清肺通络敷胸方调控RORγt/Foxp3+干预呼吸道合胞病毒肺炎幼鼠炎性损伤的机制

目的 探讨清肺通络敷胸方调控转录因子维甲酸相关孤儿受体(RORγt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3+)干预呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎幼鼠炎性损伤的机制。方法 将36只SD幼鼠按随机数表法分为正常组、RSV肺炎组、清肺通络敷胸方组,每组12只。RSV肺炎组、清肺通络敷胸方组采用病毒液滴鼻法建立RSV感染模型,正常组给予不含病毒的生理盐水滴鼻,连续3 d。第3天滴鼻后,清肺通络敷胸方组给予清肺通络敷胸膏外敷幼鼠背部,1次/d,连续7 d。每组分别于干预第3天和干预第7天各处死6只幼鼠,HE染色观察肺组织病理学形态,Western blot法检测肺组织中RORγt、Foxp3+蛋白表达情况,RT-PCR法检测肺组织中RORγt、Foxp3+mRNA表达情况,ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)含量。结果 与正常组比较,RSV肺炎组干预第3天和干预第7天幼鼠肺间质增宽,淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润;肺组织中RORγt蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-17含量均明显升高(P均<0.05),肺组织中Foxp3+蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-10含量均明显降低(P均<0.05)。与RSV肺炎组比较,清肺通络敷胸方组干预第3天和第7天肺间质增宽和淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润现象得到明显改善,肺组织中RORγt蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-17含量均明显降低(P均<0.05),肺组织中Foxp3+蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-10含量均明显升高(P均<0.05)。结论 清肺通络敷胸方能够明显减轻RSV肺炎损伤,其可能通过调控RORγt、Foxp3+的表达而起到抑制炎性反应,保护肺组织的作用。

基于RORγt/Foxp3免疫失衡探讨养阴清肺汤加味对支原体感染小鼠免疫微环境的影响

目的基于RORγt/Foxp3免疫失衡机制,观察不同剂量养阴清肺汤加味对肺炎支原体(MP)感染小鼠免疫微环境的影响,探讨中药量-效关系对免疫微环境的动态影响。方法将36只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、阿奇组、养阴清肺汤加味(YQDP)组(低剂量组、中剂量组及高剂量组),除正常组小鼠外,各组小鼠经麻醉后使用1010 CCU/ml的MP菌液滴鼻构建模型成功后予以药物治疗,于用药干预第7天取材。qPCR法检测肺组织中RORγt、Foxp3 mRNA含量,Western blot法、免疫组化法分析肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达情况,HPLC法检测小鼠BALF中DPPC含量,ELISA法检测小鼠血清中TGF-β、IL-17A、IL-10及BALF中SP-A、SP-D含量。结果造模肺组织中RORγt表达增加、Foxp3表达降低,血清中TGF-β、IL-17A含量增高,血清与BALF中IL-10、SP-A、SP-D、DPPC含量下降(P<0.05)。治疗后,小鼠RORγt、TGF-β、IL-17A均降低,Foxp3、IL-10、SP-A、SP-D、DPPC均有不同程度的回升(P<0.05)。结论不同剂量的养阴清肺汤加味均在一定程度上可调控RORγt/Foxp3免疫平衡机制及肺表面活性物质SP-A、SP-D、DPPC动态差异表达,从而影响小鼠肺部免疫微环境的动态变化。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

桧木醇通过TGF-β1/Foxp3/RORγt通路抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 研究桧木醇对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 用0、5、10和20μmol/L桧木醇处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用划痕法检测细胞的迁移、Transwell法检测细胞侵袭能力、流式细胞技术检测细胞凋亡情况、采用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路相关蛋白的表达。结果 与对照组比较,5、10和20μmol/L桧木醇组细胞细胞划痕愈合率、侵袭能力均显著降低(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞划痕愈合率和侵袭能力逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白显著降低(P<0.05),随着桧木醇浓度的升高,TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 桧木醇可以通过抑制乳腺癌细胞中TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路来调节乳腺癌细胞的侵袭、迁移和凋亡,具有成为乳腺癌免疫治疗的潜在靶点。

