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长效抑制TIM-3表达增强ROR1嵌合抗原受体修饰的T细胞的抗肿瘤免疫应答
1
作者
夏玉龙
蒋继宏
+6 位作者
金昕
师春青
张小冬
蒋金洲
宋启斌
陈瑞
吴炯
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
2022年第8期1592-1602,共11页
该文探讨了T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,TIM-3)基因沉默对靶向ROR1的嵌合抗原受体(ROR1-CAR)修饰的T细胞增殖和抗肿瘤免疫应答的影响及其作用机制。通过短发夹RNA(short hairp...
该文探讨了T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,TIM-3)基因沉默对靶向ROR1的嵌合抗原受体(ROR1-CAR)修饰的T细胞增殖和抗肿瘤免疫应答的影响及其作用机制。通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)基因沉默技术长效抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达,采用qRT-PCR和Western blot实验检测TIM-3在mRNA和蛋白水平的表达情况;采用ELISA实验验证TIM-3基因沉默的ROR1-CAR T细胞对靶细胞的杀伤能力的影响;流式细胞检测进一步评估抑制TIM-3表达对ROR1-CAR T细胞的靶向杀伤和抗原依赖性的增殖能力的影响。结果显示,shRNA可显著抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达,但不影响ROR1-CAR T细胞的百分比和增殖活性;通过检测发现ROR1阳性的人结肠癌细胞系SW620分泌高水平的TIM-3配体—半乳凝素9(Galectin-9),该配体可直接作用于ROR1-CAR T细胞而发挥免疫负调控作用。另外,长效抑制TIM-3的表达促进了ROR1-CAR T细胞的抗原依赖性的细胞因子释放和增殖。总之,消除ROR1-CAR T细胞表面的TIM-3与肿瘤细胞来源的Galectin-9之间的相互作用可有效增强ROR1-CAR T细胞的抗肿瘤活性。
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关键词
TIM-3
短发夹RNA
ror1-car
T细胞
半乳凝素9
抗肿瘤活性
原文传递
靶向ROR1的嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用
被引量:
5
2
作者
陈玥
莫泽明
+5 位作者
秦笛源
郭福春
廖雪莲
胡敏
陈倩
王永生
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期145-151,共7页
目的探讨靶向Ⅰ型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR1)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)治疗ROR1阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法设计并合成CAR基因,通过慢病毒载体质粒pWPXLd,构建靶向ROR1的CAR-T核...
目的探讨靶向Ⅰ型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR1)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)治疗ROR1阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法设计并合成CAR基因,通过慢病毒载体质粒pWPXLd,构建靶向ROR1的CAR-T核心质粒,采用BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切鉴定,应用流式细胞术检测多种实体瘤癌细胞株表面ROR1的表达,并采用流式细胞术、乳酸脱氢酶(LDH)检测试验检测CAR-T对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用,ELISA检测试剂盒测定培养细胞上清中γ-干扰素(IFN-γ)含量。结果构建的CAR-T质粒双酶切鉴定有CAR基因插入,流式细胞术检测结果显示CAR-T感染效率约为47.23%。多种肿瘤细胞不同程度表达ROR1。流式细胞术、LDH检测试验结果提示CAR-T能特异性地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞。CAR-T针对ROR1阳性靶细胞能释放更多的IFN-γ(P<0.05)。结论成功构建靶向ROR1的CAR-T,并能特异地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞,释放大量IFN-γ,为临床应用提供了实验基础。
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关键词
CAR-T
ror
1
免疫治疗
原文传递
题名
长效抑制TIM-3表达增强ROR1嵌合抗原受体修饰的T细胞的抗肿瘤免疫应答
1
作者
夏玉龙
蒋继宏
金昕
师春青
张小冬
蒋金洲
宋启斌
陈瑞
吴炯
机构
苏州恒康生命科学有限公司研发部
江苏师范大学生命科学学院
武汉大学人民医院肿瘤中心
首都医科大学公共卫生学院
出处
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
2022年第8期1592-1602,共11页
基金
苏州恒康生命科学有限公司研发经费资助的课题。
文摘
该文探讨了T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,TIM-3)基因沉默对靶向ROR1的嵌合抗原受体(ROR1-CAR)修饰的T细胞增殖和抗肿瘤免疫应答的影响及其作用机制。通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)基因沉默技术长效抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达,采用qRT-PCR和Western blot实验检测TIM-3在mRNA和蛋白水平的表达情况;采用ELISA实验验证TIM-3基因沉默的ROR1-CAR T细胞对靶细胞的杀伤能力的影响;流式细胞检测进一步评估抑制TIM-3表达对ROR1-CAR T细胞的靶向杀伤和抗原依赖性的增殖能力的影响。结果显示,shRNA可显著抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达,但不影响ROR1-CAR T细胞的百分比和增殖活性;通过检测发现ROR1阳性的人结肠癌细胞系SW620分泌高水平的TIM-3配体—半乳凝素9(Galectin-9),该配体可直接作用于ROR1-CAR T细胞而发挥免疫负调控作用。另外,长效抑制TIM-3的表达促进了ROR1-CAR T细胞的抗原依赖性的细胞因子释放和增殖。总之,消除ROR1-CAR T细胞表面的TIM-3与肿瘤细胞来源的Galectin-9之间的相互作用可有效增强ROR1-CAR T细胞的抗肿瘤活性。
关键词
TIM-3
短发夹RNA
ror1-car
T细胞
半乳凝素9
抗肿瘤活性
Keywords
TIM-3
short hairpin RNA
ror1-car
T cell
Galectin-9
antitumor activity
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
靶向ROR1的嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用
被引量:
5
2
作者
陈玥
莫泽明
秦笛源
郭福春
廖雪莲
胡敏
陈倩
王永生
机构
四川大学华西医院肿瘤中心生物治疗国家重点实验室
重庆医科大学乳腺外科
出处
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期145-151,共7页
基金
国家自然科学基金(No.81673001)资助
文摘
目的探讨靶向Ⅰ型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR1)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)治疗ROR1阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法设计并合成CAR基因,通过慢病毒载体质粒pWPXLd,构建靶向ROR1的CAR-T核心质粒,采用BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切鉴定,应用流式细胞术检测多种实体瘤癌细胞株表面ROR1的表达,并采用流式细胞术、乳酸脱氢酶(LDH)检测试验检测CAR-T对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用,ELISA检测试剂盒测定培养细胞上清中γ-干扰素(IFN-γ)含量。结果构建的CAR-T质粒双酶切鉴定有CAR基因插入,流式细胞术检测结果显示CAR-T感染效率约为47.23%。多种肿瘤细胞不同程度表达ROR1。流式细胞术、LDH检测试验结果提示CAR-T能特异性地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞。CAR-T针对ROR1阳性靶细胞能释放更多的IFN-γ(P<0.05)。结论成功构建靶向ROR1的CAR-T,并能特异地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞,释放大量IFN-γ,为临床应用提供了实验基础。
关键词
CAR-T
ror
1
免疫治疗
Keywords
CAR-T
ror
1
Immunotherapy
分类号
R730.51 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
长效抑制TIM-3表达增强ROR1嵌合抗原受体修饰的T细胞的抗肿瘤免疫应答
夏玉龙
蒋继宏
金昕
师春青
张小冬
蒋金洲
宋启斌
陈瑞
吴炯
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
2022
0
原文传递
2
靶向ROR1的嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用
陈玥
莫泽明
秦笛源
郭福春
廖雪莲
胡敏
陈倩
王永生
《四川大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
原文传递
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