ROS-NF-κB-p38MAPK通路探索榄香烯联合硼替佐米抗多发性骨髓瘤的机制研究

目的:基于ROS-NF-κB-p38MAPK信号通路探讨榄香烯(ELE)联合硼替佐米(BTZ)抗多发性骨髓瘤的作用机制。方法:CCK-8法检测细胞活性。SPF级裸鼠构建人源性骨髓瘤移植瘤模型,设立对照组(NC组)、BTZ组、ELE组及联合处理组。Tunel染色观察肿瘤组织凋亡,Western Blot检测Caspase-3、Bcl-2、NF-κB及p38 MAPK表达,流式细胞术检测人源性骨髓瘤U266细胞周期、凋亡及活性氧(ROS)表达。结果:当4.0μmol/L ELE联合50 nmol/L BTZ处理U266时,细胞活性均显著低于其他组。BTZ组、ELE组及联合组裸鼠肿瘤体积明显小于NC组(P<0.05),联合组体积最小;Tunel染色显示NC组凋亡水平低于BTZ组、ELE组及联合组(P<0.05),联合组最低;Western Blot结果显示BTZ组、ELE组及联合组Caspase-3及p38 MAPK表达显著高于NC组,Bcl-2及NF-κB表达显著低于NC组。BTZ组、ELE组及联合组细胞凋亡水平及细胞内ROS表达显著高于NC组(P<0.05)。结论:ELE可能通过调控ROS/NF-κB/p38 MAPK信号通路增强BTZ促骨髓瘤细胞凋亡,从而实现其抗肿瘤作用。

水飞蓟素通过共同抑制TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路减轻糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的研究

目的:探讨水飞蓟素通过共同抑制Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)和肿瘤坏死因子α/活性氧簇/P38丝裂原活化蛋白激酶(TNF-α/ROS/P38MAPK)通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的机制。方法:选取健康SD大鼠50只,按随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量水飞蓟素组、中剂量水飞蓟素组、高剂量水飞蓟素组,每组10只。建模成功并治疗8周后,生化分析仪测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys-C)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、24 h尿蛋白(UTP)水平;计算肾脏指数;试剂盒检测各组大鼠肾组织丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;RT-PCR检测各组大鼠TLR4,NF-κB,TNF-α和P38MAPK等mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,模型组体质量、T-AOC均降低(P<0.05),肾脏指数和FBG,Scr,BUN,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均升高(P<0.05)。低、中、高剂量水飞蓟素组体质量、T-AOC水平均低于对照组,且均高于模型组(P<0.05);低、中、高剂量水飞蓟素组肾脏指数和FBG,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均高于对照组,且均低于模型组(P<0.05);低、中剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均高于对照组,且低于模型组(P<0.05);高剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均低于模型组(P<0.05),高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:水飞蓟素可调控TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路,可通过抑制其激活减轻氧化应激、减轻DN大鼠的肾脏损伤。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探究超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响机制。方法:将30只实验兔随机分成正常对照组、2%超分子水杨酸(Salicylic acid,SA)组、30%SA组、夫西地酸组、模型对照组,每组6只,并予以相应外用药物干预,连续4周,并分别于用药2周后、用药4周后检测p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白的表达。结果:结果显示,随着用药时间的延长,各组的p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8均呈下降趋势。用药前,各组间p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白表达均差异无统计学意义(P>0.05)。用药2周后,2%SA组、30%SA组、夫西地酸组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.001);三个用药组之间p38MAPK、NF-κB、IL-1β两两比较差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组IL-8低于30%SA组、夫西地酸组(均P<0.05);30%SA组与夫西地酸组IL-8差异无统计学意义(P>0.05)。用药4周后,三个用药组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.05);2%SA组、30%SA组p38MAPK、NF-κB、IL-8低于夫西地酸组(P<0.05),2%SA组IL-8低于30%SA组(P<0.05);2%SA组与30%SA组p38MAPK差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组、30%SA组与夫西地酸组IL-1β均差异无统计学意义(均P>0.05);2%SA组IL-1β低于30%SA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:超分子水杨酸可通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路来发挥抗炎作用,且随着用药时间的延长疗效也在逐渐增加,并优于夫西地酸。