基于RORγt/FoxP3免疫失衡探讨敷胸方对RSV诱导肺炎性损伤幼鼠免疫微环境的影响

目的研究敷胸方对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导肺炎性损伤幼鼠转录因子孤核受体(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(FoxP3)及其相关细胞因子等表达的影响,揭示敷胸方治疗RSV诱导肺炎性损伤的作用机制。方法将18只幼龄SD大鼠随机分为正常组、模型组、敷胸方干预组,每组6只。模型组、敷胸方干预组给予RSV滴鼻法建立RSV诱导幼龄大鼠肺损伤模型。模型成功后给予敷胸方干预组给予敷胸方敷背干预。HE染色观察肺组织损伤程度,RT-PCR、West-ern blot法检测鼠肺组织中RORγt/FoxP3 mRNA和蛋白表达,Elisa法检测小鼠肺泡灌洗液中细胞转化因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)的表达。结果与正常组相比,模型组肺组织病理损伤评分及湿干比明显增高(P<0.05),Th17特有转录因子RORγtmRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),相关细胞因子IL-17、IL-23明显升高(P<0.05),Treg特有转录因子FoxP3 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),相关细胞因子TGF-β、IL-10明显降低(P<0.05)。与模型组相比,敷胸方干预组肺组织病理损伤评分及湿干比明显降低(P<0.05),Th17特有转录因子RORγtmRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),相关细胞因子IL-17、IL-23明显下降(P<0.05),Treg特有转录因子FoxP3 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),相关细胞因子TGF-β、IL-10明显升高(P<0.05)。结论RSV诱导肺炎性损伤时RORγt/FoxP3及相关细胞因子表达异常,敷胸方干预后可通过调控RORγt/FoxP3及相关细胞因子表达,调节免疫微环境,发挥治疗RSV诱导肺炎性损伤的作用。

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺组织RORγt/FOXP3及TGF-β、Smad3的影响

目的:探讨甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠保护作用的机制。方法:制作AIT大鼠模型,随机分为模型组、甲炎康泰组,每组10只。另选取10只为正常组。灌胃干预8周后,ELISA检测大鼠血清中甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)浓度,甲状腺组织进行HE染色、实时荧光定量PCR检测和免疫组化检测。结果:与模型组比较,甲炎康泰组TPOAb浓度显著降低(P<0.05),淋巴细胞浸润减轻;甲炎康泰组大鼠甲状腺组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),叉头翼状螺旋转录因子P3(FOXP3)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论:甲炎康泰可能通过增强甲状腺组织中TGF-β、FOXP3以及Smad3的表达和抑制RORγt的表达以缓解AIT的发生发展。

基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路探讨芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用

目的基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路观察芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用。方法选用2月龄雌性小鼠30只,随机分为正常组、模型组和芦荟多糖组,每组10只。通过皮下多点注射猪甲状腺球蛋白(PTg)+高碘水法建立小鼠自身免疫性甲状腺炎模型,其中芦荟多糖组灌胃给药300 mg/(kg·d),其余两组灌胃给予等量生理盐水。药物干预4周后分别HE染色观察各组小鼠甲状腺组织病理形态学变化;ELISA法检测各组小鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_(3))、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxine,FT_(4))、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素10(interleukin 10,IL-10)、白介素17(interleukin 17,IL-17)和甲状腺信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT_(3))、维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγt)、叉头状转录因子P3(forkhead box P3,FOXP3)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、IL-10和IL-17水平;免疫荧光法检测FOXP3和IL-17A水平;Western blot法检测TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路关键蛋白表达水平。结果与模型组比较,芦荟多糖明显改善甲状腺组织病理学变化,降低血清TSH、TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和IL-17的水平(P<0.05),升高血清FT3、FT4和IL-10的水平(P<0.01),下调甲状腺组织STAT3、RORγt和IL-17水平(P<0.01),上调甲状腺FOXP3、TGF-β和IL-10水平(P<0.01)。结论芦荟多糖可能通过TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路对小鼠自身免疫性甲状腺炎具有较好的保护作用。

益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺中Aire及ROR-γt/Foxp3相关炎症因子表达的影响

