芍药苷-6-O-苯磺酸酯通过调节JAK/STAT3/RORγ-t/IL-17A信号通路抑制人外周血Th17细胞的分化

目的研究芍药苷-6′-O-苯磺酸酯(CP-25)对体外培养的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中JAK/STAT3/RORγ-t/IL-17A信号通路的调控及对Th17细胞分化的影响。方法从人外周血中分离出PBMCs,将细胞分为空白对照组、TNF-α(10μg·L-1)与包含佛波酯、离子霉素、布雷菲尔德菌素A的细胞刺激混合物(2 mL·L-1)联合刺激组、CP-25组(10μmol·L-1)、艾拉莫德组(80μmol·L-1)、托法替布组(10μmol·L-1),药物作用24 h后,收集细胞进行以下相关检测:CCK-8法检测CP-25对人PBMCs增殖功能的影响;流式细胞术检测p-STAT3、STAT3、RORγ-t和IL-17A在人PBMCs中CD4+Th细胞的表达情况;Western blot检测人PBMCs中p-JAK1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-JAK3、JAK3、p-STAT3、STAT3、RORγ-t、IL-17A蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,CP-25能明显抑制刺激诱导的人PBMCs异常增殖,下调人PBMCs的p-JAK1、p-JAK2、p-JAK3、p-STAT3、STAT3、RORγ-t、IL-17A蛋白表达,降低CD4+Th细胞中p-STAT3、STAT3、RORγ-t的表达和CD4+IL-17A+Th17细胞的百分比。结论CP-25抑制人PBMCs中JAK/STAT3/RORγ-t/IL-17A信号通路,进一步抑制Th17细胞的分化。

外周血白细胞介素-17及RORγt表达对恩替卡韦治疗慢性乙肝患者疗效的预测价值

目的探讨外周血白介素-17(IL-17)及视黄酸相关的孤儿受体(RORγt)表达对恩替卡韦治疗慢性乙肝患者疗效的预测价值。方法从治疗开始收集0周、12周、24周、48周、72周的血清、全血及肝穿刺标本,检测全血及肝组织RORγt mRNA、IL-17 mRNA及血清IL-17。结果血清或肝脏组织标本中,IL-17 mRNA和RORγt mRNA之间均呈正相关(r=0.93,r=0.96,P<0.01)。结论外周血IL-17及RORγt可适度替代肝组织中指标检测用于对恩替卡韦治疗慢性乙肝患者疗效的预测。

实验性自身免疫性脑脊髓炎发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达情况。方法将C56BL/6小鼠分为免疫髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)特异性免疫乳剂的EAE组与免疫未加MOG35-55多肽的免疫乳剂的CFA组,每组16只,分别取100μl免疫乳剂,经腋窝皮下免疫小鼠,于免疫当天及第2天经小鼠尾静脉注射200 ng百日咳毒素(pertussis toxin,PT),建立实验动物模型,并于免疫后进行临床评分;分别于免疫后第7、14和21天取小鼠的淋巴结和脾脏,RT-PCR法检测淋巴细胞相关因子及转录因子IL-17、IFNγ、RAR相关孤核受体γ(RAR-related orphan receptor gamma,RORγ)和T盒子转录因子be(tT-box transcription factor bet,T-bet)基因mRNA转录水平的变化。结果成功建立EAE模型,从免疫后第7天起出现临床症状,EAE组临床评分明显高于CFA组(P均<0.05);免疫后第7、14和21天,EAE组淋巴结和脾脏淋巴细胞中IL-17、IFNγ、RORγ、T-bet基因mRNA转录水平均明显高于CFA组。结论 IL-17、IFNγ、RORγ和T-bet参与EAE疾病的发生发展,且表达量的增加与疾病加重有相关性。