低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达

目的构建低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)雄性大鼠模型,了解低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达特点。方法将16只SPF级雄性SD大鼠随机分为control组、hypoxic组,每组8只。将hypoxic组大鼠置低压低氧舱(模拟海拔5000 m)饲养、control组置舱外饲养(海拔2260 m),持续28 d。使用右心导管术检测大鼠平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP),分离心脏并称重以计算RVHI;用HE染色法观察肺小动脉病理形态学变化,计算血管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)、血管壁厚度占血管直径的百分比(WT%);用Western Blotting法检测肺组织p38、p-p38、IκBα、p-IκBα、p65、p-p65蛋白的表达水平。结果同control组比较,hypoxic组大鼠mPAP、RVHI升高(P<0.05),大鼠肺小动脉管壁明显增厚,管腔变窄,WA%、WT%升高(P<0.05);hypoxic组大鼠肺组织p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白的表达水平均升高(P<0.05),p-p38/p38、p-IκBα/IκBα、p-p65/p65同样升高(P<0.05)。结论在低氧条件下,HPH雄性大鼠肺组织中的p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平均升高,p38 MAPK/NF-κB信号通路被激活。

黄芪甲苷调控p38 MAPK/NF-κB信号通路改善甲亢大鼠细胞凋亡的机制

目的:通过分析黄芪甲苷干预p38MAPK/NF-κB信号通路,分析其改善甲亢模型大鼠甲状腺组织细胞凋亡的机制。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、甲巯咪唑组和黄芪甲苷低、高剂量组,每组12只。空白组不做处理,其他组制备甲亢大鼠模型后进行干预治疗。比较5组大鼠干预前后基础代谢情况;放疫法检测血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和促甲状腺激素(TSH)的浓度;ELISA法检测大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF含量变化;HE染色观察各组大鼠甲状腺组织病理学改变;TUNEL法检测各组甲状腺组织中的细胞凋亡情况;Western Blot及实时荧光定量PCR法检测各组甲状腺组织中NF-κBp65、p38MAPK蛋白及mRNA表达水平。结果:造模后,与空白组比较,模型组大鼠进食及进水量增加,体质量减少,T3、T4、TSH及IL-1β、IL-6、TNF-α、VEGF含量水平增高(均P<0.05),组织病理损害程度增加,细胞凋亡水平增高,甲状腺组织中NF-κBp65、p38MAPK蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较,甲巯咪唑组及黄芪甲苷干预组大鼠,进食及进水量减少,体质量明显增加,T3、T4、TSH及IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF含量水平降低(均P<0.05),组织病理损害程度明显改善,细胞凋亡水平降低,甲状腺组织中NF-κBp65、p38MAPK蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),其中黄芪甲苷高剂量组改善程度显著优于黄芪甲苷低剂量组(P<0.01)。结论:黄芪甲苷能够有效改善甲亢大鼠甲状腺组织细胞凋亡,降低炎症因子表达,其机制可能与黄芪甲苷能够调控p38MAPK/NF-κB信号通路表达有关。

芳香烃受体通过p38MAPK/p65NF-κB信号通路调节绿脓菌素诱导的巨噬细胞中炎症因子的表达

目的探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对绿脓菌素(pyocyanin PCN)诱导的巨噬细胞RAW264.7中炎性因子表达的影响及其信号通路的调控机制。方法分别采用不同浓度的PCN处理RAW264.7细胞24 h,用CCK8法检测PCN对细胞活性的影响,确定最适PCN浓度制造感染模型。将细胞分为对照组(给予0.1%dimethyl sulfoxide,DMSO)、PCN组、PCN+AhR抑制剂(CH223191)组、PCN+AhR激动剂(FICZ)组,应用免疫荧光法检测AhR的表达情况;ELISA法检测炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的表达水平;Western blot法检测AhR、p-p38MAPK和p-p65NF-κB的蛋白表达情况。结果PCN诱导的RAW264.7细胞中AhR的表达与PCN的浓度具有明显的量效关系;与对照组相比,CH223191使PCN诱导的炎症因子分泌增加,并增强p38MAPK和p65NF-κB的磷酸化能力;FICZ降低了PCN诱导的炎症因子的产生并降低了p38MAPK和p65NF-κB的磷酸化能力。结论AhR能够调节PCN诱导的RAW264.7细胞炎症因子的表达,且p38MAPK/p65NF-κB信号通路可能是AhR参与免疫调节的重要途径。

