%。结论AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化。

锦屏Ⅱ级水电站深部大理岩板裂化破坏试验研究及其对TBM开挖的影响

针对锦屏Ⅱ级水电站TBM引水洞及排水洞深部大理岩发生的剧烈板裂化岩爆与非剧烈板裂化片帮2种板裂化破坏现象,通过采集该工程区深部大理岩岩样,采用真三轴岩爆试验设备,对其在不同高应力作用下的板裂化破坏现象进行室内试验。通过对试验过程中发生的各种现象的全面描述和试验结果的分析表明,试验中岩样发生的板裂化破坏现象与TBM开挖隧道围岩的板裂化破坏具有很好的吻合性,未来围岩的主要破坏方式将以板裂化片帮与岩爆为主。围岩板裂化破坏将影响TBM开挖运行,分别探讨掌子面与洞壁板裂化破坏对TBM开挖的影响。

血府逐瘀汤对视神经损伤大鼠ROCKⅡ表达的影响

目的观察ROCKⅡ在视神经损伤大鼠视网膜、视神经中的表达,探讨血府逐瘀汤对视神经损伤的治疗作用。方法 120只雄性SD大鼠随机分为模型组、对照组、治疗组,每组40只,建立单眼视神经钳夹伤模型,分别以蒸馏水、灯盏细辛、血府逐瘀汤灌胃。连续用药3d、1周、2周、4周,每组各取10只(10眼)大鼠,用免疫组织化学方法观察血府逐瘀汤对视网膜、视神经中ROCKⅡ表达的影响。另取5只(10眼)大鼠作为正常组,观察正常大鼠视网膜、视神经中ROCKⅡ的表达水平。结果正常大鼠视网膜中ROCKⅡ表达的平均光密度(average optical density,AOD)值为0.157±0.031。给药后3d:模型组、对照组、治疗组视网膜中ROCKⅡ表达的AOD值分别为0.229±0.031、0.223±0.016、0.130±0.029,治疗组与模型组、对照组比较,差异均有显著统计学意义(均为P=0.000);给药后1周:模型组、对照组、治疗组视网膜中ROCKⅡ表达的AOD值分别为0.137±0.040、0.130±0.017、0.137±0.014,各组间差异无统计学意义(F=0.874,P=0.464);给药后2周:模型组、对照组、治疗组视网膜中ROCKⅡ表达的AOD值分别为0.149±0.023、0.157±0.019、0.143±0.011,各组间差异无统计学意义(F=0.682,P=0.569);给药后4周:模型组、对照组、治疗组视网膜中ROCKⅡ表达的AOD值分别为0.220±0.035、0.190±0.033、0.172±0.057,治疗组明显低于模型组,差异有统计学意义(P=0.004)。正常大鼠视神经ROCKⅡ表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值为1.40±0.47。给药后3d治疗组IOD值明显低于模型组,差异有显著统计学意义(P=0.006);给药后1周,治疗组IOD值明显低于模型组、对照组,差异均有统计学意义(P=0.021、0.047);给药后2周,治疗组IOD值明显低于模型组和对照组,差异均有统计学意义(P=0.000、0.012);治疗后4周,治疗组IOD值明显低于模型组和对照组,差异也均有统计学意义(P=0.026、0.047)。结论血府逐瘀汤能够不同程度抑制视网膜、视神经中ROCKⅡ的表达,促进视神经的修复再生。

血管紧张素Ⅱ对大鼠肝星状细胞收缩及Rho-Rock通路的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肝星状细胞(HSC)Rock通路的影响机制。方法采用HSC-T6细胞株,给予AngⅡ1μmol/L处理,聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性;另予AngⅡ10μmol/L处理,免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的表达水平。观察AngⅡ1型受体(AT-1受体)阻断剂伊贝沙坦和Rho激酶特异性抑制剂Y27632对磷酸化MLC表达水平的影响;逆转录聚合酶链反应检测Rock通路Rock2(Rho kinase 2)mRNA的表达。结果AngⅡ可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化,并呈时间依赖性,15min达到峰值后逐渐减低。伊贝沙坦和Y27632处理组可抑制AngⅡ诱导的MLC蛋白磷酸化水平。AngⅡ处理组Rock2mRNA的表达显著增强,伊贝沙坦和Y27632均可抑制Rock2 mRNA的表达。结论AngⅡ可以通过Rock通路来诱导HSC的收缩。