目的研究益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠胸腺中自身免疫调节因子(Aire)及转录因子维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)相关炎症因子表达的影响。方法通过免疫诱导注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段复制EAMG模型,分为正常组、模型组、阳性对照组(强的松)及益气解毒复方高、中、低剂量组,每组10只。观察大鼠行为学及Lennon评分,检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot检测EAMG大鼠胸腺组织中Aire和Foxp3的表达,RT-PCR检测各组大鼠胸腺组织中RORγt的表达情况。结果与治疗前相比,各药物组Lennon分级评分显著降低;与强的松组相比,益气解毒复方各剂量组Lennon评分无明显差异(P>0.05)。RT-PCR结果,模型组胸腺内RORγt mRNA相对表达量明显高于正常组(P<0.05),各药物组胸腺中RORγt mRNA相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。Western blot结果,与正常组比较,模型组Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,各药物组大鼠胸腺中Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著升高(P<0.01)。ELISA结果,模型组大鼠血清IL-6含量明显高于正常组(P<0.01),而TGF-β1含量明显低于正常组(P<0.01);给药后,各药物组IL-6含量明显降低,TGF-β1含量明显升高(P<0.01)。结论益气解毒复方能改善EAMG大鼠肌无力症状,其作用机制可能通过上调Aire蛋白表达,调节免疫炎症反应,影响Th17/Treg分化,从而调控ROR-γt/Foxp3免疫平衡发挥调节自身免疫反应的作用,可能是其治疗MG的作用机制之一。

薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠RORγt、Foxp3的影响

目的探讨薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠的治疗作用及其机制。方法选用DBA1/J小鼠建立鸡Ⅱ型胶原诱导型关节炎小鼠模型(CIA),将造模成功的小鼠采用随机数字表法分为CIA模型组、薯蓣皂苷组、雷公藤多苷组,另设正常对照组,药物组于初次免疫后第21天开始灌胃给药,对照组和模型组给相同体积溶媒。初次免疫第35天处死小鼠,无菌取腹股沟淋巴结制成单细胞悬液,用实时荧光定量PCR技术检测Th17、Treg细胞特异性转录因子RORγt、Foxp3的表达情况。结果模型组与对照组相比,RORγt显著升高(P<0.05);2药物组与模型组相比RORγt显著下降(P<0.05);与模型组相比,薯蓣皂苷组Foxp3显著升高(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可以调节Th17、Treg细胞特异转录因子RORγt、Foxp3的平衡。

NB-UVB对寻常性银屑病患者外周血Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达的影响

目的观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗寻常性银屑病的疗效以及对患者外周血单一核细胞RORγt和Foxp3 mRNA表达的影响,探讨NB-UVB治疗寻常性银屑病的作用机制。方法选取90例中、重度寻常性银屑病患者(进行期45例,稳定期45例),使用NB-UVB照射治疗8周,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法,检测光疗前后外周血转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价临床疗效。同时选50例健康体检者作为正常对照组。结果治疗前,进行期及稳定期银屑病患者外周血RORγt mRNA表达量(9.12±1.46,8.77±1.25)显著高于正常对照组(3.01±0.71),差异有统计学意义(P<0.01);患者RORγt/Foxp3的比值(5.79±1.86,5.21±1.73)也显著高于正常对照组(0.91±0.42)(P<0.01);而Foxp3 mRNA的表达量(1.56±0.92,1.70±0.89)则显著低于正常对照组(3.26±1.05)(P<0.01)。NB-UVB照射治疗8周后外周血RORγt mRNA的表达量及RORγt/Foxp3的比值较治疗前明显下降,而Foxp3 mRNA的表达量较治疗前明显升高,与治疗前相比差异均有统计学意义(P<0.01)。NB-UVB治疗后PASI评分明显下降,与治疗前相比,差异有统计学意义(P<0.01)。总有效率达85.56%。患者治疗前、后PASI评分与RORγt mRNA表达量和RORγt/Foxp3比值呈正相关,而与Foxp3 mRNA的表达量呈负相关(P均<0.01)。结论寻常性银屑病的发生及病情严重程度可能与外周血RORγt mRNA的高表达及Foxp3mRNA的低水平有关;NB-UVB可明显下调外周血RORγt mRNA的表达,上调Foxp3 mRNA的表达,从而调节RORγt/Foxp3比值的失衡,这可能是NB-UVB治疗银屑病的机制之一。NB-UVB治疗各期寻常性银屑病疗效好,安全性高。

不同分期慢性淋巴细胞白血病患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达变化

目的:研究特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA在不同分期慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达情况并探讨其在CLL发病机制中可能的作用及临床意义。方法:选择46例初诊未治疗CLL患者为病例组(其中Binet A期15例,Binet B期16例,Binet C期15例),20名健康人作为对照组,通过荧光实时定量PCR方法分别检测各组外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达。结果:1 CLL患者外周血中T-bet mRNA表达低于正常对照组(P<0.05),GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA的表达均高于正常对照组(P值均<0.05),T-bet/GATA-3与RORγt/Foxp3比值均低于正常对照组(P值均<0.05);2分期越晚,GATA-3 mRNA和Foxp3 mRNA的表达量越高,其中B期和C期的GATA-3 mRNA表达高于A期(P<0.05),C期的Foxp3 mRNA表达高于A期和B期(P<0.05);分期越晚,T-bet/G ATA-3和RORγt/Foxp3比值越低。其中A期的T-bet/GATA-3比值高于C期(P<0.05),A期与B期的RORγt/Foxp3比值均高于C期(P<0.05)。结论:本研究从转录因子层面发现在CLL患者中,随着病程的进展,Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th2和Treg偏移,Treg细胞可能在CLL的发生发展中起着重要的免疫抑制作用。