二甲双胍缓解小鼠放射性皮炎引起的病理性疼痛:基于抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路

目的探讨二甲双胍(Met)对放射性皮炎病理性疼痛的治疗作用及其可能机制。方法将32只SPF级雄性ICR小鼠随机分为4组,即正常对照组(Control组)、放射性皮炎模型组(Model组)、二甲双胍干预组(Met组)及阳性药物加巴喷丁组(GBP组),8只/组。小鼠模型制备成功后,Met组小鼠采用腹腔注射方式给药,每次剂量为200 mg/(kg·d),连续给药16 d,GBP组加巴喷丁灌胃[100 mg/(kg·d)],连续灌胃16 d,Control组及Model组小鼠腹腔内注射与二甲双胍组等体积生理盐水。末次给药后评估各组小鼠放射性皮炎分级情况;分别于建模前及建模后第1、4、8、12、16天观察并记录各组小鼠建模侧(右侧)后足机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL);Westernblot检测脊髓L_(4)~L_(6)节段p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化(p)-p38MAPK、磷酸化(p)-NF-κB p65蛋白表达。ELISA检测脊髓组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与Control组相比,Model组、Met组及GBP组小鼠右后足表现出明显的放射性皮炎症状(P<0.05);与Model组及GBP组相比,Met组放射性皮炎症状减轻(P<0.05)。与Control组相比,Model组小鼠MWT和TWL降低(P<0.05);与Model组比较,Met组及GBP组MWT和TWL明显提高(P<0.05)。与Model组相比,Met组小鼠脊髓组织中p-p38MAPK及p-NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.05),其炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平也明显降低(P<0.05)。结论二甲双胍可缓解放射性皮炎小鼠的病理性疼痛症状,且该作用可能是通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的活化实现的。

益肾通癃汤通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌作用机制研究

目的探讨益肾通癃汤(YSTLD)通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌的作用机制。方法借助miRNA芯片技术检测YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后的miRNA表达谱的变化,筛选miRNA芯片结果中差异显著的miRNA,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞,CCK8法及划痕实验检测miR-145-5p对前列腺癌PC-3细胞增殖与迁移作用;qRT-PCR法及Wstern blot法检测miR-145-5p对TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响;qRT-PCR及Wstern blot法检测YSTLD含药血清对miR-145-5p、TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响。结果miRNA基因芯片检测发现YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后存在35种miRNA表达水平与对照组存在显著差异,其中以miR-145-5p差异最为显著,同时qRT-PCR验证发现YSTLD处理的PC-3细胞中的miR-145-5p水平显著高于DMSO对照组(P<0.05)。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞后,发现miR-145-5p能抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移。过表达miR-145-5p可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB及Bcl-2的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MAPK、p65 NF-κB的蛋白表达水平(P<0.05);YSTLD含药血清在干预前列腺癌PC-3细胞后,可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB、Bcl-2、TRAF1的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MARK、p65 NF-κB、TRAF1的蛋白表达水平(P<0.05)。结论YSTLD可通过上调miR-145-5p的表达水平,抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路促进前列腺癌PC-3细胞凋亡,这可能是YSTLD抗前列腺癌的重要机制。

黄连温胆汤对慢性间歇性低氧代谢综合征大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的观察黄连温胆汤对慢性间歇性低氧代谢综合征(MS)大鼠p38MAPK/NF-kB信号通路的影响。方法将70只大鼠随机分为造模组60只、对照组10只,利用15%果糖水和高脂饲料联合链尿佐菌素构建MS大鼠模型。造模结束后将造模成功的51只大鼠随机分为代谢综合征组(MS组)、慢性间歇性低氧MS组(CIH-MS组)、p38MAPK抑制剂SB203580组(INH组)、黄连温胆汤高剂量组(HLWDT-H组)、黄连温胆汤低剂量组(HLWDT-L组),分别进行相关的干预处理;对照组(CON组)不做任何处理。干预4周后取材,Western-blot法测定各组大鼠主动脉p38MAPK、IκB、p-p38MAPK、p-IκB蛋白表达情况。ELISA法检测各组大鼠血清IL-6、TNF-α、VCAM-1、ICAM-1水平。结果与CON组相比,MS组和CIH-MS组p-p38MAPK、p-IκB显著增高(P<0.01),且CIH-MS组的表达量较MS组高(P<0.01);HLWD-H组、HLWD-L组、INH组p-p38MAPK、p-IκB较CIH-MS组比较表达量减少(P<0.01);HLWD-H组优于HLWDT-L组(P<0.05)。ELISA结果显示,CIH-MS组和MS组IL-6、TNF-α较CON组表达量增高(P<0.01),且CIH-MS组的表达量较MS组高(P<0.01);HLWD-H组、HLWT-L组、INH组IL-6、TNF-α较CIH-MS组比较表达量减少(P<0.01);HLWD-H组优于HLWD-L组(P<0.05)。结论CIH-MS可能通过活化p38MAPK/NF-κB通路造成血管内皮炎症损伤;黄连温胆汤可能通过抑制p38MAPK/NF-κB通路来减轻CIHMS引发的大鼠血管内皮炎症损伤。

