Th17和调节性T细胞在人类免疫缺陷病毒疾病进展中的作用及其调控机制

目的本研究通过观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血Th17、Treg细胞及其相关转录因子、细胞因子的表达,进一步揭示Th17、Treg细胞的调控机制及其在HIV感染者疾病进展中的作用。方法选取2019年1月—2019年10月河南省上蔡县HIV感染者80例作为研究组,选取同地区健康人群20例作为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T及外周血单个核细胞Th17、Treg,酶联免疫吸附试验检测血浆中细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-23水平,实时聚合酶链反应检测转录因子ROR-γt及Foxp3 mRNA表达,Pearson法分析Th17、Treg与CD4^(+)T的相关性。结果研究组CD4^(+)T、CD4^(+)T/CD3+T、CD4^(+)T/CD8^(+)T低于对照组(P<0.05),CD8^(+)T和CD8^(+)T/CD3+T高于对照组(P<0.05)。研究组Th17/CD4^(+)T、Th17/Treg低于对照组(P<0.05),Treg/CD4^(+)T高于对照组(P<0.05)。研究组ROR-γtmRNA高于对照组(P<0.05),Foxp3mRNA低于对照组(P<0.05)。研究组IL-17、IL-23水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表示,Th17细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈正相关(r=0.293,P<0.05),Treg细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。结论HIV感染能降低Th17细胞、升高Treg细胞,破坏机体免疫平衡,其机制与调控转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-17、IL-23表达有关,Th17细胞、Treg细胞与HIV感染者疾病进展密切相关。

枯芩与条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节机制研究

目的比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只。采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg^(-1)·d^(-1),美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组、模型组灌服等体积生理盐水。连续给药28 d。给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β_(1)水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P<0.05或P<0.01)均优于枯芩组。结论枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用。

益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺中Aire及ROR-γt/Foxp3相关炎症因子表达的影响

目的研究益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠胸腺中自身免疫调节因子(Aire)及转录因子维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)相关炎症因子表达的影响。方法通过免疫诱导注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段复制EAMG模型,分为正常组、模型组、阳性对照组(强的松)及益气解毒复方高、中、低剂量组,每组10只。观察大鼠行为学及Lennon评分,检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot检测EAMG大鼠胸腺组织中Aire和Foxp3的表达,RT-PCR检测各组大鼠胸腺组织中RORγt的表达情况。结果与治疗前相比,各药物组Lennon分级评分显著降低;与强的松组相比,益气解毒复方各剂量组Lennon评分无明显差异(P>0.05)。RT-PCR结果,模型组胸腺内RORγt mRNA相对表达量明显高于正常组(P<0.05),各药物组胸腺中RORγt mRNA相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。Western blot结果,与正常组比较,模型组Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,各药物组大鼠胸腺中Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著升高(P<0.01)。ELISA结果,模型组大鼠血清IL-6含量明显高于正常组(P<0.01),而TGF-β1含量明显低于正常组(P<0.01);给药后,各药物组IL-6含量明显降低,TGF-β1含量明显升高(P<0.01)。结论益气解毒复方能改善EAMG大鼠肌无力症状,其作用机制可能通过上调Aire蛋白表达,调节免疫炎症反应,影响Th17/Treg分化,从而调控ROR-γt/Foxp3免疫平衡发挥调节自身免疫反应的作用,可能是其治疗MG的作用机制之一。

泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA表达水平的研究

目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月,分别在感染2天、8天、1月、3月、6月和10月处死小鼠,收集肝脏组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肝脏组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA的表达水平。结果:T-bet mRNA的表达水平在感染早期开始增高,1月时达高峰后又开始缓缓下降至感染前水平;GATA-3 mRNA的表达水平在感染1月时明显升高,随后一直保持较高的表达水平;ROR-γt mRNA的表达水平在感染早期开始增高,感染1月时达到高峰,随后缓慢下降。IL-17 mRNA表达水平自感染早期开始持续性增高,到感染3月时达高峰,之后又逐渐降低至感染前水平。各组小鼠肝组织ROR-γt mRNA表达水平与T-bet mRNA表达水平呈正相关(r=0.67),IL-17 mRNA表达水平与ROR-γt mRNA表达水平有相关性(r=0.35),P值均<0.05。结论:泡球蚴感染宿主早期,主要以Th1型和Th17型细胞免疫为主,感染中后期出现Th1向Th2转化,机体呈现出以Th2细胞为主的优势应答。