基于对NOD小鼠颌下腺RORγt、Foxp3及其mRNA调节探讨白芍总苷治疗干燥综合征的作用机制

为了探讨白芍总苷治疗干燥综合征的作用机制,本实验以BALB/c小鼠为正常对照组,将8周龄雌性NOD小鼠24只随机分为模型组、羟氯喹组、白芍总苷组、联合组,每组各6只,白芍总苷组每日灌胃白芍总苷稀释液0.4 mL,羟氯喹组每日灌胃羟氯喹稀释液0.4 mL,联合组每日灌胃白芍总苷+羟氯喹稀释液0.4 mL,模型组和正常组灌胃等体积的生理盐水0.4 mL。8周后摘取颌下腺组织,观察各组小鼠颌下腺病理变化,并用RT-PCR法检测颌下腺组织RORγt mRNA、FoxP3 mRNA的表达。结果显示:小鼠颌下腺病理损害模型组明显较正常组严重,其他组经药物干预后得到不同程度的改善,且联合组明显优于羟氯喹组和白芍总苷组。模型组NOD小鼠颌下腺RORγt mRNA的表达明显高于正常组,而Foxp3 mRNA的表达明显低于正常组,各给药组颌下腺RORγt mRNA的表达高于模型组,且联合组的表达明显低于羟氯喹组和白芍总苷组。联合组颌下腺Foxp3 mRNA的表达低于模型组、羟氯喹组和白芍总苷组,且与模型组相比有显著性差异。研究表明白芍总苷能改善干燥综合征NOD小鼠颌下腺的病理损害,可能通过RORγt/FoxP3介导的Thl7/Treg之间的免疫平衡而起到治疗SS的作用。

电针对高血压前期大鼠血压及血管RORγt、Foxp3表达的影响

目的:观察电针对高血压前期大鼠血压及血管RORγt及Foxp3表达的影响。方法:24只4周龄的雄性自发性高血压大鼠(SHRs)分为模型组、阻断剂组及电针组,每组8只,8只相同周龄雄性大鼠WKY(Wistar-kyoto)为正常组。电针组予电针“人迎”“太冲”穴(2/15 Hz,1 mA,15 min,1次/日);阻断剂组予腹腔注入AG490,5μg/g,1次/日;正常组及模型组仅予抓取与固定;干预2周。采用无创鼠尾血压仪测压,采用RT-PCR、Western blot检测大鼠胸主动脉RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达的变化。结果:4~6周龄SHRs大鼠的血压明显高于同周龄WKY大鼠(P<0.05);阻断剂组在治疗1周时收缩压及舒张压值均低于模型组(P<0.05);而电针组在治疗2周时收缩压低于模型组(P<0.05)。与正常组相比,模型组中的RORγt mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05),Foxp3 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型组比,阻断剂组和电针组RORγt mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05)、Foxp3 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:电针人迎、太冲穴有延缓高血压前期大鼠血压升高的作用,其机制可能与调节血管RORγt及Foxp3的表达有关。

IL-17A抗体抑制变应性鼻炎鼠模型中IL-17A及RORγt并升高Foxp3 mRNA表达

目的:探讨IL-17A抗体对小鼠变应性鼻炎鼻黏膜中IL-17A、RORγt、Foxp3 mRNA水平的影响及意义。方法:以卵清蛋白致敏的Balb/c小鼠变应性鼻炎模型作为实验组,同期以生理盐水替代作为对照组,使用IL-17A抗体治疗作为治疗组。实时定量PCR方法检测三组小鼠鼻黏膜中IL-17A、RORγt、Foxp3mRNA的含量。结果:实验组中RORγt以及IL-17AmRNA水平均较对照组升高(P<0.05),治疗组中RORγt以及IL-17AmRNA的含量均低于实验组(P<0.05)。而实验组中Foxp3 mRNA水平较对照组下降(P<0.0 5),治疗组中Foxp3 mRNA的含量高于实验组(P<0.0 5)。结论:IL-17A抗体抑制变应性鼻炎鼠模型中IL-17A及RORγt mRNA水平并升高Foxp3 mRNA表达水平。

