RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用

目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响。结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05)。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28±1.34)、(8.93±1.20)μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07)μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性。

RON基因反义核酸真核表达载体的构建策略

目的构建RON基因跨膜区段(RONm)的反义核酸真核表达载体。方法用RTPCR技术,从人肺癌细胞提取的总RNA克隆RONmcDNA序列。然后酶切鉴定与测序分析得到RONm的T载体,再将RONm反向插入pcDNA3.1+中,酶切鉴定得到RONm反义真核表达载体。结果用RTPCR亚克隆RONm,测序结果与GenBank的RONm相应序列(X70040)一致,阅读框无改变。构建出正确的RONm反义真核表达载体。结论成功构建RONm反义核酸真核表达载体,为进一步将RON基因反义核酸作为一种肺癌基因治疗方法的研究打下了分子生物学基础。

反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用

目的 探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系 A549 活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RON基因为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将人 RONm cDNA反向插入到真核表达载体 pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因的表达水平,同时利用MTT方法监测细胞生物学活性的变化。结果 转染后的肺癌细胞 RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡。结论 RONm反义核酸明显抑制 RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡。

反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用(英文)

目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RONm为靶的肺癌基因治疗的可能性?方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达水平,同时利用MTT和细胞计数方法监测细胞生物学活性的变化。结果转染后的肺癌细胞RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡?结论RONm反义核酸明显抑制RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡?

肺癌组织中RON基因的表达及其临床意义(英文)

目的研究RON基因在人肺癌组织及正常肺组织中的表达水平及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测80例肺癌患者的库存标本和20例同期手术切除的正常肺组织中RON的表达,RON基因表达与临床病理、预后之间的关系。结果RON基因在肺癌中表达的阳性率为53.75%(43/80),明显高于对照组正常肺组织的表达(0%)(P=0.000)。不同性别、年龄的患者和病理类型的肺癌组织中,RON基因的表达差异无显著性(P>0.05);RON基因表达的阳性率随TNM分期的升高而升高(I期29.03%、II期65.52%、III期75.00%)(P=0.002)。Kaplan-Meier生存分析显示RON阳性表达者的1、3及5年生存率(67.44%、20.93%和9.30%)明显低于阴性者(81.08%、45.94%和24.30%)(P=0.029)。结论RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点。

RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met的免疫表达及其意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met基因的表达情况。结果Hepsin、C-Met、RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70.1%、64.4%、65.5%,三者的阳性表达两两呈正相关(P<0.01),同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性(P<0.01)。结论Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后。

RON基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 研究RON基因在人非小细胞肺癌组织中的表达水平及其临床意义.方法 收集2007年1月至 2008年12月手术的肺腺癌及鳞癌组织标本共96例,应用Envision二步法检测96例肺腺鳞癌中RON蛋白的表达情况,统计分析非小细胞肺癌组织中RON表达与临床病理相关因素的关系.另外检测20例正常肺组织中RON蛋白的表达情况,比较RON在肺癌组织和正常组织中的表达情况.结果 RON在肺癌组织中表达明显（63/96,66%）,而正常肺组织中几乎无表达（1/20,5%）.在肺癌组织中,RON在肺腺癌及鳞癌中都有不同程度的表达,两组相比RON的表达差异具有统计学意义,腺癌标本中RON表达明显高于鳞癌（P＜0.05）;不同分化程度的肺腺癌相比,RON的表达也有差异,低分化的肺腺癌明显高于中分化的腺癌和高分化的腺癌（P＜0.05 ）,而有淋巴结转移者及晚期组患者组织中RON的表达亦明显高于无淋巴结转移者及早期组患者.结论 RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点.

变性高效液相色谱快速诊断儿童型脊肌萎缩症

目的 建立变性高效液相色谱(denaturinghighperformanceliquidchromatography, DHPLC) 快速诊断儿童型脊肌萎缩症(spinalmuscularatrophy, SMA) 的新方法。方法 (1)用二重聚合酶链反应(PCR) 扩增运动神经元成活基因(survivalmotorneurongene, SMN) 外显子7、8及周围部分内含子序列; (2) 纯化PCR产物以除去其中的引物、dNTP及缓冲液中的盐粒子等成分; (3) 采用多重引物延伸反应特异性检测能将SMN1基因与SMN2基因区分开的3个特异性位点; (4) 将延伸反应的产物用DHPLC在完全变性的条件下分析。结果 将建立的新方法与传统的PCR-酶切法进行盲法对比试验, 检测了30例标本(包含20例SMA患儿和10例正常人群外周血基因组标本) 以验证新方法的特异性和可靠性, 其诊断结果与PCR-酶切法结果完全一致。结论 多重引物延伸反应结合DHPLC分析技术是一种可用于临床SMA基因诊断、产前诊断及胚胎种植前遗传学诊断的高效、灵敏、可靠、快速、简便的新方法。

RON基因在淋巴瘤的表达及与EB病毒感染相关性研究

目的研究RON基因在不同淋巴瘤组织及其细胞株中的表达情况及与EB病毒感染的相关性。方法通过免疫组织化学染色法检测淋巴瘤患者以及正常和炎性淋巴组织RON的表达,计算RON阳性组织的比例及RON蛋白表达阳性标记强度特征;蛋白免疫印迹法检测淋巴瘤细胞株RON的表达情况;并且用原位杂交的方法检测EBV编码的小RNA(EBER)在伯基特淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤组织的表达情况。结果 RON在霍奇金淋巴瘤和伯基特淋巴瘤组织中阳性率分别为55.0%(11/20)、66.7%(8/12),高于其在良性淋巴组织(正常淋巴组织及炎性淋巴组织)中的表达(P均<0.05)。进一步发现霍奇金淋巴瘤和伯基特淋巴瘤组织芯片及其细胞株L428和Raji细胞株中RON表达水平远高于其他淋巴瘤。霍奇金淋巴瘤和伯基特淋巴瘤中EB病毒的阳性和RON过表达相关性密切。结论 RON在淋巴瘤中表达呈异质性,其中伯基特淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤中高表达,而且两者的RON过表达和EB病毒感染密切相关。