Hg(Ⅱ)-SCN^--罗丹明B超高灵敏显色体系的研究

本文较详细地研究了明胶存在下,Hg(Ⅱ)-SCN^--罗丹明B显色体系水相光度法测定痕量汞的新方法。缔合物的最大吸收峰在596nm处,汞含量在0.5～3.5μg/25mL和0～0.5μg/25mL范围内遵守比尔定律,表观摩尔吸光系数分别为8.37×10~5L·mol^(-1)·cm^(-1)和1.47×10~6L·mol^(-1)·cm^(-1),Sandell灵敏度分别为2.4×10^(-4)μg Hg/cm^2和1.36×10^(-4)μg Hg/cm^2。方法用于岩石矿物中痕量汞的测定,结果令人满意。

利用测井资料预测岩石Ⅱ型断裂韧性的方法研究

根据直缝巴西圆盘(SNBD)试验获取应力强度因子的计算原理,设计组建一套岩石Ⅱ型断裂韧性测试系统,测定20块取自WG油田岩石试样的Ⅱ型断裂韧性。基于试验数据,分析Ⅱ型断裂韧性和围压、抗拉强度的关系,建立利用测井资料预测断裂韧性的模型。利用H341井声波测井、密度测井和伽马测井资料预测水平地应力和抗拉强度,结合建立的断裂韧性模型成功预测Ⅱ型断裂韧性连续值,并在压裂实践中得到验证。该方法解决了现场压裂作业缺少断裂韧性全井筒连续数据的难题。

岩石Ⅱ型裂纹初裂及后继破坏机理研究

计算了多种四点剪切Ⅱ型裂纹试件的全场应力，并同时进行了实验研究。通过对这些试件的计算结果与实验结果的比较分析，较好地揭示了这些Ⅱ型裂纹试件初裂、后继破坏以及“剪切核”的形成机理，避免了目前仅用Ⅱ型裂纹奇异应力场给分析带来的误差及局限。

一种基于Ⅱ型全过程曲线的岩爆倾向性指标

从Ⅱ型全过程曲线所揭示的岩体破坏过程中能量的储存和释放特征出发,并借鉴已有几个岩爆倾向性指标的合理之处,提出一种新的基于Ⅱ型曲线的岩爆倾向性指标。新指标充分借鉴Wet指标反映岩体的弹性与塑性倾向的能力,反映岩爆岩体破坏后区的能量转化特征,同时避免R指标采用硬岩的I型全过程曲线作为计算依据的不合理之处。通过对锦屏Ⅱ级电站辅助洞的岩石进行试验,表明新指标确实能够较好地反映岩体的岩爆倾向。

工程岩体质量分级的数量化理论Ⅱ判别模型及应用

为快速准确地对岩体质量进行分级,采用数量化理论Ⅱ建立了工程岩体质量判别模型。案例一中选取岩石单轴抗压强度、岩体声波纵波速度、体积节理数、节理面粗糙度系数、节理面风化变异系数和透水系数作为评价指标,案例二中选取回采巷道巷道埋深、巷道跨度、直接顶与煤层厚度之比、围岩单轴抗压强度、围岩节理裂隙发育程度和围岩松动圈尺度作为评价指标,分别对案例一、案例二中不同工程岩体实测样本进行训练,构建相应的线性判别函数,确定各类岩体样本在6维空间中所对应的样本中心点;用建立的模型对训练样本进行判别并对未知样本岩体质量等级进行了预测。案例一中判别正确率为100%,且10个预测样本中只有1个发生误判,案例二中判别正确率为93.3%。研究结果表明:该模型判别过程简单,具有较高的判别正确率,可以作为一种行之有效的岩体质量分级方法在岩体工程中推广应用。

ROCKⅡ对细胞滋养细胞ERM蛋白表达及细胞浸润能力调节的研究

目的:探讨Rho/ROCK/ERM通路与细胞滋养细胞浸润能力的关系。方法:免疫荧光细胞化学法定位ROCKⅡ和ERM在体外培养细胞滋养细胞中的表达,Western blot检测ROCKⅡ活性被抑制时细胞滋养细胞中p-ERM表达变化,MTT实验、体外细胞侵袭实验和细胞运动实验检测ROCKⅡ活性被抑制时细胞滋养细胞生长、运动、浸润能力的改变。结果:ROCKⅡ和ERM在细胞滋养细胞的胞浆中表达;随着ROCKⅡ活性下降,p-ERM表达下降,细胞生长、浸润、运动受到抑制,呈浓度依赖关系。结论:ROCKⅡ在体外培养的细胞滋养细胞中可能通过调节ERM蛋白来调节细胞的生长、浸润和运动能力,提示Rho/ROCK/ERM通路可能在人孕早期胚泡植入过程中发挥作用。