二期梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt的检测

目的检测二期梅毒患者血清IL-17,IL-23和维甲酸受体相关孤儿受体γt(ROR-γt)的水平,探讨Th17细胞在梅毒免疫致病机制中的可能作用。方法采用酶联免疫吸附法检测30例二期梅毒患者和20例正常人血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平。结果 30例二期梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平分别为(24.8±20.9)pg/mL,(32.1±8.3)pg/mL和(120.2±40.6)pg/mL,均较健康对照[(12.7±14.2)pg/mL,(21.0±8.7)pg/mL,(72.0±41.8)pg/mL]明显升高(P<0.05)。梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平与RPR滴度间无线性相关(P>0.05)。结论梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平的升高可能与梅毒的免疫致病机制有关。

ROR-γt干扰腺病毒载体抑制Th17细胞功能

目的:设计和构建ROR-γt特异性干扰腺病毒载体,观察其对大鼠脾脏来源的辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)功能的影响。方法:设计ROR-γt编码区干扰序列,DNA聚合酶作用下形成双链序列,与线性化pSES-HUS质粒连接。转入BJ5183,转染病毒包装体系293细胞系,收集细胞,得到病毒液。反复感染4次得到高滴度pSES-HUS-ROR-γt病毒液。将其感染大鼠脾脏来源的Th17细胞,检测其对Th17细胞功能的影响。结果:成功构建和包装pSES-HUS-ROR-γt干扰腺病毒液,Th17细胞感染pSES-HUS-ROR-γt干扰病毒后,其分泌细胞因子白介素(interleukin,IL)-17、IL-6和TNF-γ水平下降。结论:pSESHUS-ROR-γt干扰腺病毒能够有效抑制Th17细胞功能,可能对肾移植慢性排斥反应具有抑制或者延缓作用。

RNA干扰ROR-γt表达对大鼠肾移植模型中Th17细胞功能和慢性排斥反应的作用

目的探讨RNA干扰Th17关键转录因子ROR-γt表达后,对大鼠肾移植慢性排斥模型中Th17细胞功能以及慢性排斥反应的影响。方法构建ROR-γt特异性干扰腺病毒,将其通过尾静脉注入大鼠慢性排斥反应模型,监测大鼠血肌酐变化,酶联免疫吸附试验检测Th17相关细胞因子IL-17、IL-6和TNF-γ改变。4周后检测大鼠肾组织病理改变。结果成功构建ROR-γt特异性干扰腺病毒pSES-HUS-ROR-γt。大鼠慢性排斥反应模型尾静脉注入pSES-HUS-ROR-γt,大鼠血清肌酐水平下降,IL-17、IL-6和TNF-γ水平下降,肾小球纤维化病变减轻。结论 pSES-HUS-ROR-γt特异性干扰腺病毒可以抑制Th17细胞功能,减轻肾移植慢性排斥反应。

瘦素和RORγt mRNA在尖锐湿疣患者外周血中的表达及意义

目的检测RORγt、瘦素在尖锐湿疣(CA)患者外周血中的表达情况,探讨RORγt、瘦素在CA发病中的作用。方法用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测31例CA患者(CA组)、19例健康志愿者(正常对照组)外周血中RORγt mRNA的表达水平,同时用ELISA检测外周血中瘦素的表达情况。结果 CA组患者外周血中RORγt mRNA的表达量为4.705±7.232,正常对照组RORγt mRNA的表达量为0.037±0.055,两组比较差异有统计学意义(t=3.593,P=0.001)。而两组外周血中瘦素的表达分别为:CA组为(2.064±1.861)×10~4pg/mL、正常对照组为(3.035±2.007)×10~4pg/mL,差异无统计学意义(t=-1.739,P=0.088);进一步将CA组分别初发组和复发组,两组瘦素的表达量分别为:初发组为(2.487±1.985)×10~4pg/mL,复发组为(1.294±1.378)×10~4pg/mL,差异无统计学意义(t=1.963,P=0.06)。结论 CA患者外周血中RORγt mRNA的表达升高,提示RORγt可能在CA的发病中起作用,而瘦素在CA发病中的作用尚不明确。