艾灸对克罗恩大鼠结肠RoRγt、Foxp3调节作用研究

目的:观察隔药灸对克罗恩大鼠结肠Th17特异性转录因子维甲酸相关孤核受体γt(Ro Rγt)和Treg特异性转录因子叉头蛋白P3(Foxp3)的表达调节作用,探讨灸法治疗克罗恩病的可能效应机制。方法:SPF级雄性SD大鼠40只,完全随机分为4组,每组10只:正常组、模型组、隔药灸组和西药组(美沙拉嗪),采用三硝基苯磺酸(TNBS)溶液灌肠制备大鼠克罗恩疾病模型,隔药灸组取穴:天枢(双)、气海穴,西药组:美沙拉嗪灌胃治疗。治疗干预结束后,采用HE病理染色、免疫组织化学和Real-time PCR方法观察大鼠结肠降部组织病理学变化、Foxp3 m RNA的表达情况。结果:模型大鼠结肠组织出现克罗恩病的典型病理表现:裂隙状溃疡、黏膜层炎症伴肉芽肿,Th17特异性转录因子Ro Rγt蛋白在模型大鼠结肠黏膜及黏膜下层表达高于正常组大鼠(P<0.01),隔药灸和美沙拉嗪对Ro Rγt蛋白具有下调作用(P<0.01),且美沙拉嗪的调节作用强于隔药灸(P<0.01);Treg细胞特异性转录因子Foxp3及其m RNA在模型大鼠结肠黏膜及黏膜下层表达均低于正常组大鼠(P<0.01),隔药灸和美沙拉嗪对Foxp3及其m RNA都具有上调作用(P<0.01),但两组间比较无统计学差异(P>0.01)。结论:隔药灸可能通过调节克罗恩病模型大鼠结肠黏膜Th17/Treg细胞平衡中特异性转录因子Ro Rγt、Foxp3的表达来发挥改善结肠组织溃疡,缓解肠道炎症的治疗作用。

复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中RORγt、Foxp3表达的影响

目的研究复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中RORγt、Foxp3表达的影响。方法复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备溃疡性结肠炎大鼠模型,大鼠随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪组(5%)及复方芩柏颗粒剂高、中、低剂量组(6%、12%、24%),灌肠给药3周。然后,评估大鼠饮食量、体质量、结肠组织损伤程度,ELISA法测定血清中TGF-β1、IL-17水平,HE染色观察病理变化,Western blot、RT-PCR法检测结肠组织中RORγt、Foxp3蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,复方芩柏颗粒剂组大鼠饮食量、体质量、TGF-β1及IL-17水平、结肠组织损伤程度显著改善(P<0.05,P<0.01),同时可调节RORγt/Foxp3失衡,并呈一定量效关系。结论复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用可能是通过调控RORγt/Foxp3失衡,从而下调IL-17表达来实现。

初发系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞RORγt基因和Foxp3基因的表达

目的通过研究系统性红斑狼疮(systemic lupuseryth ematosus,SLE)患者外周血单核细胞RORγt基因和Foxp3基因的表达,了解两种基因的关系及其对SLE发病的影响,探讨SLE的可能发病机制。方法选取21～40岁初发SLE患者39例为研究对象,同时选取同年龄组33名健康女性作为对照组。荧光实时定量PCR检测外周血单核细胞RORγt基因和Foxp3基因的表达情况。结果(1)SLE组外周血单核细胞RORγt基因和Foxp3基因表达均显著高于正常对照组;(2)SLE患者外周血单核细胞RORγt基因和Foxp3基因表达呈显著正相关。结论SLE的发生与RORγt基因和Foxp3基因表达的升高有关,两种基因的相互作用导致的免疫失衡是引起SLE发生的原因之一。