锦屏Ⅱ水电站辅助洞岩爆灾害评价及对策研究

锦屏Ⅱ水电站辅助洞是典型的深埋隧洞,高应力条件下的岩爆灾害一直是设计和施工阶段面临的主要问题之一。通过统计辅助洞开挖过程中岩爆的基本规律,结合地应力和典型岩层的室内岩石力学试验,采用不同的岩爆评价指标对辅助洞的岩爆危险性进行了评价分析。并针对辅助洞工程的实际情况,讨论了施工过程中岩爆防治的措施,提出相应的岩爆控制对策,为锦屏Ⅱ水电站正在施工的4条深埋长大引水隧洞中岩爆的预测和防治提供了重要的基础性数据和借鉴,并可为现场施工提供指导。

石崆山Ⅱ号段岩质高边坡稳定性的有限单元法(FEM)分析评价

岩质高边坡是常见的自然地质环境问题和重要的岩土工程问题之一,涉及工程地质学、岩体力学问题。针对漳州—龙岩高速公路石崆Ⅱ号段岩质高边坡稳定性问题,采用有限单元法(FEM)进行计算分析。计算分析结果表明石崆山Ⅱ号段岩质高边坡是稳定安全的。有限单元法在岩质高边坡稳定性的计算分析中的应用,正处在完善和发展之中。它的计算分析正确与否或精确程度,很大程度上取决于对边坡岩体工程地质条件的正确理解和归纳概化,取决于计算参数的合理客观选取。

剪切盒加载下岩石剪切(Ⅱ型)断裂韧度K_(ⅡC)的测定

采用剪切盒实验获得了岩石的Ⅱ型断裂并测定了岩石的Ⅱ型断裂韧度KⅡC ,通过有限单元法中的位移法推导出剪切盒加载下双切口试样的Ⅱ型应力强度因子KⅡ 的一般计算公式 ,并探讨了KⅡC的尺寸效应和Ⅱ型断裂机理 .实验及数值计算结果表明 :在剪切盒加载下 ,裂纹尖端最大拉应力始终低于岩石的拉伸强度 ,最大剪应力大于其对应压应力下的剪切强度 ,且Ⅱ型最大应力强度因子KⅡmax为Ⅰ型最大应力强度因子KⅠmax的 2～ 4倍 ,从而导致产生Ⅱ型断裂 ;测得的KⅡC值随无量纲切口长度 (2a W)的增加而降低 ,当 2a W≥ 0 .7,且B≥W ,α为 6 5°～ 75°时 ,KⅡC趋近于一个常数 ,该常数为Ⅰ型断裂韧度KⅠC的 2～ 3倍 ,可认为是较合理的岩石Ⅱ型断裂韧度值 ;剪切盒实验是一种测定岩石KⅡC 的行之有效的方法 .

Ⅰ型和Ⅱ型静动态统一本构关系及用于分析回跳现象

在Ⅰ型静动态统一本构关系的基础上,建立了Ⅱ型静动态统一本构关系,分别用Ⅰ型和Ⅱ型本构关系分析了有回跳特性的材料的力学行为.Ⅰ型本构关系以应变和温度为作用量,Ⅱ型本构关系以Ⅱ型应变和温度为作用量,Ⅱ型应变是应力和应变的线性组合.有回跳特性的材料在受到单调增加的轴向应变作用时,会经历弹性阶段、时间无关不可逆变化阶段、伴随有应力跌落的时间相关不可逆变化阶段以及最后的时间无关不可逆变化阶段.对应于每一个阶段,Ⅰ型本构关系都有相应的判据和计算公式.有回跳现象的单轴压缩应力_应变曲线,按照时间顺序可分为,应变单调增加的弹性阶段、应变单调增加的时间无关不可逆变化阶段、应变减小的时间无关不可逆阶段(回跳阶段)以及之后的应变再单调增加的时间无关不可逆阶段.在每一个阶段,Ⅱ型本构关系都有对应的判别准则和计算公式,Ⅱ型本构关系覆盖了有回跳特性的材料遇到的各种可能工况.