ROR-γt、Foxp3在前列腺增生组织中的表达及意义

目的 探讨维甲酸相关孤儿受体（ROR-γt）、叉状/翼状螺旋转录因子（Foxp3）在前列腺增生（BPH）组织中的表达及临床意义。方法 选取2013年5～12月在本院行经尿道前列腺电切术（TURP）的BPH患者80例作为实验组（根据合并有和无组织学炎症分为实验组1和实验组2）,另取健康男性18～27岁因外伤意外死亡法医及时尸体解剖并伦理委员会同意的5例前列腺组织作为对照组,迅速取出相应前列腺组织保存于液氮中,运用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）检测ROR-γt、Foxp3mRNA的相对表达量,对两组研究对象的ROR-γt与Foxp3关系进行分析。结果 实验组1的ROR-γt mRNA含量明显高于对照组和实验组2（P〈0.05）;实验组1的Foxp3mRNA含量明显低于对照组和实验组2（P〈0.05）;ROR-γt、Foxp3mRNA在伴有组织炎症的前列腺增生组织与无组织学炎症的BPH组织中表达均有相关（r=0.623,P=0.002;r=-0.588,P=0.006）。结论 组织学炎症在BPH生组织中发挥重要作用,ROR-γt介导炎症反应、Foxp3抑制组织学炎症,其共同作用使组织局部微环境中Th17/Treg比例失衡,从而可能导致BPH的发生。

梅毒血清固定患者外周血中Th17/Treg细胞、Foxp3和ROR-γt的表达水平及相关性研究

目的通过检测梅毒血清固定患者外周血Th17/Treg细胞比例及其特异性转录因子叉头状转录因子3(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)的mRNA表达水平以及相关的细胞因子水平,探讨其与梅毒血清固定免疫机制的关系。方法采集60例梅毒血清固定患者(观察组)和60例健康对照者(对照组)的外周血,分离单一核细胞(PBMCs),采用流式细胞仪检测Th17和Treg细胞比例;提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)法检测Foxp3和ROR-γt的mRNA表达水平;采用ELISA法测定PBMCs上清液中IL-17和转化生长因子-β(TGF-β)水平。结果观察组外周血中的Treg细胞比例([9.68±1.54)%]、Foxp3的mRNA([2.85±0.16)%]和TGF-β([275.15±20.89)pg/ml]的表达水平明显高于对照组([5.96±1.27)%、(1.96±0.14)%、(156.33±41.49)pg/ml];观察组中的Th17细胞比例([1.13±0.31)%]、ROR-γt的mRNA([0.98±0.16)%]和IL-17的表达水平([12.21±4.73)pg/ml]明显低于对照组([1.98±0.17)%、(1.85±0.15)%、(18.98±6.89)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血中Treg和Th17细胞比例的变化、Foxp3和ROR-γt mRNA表达水平的异常与梅毒血清固定的免疫机制相关,梅毒血清固定患者可能存在Treg/Th17的失衡,且向Treg细胞漂移。

转录因子ROR-γt与Th17介导的中性粒细胞性哮喘

目的:探讨ROR-γt对Th17介导的中性粒细胞性哮喘信号通路的影响。方法:将24只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组与地塞米松组,每组8只。用鼻腔滴入脂多糖、腹腔注射卵白蛋白及第15天起雾化吸入卵白蛋白引喘共14次的方法制作中性粒哮喘模型。地塞米松组于实验开始后第15天起,按0. 5 mg/kg予以腹腔注射地塞米松,每日一次,共14次。统计各组肺组织病理形态学变化(HE染色)、BALF液白细胞总计数与分类计数、流式细胞术测脾及外周血Th17含量、酶联免疫法测BALF中的TGF-β、IL-6、IL-17含量,免疫组化法及免疫印迹法测ROR-γt蛋白表达,逆转录聚合酶链反应测ROR-γt mRNA的表达。结果:模型组与正常组比较,气道有大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞为主(P<0. 01)。BALF液中TGF-β、IL-6、IL-17含量显著增高(P<0. 01);脾与外周血中Th17含量显著增多(P<0. 01);肺组织中ROR-γt蛋白与mRNA的表达亦显著升高(P<0. 01),而地塞米松组与模型组比较,上述指标皆显著降低(P<0. 01)。结论:中性粒细胞性哮喘可能以Th17的增多为主,IL-17是主要的炎性因子,而ROR-γt是促进Th0向Th17分化的关键转录因子;而地塞米松可以抑制ROR-γt,降低IL-17的含量,从而减轻中性粒细胞性哮喘的发作。

