胱硫醚-γ-裂解酶产生的H_(2)S在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用及与RhoA-ROCK_(2)信号通路的关系

目的探讨胱硫醚-γ-裂解酶产生的H_(2)S在脑缺血/再灌注(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用及与RhoA-ROCK_(2)信号通路的关系。方法采用双侧颈总动脉结扎制备小鼠脑缺血/再灌注损伤模型,激光散斑法检测脑血流量,HE染色法观察脑海马组织病理学变化,检测LDH、NSE、RhoA和ROCK_(2)活性及H_(2)S含量和ROCK_(2)蛋白表达。结果H_(2)S合酶CSE底物L-Cys(300 mg·kg^(-1))可明显促进脑I/R小鼠脑血流量的恢复,改善海马组织的病理损伤,抑制血清中LDH活性和脑组织中NSE、RhoA及ROCK_(2)活性的升高,并抑制血清H_(2)S含量的降低和脑组织中ROCK_(2)蛋白表达的增多。但L-Cys上述作用可被CSE合酶抑制剂PPG(50 mg·kg^(-1))明显地减弱;H_(2)S供体NaHS(4.8 mg·kg^(-1))也有与L-Cys相同的上述作用。结论CSE产生的H_(2)S对小鼠脑I/R损伤有保护作用,其作用可能与抑制RhoA-ROCK信号通路及增加脑血流量有关。

RhoA激酶的硫巯基化修饰在硫化氢抗大鼠神经细胞缺氧性损伤中的作用

目的研究RhoA激酶2(ROCK_(2))的硫巯基化修饰在硫化氢(H_(2)S)抗大鼠神经细胞缺氧性损伤中的作用。方法原代培养大鼠海马神经细胞,给予硫氢化钠(NaHS)和硫巯基化抑制剂二硫苏糖醇DTT预处理,构建细胞缺氧复氧模型。检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)和神经特异性烯醇化酶(NSE)活性以及细胞凋亡。纯化神经细胞中硫巯基化蛋白,检测ROCK_(2)和硫巯基化修饰ROCK_(2)(SSH-ROCK_(2))蛋白表达以及活性。结果100、200μmol·L^(-1)NaHS明显提高缺氧复氧神经细胞的活力、降低上清中LDH和NSE活性、减少细胞凋亡,提示NaHS的神经保护作用;但是DTT可减弱NaHS对缺氧复氧神经细胞的保护作用。此外,100、200μmol·L^(-1)NaHS可减少海马神经细胞中ROCK_(2)蛋白表达,并通过增加ROCK_(2)蛋白硫巯基化修饰而降低ROCK_(2)蛋白活性。结论H2S对大鼠海马神经元H/R损伤有明显的保护作用,其机制与硫巯基化修饰致ROCK_(2)活性降低及ROCK_(2)蛋白表达减少有关。