牛蒡子苷元通过p38MAPK/NF-κB信号通路抗小鼠气道炎症的作用机制

[目的]探讨牛蒡子苷元(ARC)对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘模型小鼠肺组织病理学改变的影响及作用机制.[方法]取雌性Balb/c小鼠40只,随机分为正常组、OVA组、ARC低、高剂量组和OVA+地塞米松治疗组,每组各8只.采用HE、Masson染色法观察小鼠肺组织病理学改变;利用Diff-Quik染色法计数各组炎性细胞数量;采用Western blot法测定肺组织中p38MAPK、NF-κB p65表达水平.[结果]与正常组比较,OVA组小鼠肺组织炎性细胞浸润明显,气道壁及软组织的结构完整性改变显著,支气管损伤严重(P<0.05).与OVA组比较,ARC低剂量组小鼠肺组织中炎性细胞浸润减轻,气道腔内未见有黏液栓形成,气道损伤有所缓解;ARC高剂量组和OVA+地塞米松治疗组肺组织形态与正常组相似,肺部炎性细胞浸润显著减少(P<0.05);ARC低、高剂量组及OVA+地塞米松治疗组小鼠肺组织支气管肺泡灌洗液中总炎性细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞数量明显减少(P<0.05),p38MAPK、NF-κB p65蛋白表达均显著降低(P<0.05).[结论]A RC可能通过调节p38MAPK/NF-κB信号通路缓解哮喘模型小鼠气道炎症和病理损伤.

中医药调控p38MAPK/NF-κB信号通路防治慢性阻塞性肺疾病研究进展

p38MAPK/NF-κB信号通路主要通过调控炎症反应及氧化应激气道重塑、调控气道黏液高分泌、肺血管及组织重构、调控免疫机制以及细胞凋亡、焦亡对慢性阻塞性肺疾病发挥作用。查阅文献认为,红景天、薯蓣、三七、党参、黄芪、银杏叶、柴胡、鱼腥草等部分中药及其活性成分,中药方剂如清金化痰汤、麻黄发表汤、小青龙汤加减方、壮药龙盘止咳方,对于调控p38MAPK/NF-κB信号通路发挥重要作用,这可能通过调节炎症因子及转录因子的表达、抗炎、免疫调节等作用有关。表明中医药通过干预p38MAPK/NF-κB信号通路、调节炎性因子分泌等方式防治慢性阻塞性肺疾病。调控p38MAPK/NF-κB信号通路有望成为改善COPD患者肺损伤和炎症等反应及预后的新靶点。

三叶青黄酮经p38MAPK和NF-κB途径抑制老年小鼠急性肺损伤

目的探讨三叶青总黄酮(RTFs)对老年小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能机制。方法采用老年C57BL/6J小鼠支气管滴注脂多糖(LPS)诱导ALI模型,三叶青黄酮灌胃给药3 d。取支气管肺泡灌洗液(BALF),瑞氏-吉姆萨染色计算白细胞数,ELISA检测炎症因子水平;ELISA和Western blot分析肺组织MAPKs、NF-κB蛋白表达,Trans AM检测核蛋白NF-κB活性。结果支气管滴注LPS成功诱导ALI模型,三叶青黄酮可明显减少BALF中白细胞和中性粒细胞数(P<0.01),降低IL-1β、IL-6、IL-12p40、TNF-α和s TNF-R1的分泌水平(P<0.01),改善肺组织病理损伤。三叶青黄酮明显抑制肺组织p38MAPK、NF-κB的磷酸化及NF-κB的DNA结合活性(P<0.01)。结论三叶青黄酮抑制p38MAPK、NF-κB炎症通路,保护LPS诱导的老年小鼠ALI。