基于Notch1/ROR-γt信号通路研究芹菜素对自身免疫性甲状腺炎小鼠的保护作用

目的探讨芹菜素对自身免疫性甲状腺炎小鼠的保护作用及机制。方法50只雌性BALB/c小鼠采用皮下多点注射猪甲状腺球蛋白联合高碘水的方法构建小鼠自身免疫性甲状腺炎模型,随后将模型小鼠随机均分为模型组(0.9%NaCl溶液)、雷公藤多苷片组[5 mg/(kg·d)]、芹菜素低剂量组[15 mg/(kg·d)]、芹菜素中剂量组[30 mg/(kg·d)]和芹菜素高剂量组[60 mg/(kg·d)],另设空白对照组10只,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水,药物干预14 d。检测各组小鼠血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、TNF-α和IL-1β的水平、SOD活性和MDA含量,HE染色法观察甲状腺组织病理学变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Notch1和ROR-γt蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,模型组的血清TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和MDA的含量明显升高(P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),甲状腺组织可见大量的炎症细胞浸润。甲状腺组织Bax、Notch1和R O R-γt蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。与模型组比较,芹菜素给药组的血清TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和MDA的含量明显降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05),甲状腺组织炎症细胞浸润减少。甲状腺组织Bax、Notch1和ROR-γt蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显上调(P<0.05),呈浓度依赖性。结论芹菜素通过抑制炎症、降低氧化应激水平和抑制甲状腺细胞的凋亡,对自身免疫性甲状腺炎小鼠具有一定的保护作用。

悬灸对哮喘大鼠转录因子ROR-γt、GATA-3及T-bet的影响

目的:探讨ROR-γt与中性粒细胞哮喘、GATA-3和T-bet与嗜酸粒细胞哮喘的相关性及悬灸对他们的影响。方法:将75只SD雄性大鼠按随机数字表法分为5组各15只,包括A组(正常组)、B组(中性粒模型组)、C组(中性粒悬灸组)、D组(嗜酸粒模型组)、E组(嗜酸粒悬灸组),免疫组化法及RT-PCR法检测ROR-γt、GATA-3、T-bet蛋白及基因的表达。结果:中性粒模型组以高表达ROR-γt(显著高于嗜酸粒模型组),而嗜酸粒模型组以高表达GATA-3和T-bet(显著高于中性粒模型组);悬灸后悬灸组与相对应模型组比较各转录因子表达皆有非常显著性降低。结论:中性粒细胞哮喘以ROR-γt转录因子的高表达为主,而嗜酸粒细胞哮喘以GATA-3、T-bet的高表达为主,而悬灸可以调节ROR-γt、GATA-3、T-bet的表达,从而降低哮喘气道炎症反应。

Th17/Treg平衡在类风湿关节炎中作用的研究进展

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性多关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病。虽然目前对于RA的确切发病机制尚不明确,但一般认为和T细胞相关。最近研究发现调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和Th17细胞在RA的发生发展中发挥重要作用。Th17细胞能够分泌促炎症因子IL-17,通过诱导基质金属蛋白酶(ma-trix metallo proteinases,MMPs)和破骨细胞生成,促进骨滑膜炎症、骨和关节损伤;而Treg则通过释放抑制性细胞因子IL-10和TGF-β发挥免疫效应,调控RA中的炎症性免疫应答过程。单独TGF-β作用下诱导初始T细胞分化为Treg,而在TGF-β和IL-6共同作用下诱导初始T细胞分化为Th17细胞,因此,Th17和Treg细胞在特定的细胞因子微环境下可以相互转化。调节Th17/Treg之间的平衡可能成为治疗RA的新方法。该文将对Th17/Treg平衡在RA发生发展中的调节作用作一综述。