电针人迎、太冲穴对自发性高血压大鼠模型肾脏组织FoxP3和RORγt的影响

[目的]观察“活血散风”针刺法对高血压前期大鼠肾脏组织叉头转录因子(FoxP3)和维甲酸相关孤独核受体(RORγt)蛋白和mRNA表达的影响。[方法]将16只4周龄自发性高血压大鼠(SHRs)随机分为模型组(SHR组)和电针组(电针+SHR组),每组8只,另将8只同周龄WKY大鼠作为空白对照组(WKY组)。电针组给予针刺人迎、太冲治疗,每日1次,连续治疗2周。采用Softron无创血压仪测量干预前、干预1周、干预2周时的收缩压水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏结构形态,蛋白免疫印迹(Western blot)和聚合酶链反应(PCR)技术检测大鼠肾脏组织FoxP3、RORγt蛋白和mRNA表达情况。[结果]SHR大鼠收缩压水平明显高于WKY组(P<0.05),干预两周后,电针+SHR组收缩压水平明显低于SHR组(P<0.05);SHR组肾脏组织RORγt mRNA表达明显高于WKY组(P<0.05),FoxP3蛋白和mRNA的表达、FoxP3/RORγt比值明显低于WKY组(P<0.05);电针+SHR组肾脏组织RORγt mRNA表达明显低于SHR组(P<0.05),FoxP3蛋白表达、FoxP3/RORγt比值明显高于SHR组(P<0.05);电针干预后SHR大鼠未出现明显的肾脏形态改变。[结论]“活血散风”针刺法可调节FoxP3和RORγt的表达,其对高血压前期大鼠的降压作用可能与调节FoxP3和RORγt的平衡有关。

Treg、FoxP3和TGF-β在慢性髓系白血病中的表达及意义

目的:分析调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子P3(FoxP3)和转化生长因子-β(TGF-β)在慢性髓系白血病(CML)不同时期中的表达及意义。方法:收集2018年3月-2021年3月在菏泽市立医院血液内科就诊的73例CML患者的外周血,根据患者所处的CML不同时期,将患者分为初诊组、慢性期组和急变期组,应用流式细胞术检测患者Treg水平,RT-q PCR检测FoxP3 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验检测血浆中TGF-β的表达水平,分析上述指标在患者临床发病过程中的作用。结果:初诊组患者Treg比例较慢性期组升高,但差异无显著统计学意义(P=0.695),而急变期组较初诊组和慢性期组均显著升高(P=0.008,P<0.001)。初诊组、慢性期组和急变期组FoxP3mRNA表达水平分别为11.61±2.21、6.46±1.35和8.54±2.13,FoxP3 mRNA表达水平在CML不同时期的差异具有统计学意义(F=55.199,P<0.001)。初诊组和急变期组FoxP3 mRNA表达水平均高于慢性期组(P<0.001),且初诊组最高(P<0.001)。TGF-β的表达水平在CML不同时期中无统计学差异(H=0.634,P=0.728)。结论:Treg细胞亚群在CML不同时期中的异常分布和FoxP3 mRNA在CML初诊时和急变期的表达水平显著升高,表明Treg亚群可能通过免疫调节促进CML的发生和进展。

MicroRNA-126调控CD4^+Foxp3^+T细胞的外周诱导及功能

目的探讨Micro RNA-126对CD4^+Foxp3^+Tregs的外周诱导调控及功能的影响。方法分选Balb/c小鼠脾脏CD4^+CD25-初始T细胞,在anti-CD3/CD28的激活下,用TGF-β进行诱导培养,在第3、5天FACS检测CD4^+Foxp3^+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;采用mi R-126抑制剂抑制mi R-126后,FACS检测CD4^+Foxp3^+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;进而采用mi R-126 ASO下调CD4^+Foxp3^+Tregs中mi R-126的表达,Real-time PCR检测IL-10和TGF-β的表达,CFSE标记技术分析CD4^+Foxp3^+Tregs免疫抑制功能。结果 mi R-126在活化的Tregs中的表达高于在活化的CD4^+CD25-T细胞中的表达(P<0.05);TGF-β在体外诱导生成Foxp3^+CD4^+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P<0.05),同时在Tregs的诱导过程中,mi R-126的表达上调(P<0.05);CD4^+CD25-T细胞体外瞬时转染mi R-126抑制剂,与对照组比较,Foxp3^+CD4^+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P<0.05),mi R-126抑制剂能有效下调mi R-126的表达(P<0.05);与对照组相比,mi R-126 ASO转染组Tregs中Foxp3、CTLA-4和GITR的表达均降低(P<0.05),且TGF-β和IL-10的m RNA相对表达均降低(P<0.05);CFSE标记细胞增殖实验显示,mi R-126 ASO Tregs组CD4^+CD25-T细胞增殖与Tcon组、Control Tregs组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论下调mi R-126的表达能显著削弱CD4^+Foxp3^+Tregs的外周诱导和免疫抑制功能。