P38信号通路调控帕金森病小鼠黑质NF-κB和iNOS的表达

目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)信号通路与核因子NF-κB、一氧化氮合酶(inducible nitricoxide,iNOS)之间的关系,通过给予P38 MAPK特异性抑制剂SB203580,研究P38 MAPK信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)小鼠模型的作用机制。方法将小鼠随机分为模型组、干预组和对照组。观察小鼠行为学变化,采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化P38(p-P38)、NF-κB和iNOS的表达变化;以及给予SB203580后对上述变化的影响。结果与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和iNOS表达也明显增加;经SB203580干预处理后,上述变化均减轻。结论 P38 MAPK信号通路可能参与激活NF-κB、iNOS而诱导PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的损伤,采用SB203580抑制P38 MAPK信号通路可对PD模型小鼠多巴胺神经元起到保护作用。

NF-κB p65,p38 MAPK在慢性间歇性缺氧大鼠肺损伤中的表达及意义

目的:探讨反复缺氧条件下,核因子κB(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在慢性间歇性缺氧大鼠肺组织损伤过程中的作用。方法:40只雌性SD大鼠,随机分为对照组和缺氧组,每组20只。缺氧组大鼠每天在自动控制间歇性缺氧试验箱饲养8 h;对照组正常喂养、不加处理。所有大鼠饲养35 d后,取肺组织行HE染色、免疫组织化学测定NF-κB p65和p38 MAPK的表达;Western印迹检测肺组织NF-κB p65的表达。结果:缺氧组大鼠肺组织的病理改变明显;缺氧组肺泡间隔厚度(2.15±0.49)μm,对照组肺泡间隔厚度(0.45±0.12)μm,其差异具有统计学意义(P<0.05)。缺氧组肺组织上皮细胞、纤维细胞、炎性细胞的胞核及胞浆中NF-κB p65及p38 MAPK棕褐色阳性染色表达均明显增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Western印迹结果显示,缺氧组NF-κB p65蛋白水平较对照组明显增加,其差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:NF-κB p65及p38 MAPK信号通路可能在间歇缺氧大鼠肺组织重构的发生发展过程中发挥重要作用。

肾康丸通过p38/NF-κB通路抑制AOPP诱导的足细胞炎症因子MCP-1的表达

目的探讨肾康丸含药血清对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导的体外培养足细胞(MPC5)单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响及其机制。方法制备肾康丸含药血清和AOPP;体外培养MPC5,用不同浓度的肾康丸含药血清刺激不同时间,MTT法检测细胞增殖;用肾康丸含药血清干预AOPP处理的MPC5,Western blot法检测p38MAPK、IκBα蛋白表达,免疫荧光法观察NF-κB p65核转移,ELISA法检测细胞培养上清中MCP-1表达。结果 (1)肾康丸含药血清呈时间和浓度依赖性促进MPC5增殖,最佳作用浓度和时间分别是5%、24 h;(2)AOPP呈浓度和时间依赖性诱导MPC5分泌MCP-1;p38抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂小白菊内酯预孵育能使细胞上清中MCP-1分泌减少;肾康丸含药血清能抑制AOPP诱导MPC5分泌MCP-1;(3)AOPP以浓度依赖的方式增加P-p38蛋白的表达、降低IκBα蛋白的表达;与AOPP组相比,AOPP+肾康丸组MPC5 IκBα蛋白表达增加;AOPP+SB203580组IκBα蛋白表达亦增加,但不及AOPP+肾康丸组;(4)肾康丸含药血清减少AOPP诱导的NF-κB p65核转移。结论肾康丸含药血清能通过p38MAPK/NF-κB途径下调MCP-1表达而发挥抗炎作用,为应用其防治糖尿病肾病提供了新的理论依据。

霍山石斛水提取物通过介导NF-κB/p65和p38 MAPK减轻小鼠酒精性肝损伤

本研究主要探讨霍山石斛水提取物对酒精性肝损伤小鼠的保护作用及其机制。将60只昆明小鼠随机均分成5组,正常组喂饲普通饲料,模型组喂饲普通饲料+52%白酒[12 m L/(kg·bw)]灌胃,低、中、高剂量石斛组喂饲普通饲料+霍山石斛水提取物(1 g/kg、5 g/kg和10 g/kg)灌胃+52%白酒灌胃。40 d后,测肝功能指标(ALT、AST)、氧化应激指标(SOD、MDA)、炎症因子指标(CRP、TNF-α),肝脏做HE染色切片观察,Western blot检测了小鼠肝脏组织中NF-κB/p65和p38 MAPK的磷酸化水平。切片可见,中、高剂量石斛组肝脏组织损伤情况较模型组明显减轻。中、高剂量石斛组较模型组SOD升高(P<0.01),ALT、AST、MDA、CRP和TNF-ɑ降低(P<0.01)。高剂量霍山石斛水提取物可显著抑制酒精性肝损伤诱导的NF-κB/p65和p38 MAPK的磷酸化水平升高。结果表明,霍山石斛水提取物可降低酒精对肝细胞的损伤作用,其作用机制可能是通过介导NF-κB/p65和p38 MAPK发挥抗氧化、抗炎作用来实现的。