Th17细胞与CD4^+CD25^+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的探讨Th17细胞与CD4+CD25+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的作用。方法过敏性紫癜急性期患儿48例,采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的比例,采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+ T细胞IL-17A、IL-17F、转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-6、TGF-β等mRNA表达;同期40例同龄健康儿童作为对照。结果过敏性紫癜急性期患儿CD4+ T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01)。Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6 mRNA表达明显增高(P<0.01)。CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01)。结论Th17等促炎性T细胞高表达和CD4+CD25+调节性T细胞数量减少导致的免疫抑制效应不足,是导致过敏性紫癜免疫失衡的重要原因,IL-6高表达与此密切相关。

过敏性紫癜患者治疗前后其外周血TGF-β和IL-6在纯真CD4^+T细胞分化为Th17细胞和调节性T细胞过程中变化

目的:观察以疏风清热、活血化瘀立法治疗过敏性紫癜(HSP)前后,外周血转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素6(IL-6)在纯真CD4+T细胞(Naive T)分化为辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的过程中的变化。方法:使用流式细胞仪检测36例住院患者治疗前后和健康对照组外周血Th17、Treg的水平,使用实时荧光定量PCR仪检测TGF-β、IL-6和转录因子ROR-γt的水平,比较其差异。结果:(1)HSP患者治疗后与治疗前(急性期)相比较,IL-6和Treg的水平升高(P<0.05),Th17和ROR-γt的水平降低(P<0.05),TGF-β的水平无明显差异(P>0.05);(2)HSP患者治疗前与健康对照组相比较,Th17和ROR-γt的水平明显升高(P<0.05),IL-6和Treg的水平降低(P<0.05),TGF-β的水平无明显差异(P>0.05);(3)HSP患者治疗后与健康对照组相比较,IL-6和Treg的水平升高(P<0.05),Th17和ROR-γt的水平降低(P<0.05),TGF-β的水平无明显差异(P>0.05)。结论:以疏风清热、活血化瘀立法治疗过敏性紫癜,能明显干预患者的外周血TGF-β、IL-6、ROR-γt、Th17及Treg的水平,对患者免疫功能的调节作用明确,临床效果显著,极大的提高了临床诊疗能力。

来氟米特对类风湿关节炎患者Th17细胞免疫调节的影响

目的:探讨来氟米特活性代谢产物A771726对类风湿关节炎(RA)患者外周血Th17细胞的影响及意义。方法:取RA患者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠法阴选出CD4+T辅助细胞(helper T cell,Th),将CD4+T细胞分别与不同剂量的A771726(15、30、60μg/ml)和地塞米松(10-6、10-7、10-8mol/L)共培养48 h,流式细胞术(FCM)检测RA患者外周血Th17/Th百分比;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链技术(即RT-PCR)检测IL-17、ROR-γt mRNA水平。结果:在体外,来氟米特对RA患者外周血CD4+T细胞胞内IL-17、ROR-γt mRNA表达无明显抑制作用,地塞米松可以使CD4+T细胞胞内IL-17、ROR-γt mRNA表达明显减少,随着药物浓度的增加抑制作用更加明显。来氟米特对Th17/Th无明显影响,地塞米松能降低Th17/Th细胞百分比。结论:来氟米特对RA患者外周血Th17细胞无明显影响作用,而地塞米松则可显著降低Th17细胞在Th细胞中的比例。

中晚期鼻咽癌患者CD4^+CD25^+T调节细胞和Th17细胞的免疫病理意义

目的探讨中晚期鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+T调节细胞和Th17细胞的免疫病理意义。方法采用流式细胞术、RT-PCR方法检测15例中晚期鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+T调节细胞、Th17细胞比例和Foxp3、ROR-γt转录活性,并与10例健康体检者相应指标进行比较,分析其免疫病理意义。结果中晚期鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+T调节细胞比例及Foxp3转录活性明显高于健康体检者(P<0.05);而Th17细胞比例及ROR-γt转录活性低于健康体检者(P<0.05)。结论 CD4+CD25+T调节细胞、转录因子Foxp3和Th17细胞比例、转录因子ROR-γt共同构成一个平衡反馈体系,参与中晚期鼻咽癌患者肿瘤微环境中免疫耐受现象的发展及免疫逃逸的发生过程。

利金方降低大鼠Th17细胞/CD4^(+)T细胞比值减轻香烟烟雾提取物引起的炎症反应

目的探讨利金方对香烟提取物诱导的CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化及对炎症的影响及作用机制。方法分离和培养CD4^(+)T细胞,分为空白对照组、香烟烟雾提取物(CSE)组、(0.25、0.5、1.0)mg/mL利金方处理组、Janus激酶2(JAK2)抑制剂AG-490组、信号转导子和转录激活子3(STAT3)抑制剂TG-101348组。利金方处理组和抑制剂组都是先给予相应处理后再进行CSE刺激。流式细胞术检测各组CD4^(+)T细胞、Th17细胞比例,ELISA检测CD4^(+)T细胞培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素17A(IL-17A)水平;实时定量PCR检测CD4^(+)T细胞JAK2、STAT3、维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)的mRNA水平,Western blot法检测CD4^(+)T细胞JAK2、磷酸化的JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、ROR-γt的蛋白水平。结果CSE处理增加Th17细胞/CD4^(+)T细胞比值,培养基中TNF-α、IL-17A含量;ROR-γt的mRNA和蛋白表达增加,JAK2、STAT3磷酸化增加。利金方处理后降低Th17细胞/CD4^(+)T细胞比值,减少TNF-α、IL-17A分泌,抑制ROR-γt的mRNA和蛋白表达以及JAK2、STAT3的磷酸化。结论利金方通过抑制JAK2-STAT3-ROR-γt通路降低Th17细胞/CD4^(+)T细胞比值减轻CSE诱导的炎症反应。

健脾养血解毒方通过调节Treg/Th17免疫平衡改善脾虚-银屑病复合模型小鼠银屑病样皮损

目的:建立脾虚银屑病样小鼠模型,观察健脾养血解毒方对其银屑病样皮损的干预作用,并探讨其作用机制。方法:首先采用苦寒泻下结合营养限制法建立脾虚小鼠模型,持续15 d后检测验证,将脾虚小鼠随机分为单纯脾虚组(脾虚-Ctr)、脾虚银屑病样组(脾虚-IMQ)、阳性对照组(脾虚-MTX)和健脾养血解毒方高、中、低剂量组(JPYXJD-H,M,L),采用咪喹莫特诱导-银屑病样模型。观察各组小鼠皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index,PASI),每日拍照记录;治疗后第6天取材,计算脾脏及淋巴结指数;光镜下观察皮损组织形态学变化及表皮层厚度;免疫组织化学法检测皮损中PCNA和CD3的表达;流式细胞术检测小鼠淋巴结中Treg和Th17细胞数量;RT-PCR技术检测皮损中IL-17A、IL-23、FOXP3、ROR-γt等相关基因表达水平;采用Western Blotting法检测pSTAT3、PPAR-γ通路蛋白表达水平。结果:(1)与对照组小鼠相比,脾虚组表观指征异常明显,血清中D-木糖含量明显降低(P<0.05)。(2)与脾虚-Ctr组相比,脾虚-IMQ组小鼠皮损PASI评分及表皮厚度明显增加,皮损部位PCNA、CD3阳性个数显著增多,IL-17、IL-23、ROR-γt和IFN-γ等炎症因子的表达明显升高,pSTAT蛋白表达升高而PPAR-γ蛋白表达降低的趋势明显。JPYXJD-H、M、L组与其相比各项指标均有不同程度改善,其中以JPYXJD-L组最为显著。结论:健脾养血解毒方在传统理血解毒的基础上强调健脾治法,并依此增加健脾药的使用,从而发挥对脾虚证-银屑病复合模型小鼠皮损的干预作用,通过PPAR-γ/pSTAT3通路调节Treg/Th17之间的免疫平衡可能是其有效作用机制之一。