p38、NF-κB、IL-6在长期大强度运动诱导大鼠骨骼肌发生中的作用

目的:研究p38、NF-κB、IL-6在长期大强度运动诱导肌肉发生过程中的作用。方法:18只雄性SD大鼠分为3组,C组(安静组)、E组(2周运动组)、I组(2周运动并施加NF-κB阻断剂PDTC)。检测C、E组大鼠腓肠肌的质量、p38、Phospho-p38、p65、Phospho-p65、IL-6mRNA、MRFsmRNA、MEF2cmRNA,I组检测腓肠肌的质量、IL-6mRNA、MRFsmRNA、MEF2cmRNA。结果:与C组相比,E组大鼠腓肠肌的质量、Phospho-p38、Phospho-p65、MyoDmRNA、MyoGmRNA、Myf-5mRNA、MEF2cmRNA上升,但p38、p65、IL-6mR-NA、MRF4mRNA未变;与E组相比,I组大鼠腓肠肌质量、MyoDmRNA、MyoGmRNA、Myf-5mRNA、MEF2cmRNA降低,但IL-6mRNA、MRF4mRNA未改变。结论:p38/NF-κB/MyoD、MyoG、Myf-5、MEF2c介导了长时间运动诱发的肌肉发生过程,但IL-6可能没有参与其中。

P38MAPK对帕金森病MPTP模型小鼠NF-κB和COX-2调控的研究

目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38 MAPK)、核因子NF-κB(nuclear factor kappa B)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)之间的关系,从而研究P38MAPK和NF-κB、COX-2在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)小鼠模型的作用机制,以及人参皂甙Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对P38MAPK信号通路的影响和对多巴胺神经元的保护作用。方法将小鼠随机分为MPTP模型组、Rg1干预剂组和对照组。观察行为学,采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化P38(p-P38)、NF-κB和COX-2的表达变化;并观察给予人参皂甙Rg1后对上述变化的影响。结果与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和COX-2表达也明显增加;经人参皂甙Rg l处理后,上述变化均减轻。结论 P38 MAPK可能通过激活NF-κB、COX-2而诱导帕金森病MPTP模型小鼠黑质多巴胺能神经元(DA)的损伤,P38 MAPK、NF-κB和COX-2在帕金森病的发病过程中可能起重要作用。同时人参皂甙Rg1可能影响P38 MAPK信号通路、NF-κB及COX-2表达而对小鼠多巴胺神经元起到保护作用。

川崎病中IgM-AECA通过JNK、p38及NF-κB诱导内皮细胞ICAM-1的表达

目的川崎病(Kawasaki Disease,KD)大部分病人血清中存在抗内皮细胞受体抗体-IgM(IgM An-ti-endothelial cell antibodies,IgM-AECA)。该研究旨在探讨抗内皮细胞受体抗体(AECA)通过何种途径诱导内皮细胞细胞内吸附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达以激活血管内皮细胞。方法检测30名KD患儿血清IgM-AECA浓度,并从17名AECA阳性KD患儿血清中提纯IgM-AECA,用IgM-AECA直接刺激人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC)后,通过R T-PCR及ELISA方法检测ICAM-1 mR NA及蛋白的表达,同时应用了PD98059,SB203580,dimethylaminopurine(DMAP)和parthenolide,4种蛋白激酶阻断剂观察IgM-AECA通过何种途径激活HCAEC。结果 KD病人血清中的IgM-AECA可使HCAEC的ICAM-1 mRNA及蛋白表达明显增加,SB203580(p38阻断剂)、DMAP(JNK阻断剂)及parthenolide(NF-κB阻断剂)明显抑制ICAM-1的表达(均P<0.01),而PD98059(ERK1/2阻断剂)不能抑制ICAM-1的表达(P>0.05)。结论 KD病人血清中的IgM-AECA通过增强ICAM-1的表达来激活内皮细胞,IgM-AECA通过p38、JNK MAPK及NF-κB通路诱导ICAM-1的表达,IgM-AECA可能在KD冠状动脉病变的发生中发挥重要作用。